杨晓蕾
- 作品数：14 被引量：106H指数：6
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划南京军区医学科技创新课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- B19病毒XA株VP1独特区真核表达系统的建立及鉴定
- 2010年
- 目的:克隆B19病毒XA株VP1u基因,构建真核重组表达载体。方法:从已构建好的B19病毒XA株原核表达载体中获得VP1u基因,将其克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,经酶切鉴定并测序验证后,获得真核表达载体pIRES2-EGFP-VP1u。将其转染至HeLa细胞,提取细胞总蛋白,用Western blot技术检测VP1u蛋白的表达。结果:成功构建了携带人B19病毒VP1u基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-VP1u,荧光显微镜下可见pIRES2-EGFP-VP1u转染HeLa细胞后表达EGFP蛋白而发出绿色荧光,Western blot证明VP1u蛋白在HeLa细胞中表达。结论:成功构建了携带人B19病毒VP1u基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-VP1u并在HeLa细胞中正确表达,为今后B19病毒VP1u基因疫苗的研究奠定基础。
- 迟明迟海峰许东亮王楠聂晓晶杨晓蕾吕香萍张国成
- 关键词：基因克隆
- 雾化吸入重组人干扰素α1b对RSV感染鼠T淋巴细胞亚群的影响
- 刘瑞清杨晓蕾李秋红吴海霞黄可飞张国成邓军霞林海波刘雪许东亮徐晓丽
- 西安地区手足口病患儿咽拭子中EV71的检测及分离鉴定被引量：7
- 2010年
- 目的对2009年儿科门诊22例疑似手足口病患儿的咽拭子标本进行EV71病毒检测及分离鉴定。方法采集的咽拭子标本分别接种于人横纹肌瘤细胞(RD细胞),盲传3代,若细胞圆缩、分散、胞浆内颗粒增加,即出现致细胞病变效应(CPE),运用RT-PCR方法检测标本和细胞培养物上清液中的EV71,提取RNA,分离鉴定。结果标本直接用RT-PCR法扩增,阳性率为31.8%(7/22),经细胞培养后出现CPE的阳性率为45.5%(10/22),培养后经RT-PCR再检测阳性率为68.2%(15/22),所分离的病毒株基因序列同GENEBANK中报道的EV71(序列号EU812461)序列完全一致。结论病毒分离和RT-PCR 2种检测方法联合应用可以提高肠道病毒EV71的阳性检出率,为临床诊断提供有力依据。
- 刘颖悦张国成许东亮豆玉凤黄娜杨晓蕾
- 关键词：肠道病毒71型手足口病病毒分离逆转录聚合酶链反应
- 尿肺炎链球菌抗原测定快速诊断儿童社区获得性肺炎病原的临床研究被引量：3
- 2014年
- 目的 了解尿肺炎链球菌抗原测定用于辅助诊断儿童社区获得性肺炎病原的临床意义.方法 选取2011年6月至2012年10月第四军医大学西京医院儿科住院的233例社区获得性肺炎患儿,对所有患儿同时采集尿标本和痰标本,用BinaxNOW法测定尿肺炎链球菌抗原,对痰标本进行分离培养与鉴定.结果 1.尿肺炎链球菌抗原阳性率为33.5％（78/233例）,痰培养肺炎链球菌阳性率为27.9％（65/233例）,二者比较差异有统计学意义（x2 =4.12,P＜0.05）;2种方法联合检出肺炎链球菌阳性率为39.5％（92/233例）,一致性检验Kappa指数为0.588.2.以痰培养肺炎链球菌阳性为参考标准,尿肺炎链球菌抗原测定的灵敏度为78.5％,特异度为83.9％,准确度为82.4％.3.≤3岁患儿的尿肺炎链球菌抗原阳性率高于＞3岁患儿（40.0％比26.5％,x2 =4.728,P＜0.05）.结论 在辅助诊断儿童社区获得性肺炎时,尿肺炎链球菌抗原测定优于痰培养,2种方法联合检验肺炎链球菌一致性效果较好,可提高其检出阳性率.相对于痰标本诊断肺炎链球菌感染,尿抗原测定具有较高的灵敏度、特异度和准确度,可用于临床辅助快速诊断儿童社区获得性肺炎的病原,尤其适用于≤3岁患儿.
- 林海波白琼张国成许东亮吕香萍徐晓丽杨晓蕾李秋红吴海霞
- 关键词：抗原儿童
- 西安地区EV71-VP1基因分析被引量：3
- 2010年
- 目的:通过在原核表达系统初步构建EV71-VP1,对西安地区肠道病毒71型(EV71)的外壳蛋白VP1基因进行分析。方法:采集西安地区手足口病患儿的疱液、咽部分泌物进行病毒分离和RT-PCR检测;通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白VP1基因,构建重组表达质粒PQE30/VP1,转化到大肠杆菌BL21中,对VP1基因进行遗传学分析。结果:对肠道病毒71型(EV71)西安地方株VP1基因测序,并将其与阜阳株(序列号为EU913471)相比较,表明我国西安地区EV71分离株与阜阳株有较大差别,核苷酸差异约为4%。结论:西安地方株VP1基因与阜阳株相比,其核苷酸差异较为明显。这将为西安地区EV71的分子流行病学研究以及EV71所致疾病的预防和控制,打下良好的基础。
- 黄娜张国成许东亮豆玉凤刘颖悦杨晓蕾
- 关键词：肠道病毒71型VP1基因逆转录聚合酶链反应
- 先天性心脏病与母亲孕期感染关系的研究被引量：22
- 2010年
- 目的探讨先天性心脏病(CHD)与母亲孕期感染的关系。方法问卷式调查、统计母孕期感染史;采用ELISA法对孕妇的血清进行各病原体包括人细小病毒B19(HPV19)、弓形体(TOX)、风疹病毒(RV)、单纯疱疹病毒2(HSV2)、巨细胞病毒(CMV)抗体检查。结果①36例病例组(CHD组)和72例对照组(Non-CHD组)母孕期感冒、腹泻、乙型肝炎、阑尾炎的发病率及饲养宠物率分别为63.9%、5.6%、5.6%、2.8%、5.6%和38.9%、4.2%、2.8%、0%、1.4%,其中孕早期(胎龄<12周)与孕中后期(胎龄≥12周)感冒的发病率分别为44.4%、19.5%和16.7%、22.2%,比较孕期感冒,尤其孕早期感冒在两组中的感染率差异有统计学意义(P均<0.05),而腹泻、乙肝、阑尾炎的感染率及饲养宠物率两组差异无统计学意义(P>0.05)。②病例组和对照组母孕20～38周的血清中HPVB19、TOX、RV、HSV2的IgG的阳性率分别为38.9%、22.2%、27.8%、33.3%、8.3%和12.5%、4.2%、5.6%、29.2%、5.6%,两组IgM的阳性率分别为13.9%、2.8%、8.3%、11.1%、0%和4.2%、1.4%、0%、6.9%、1.4%,两组比较HPVB19、TOX、RV的IgG阳性率差异有统计学意义(P<0.05),CMV、HSV2阳性率两组差异无统计学意义(P>0.05),HPVB19、TOX、RV、CMV、HSV2的IgM阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论先天性心脏病与母亲孕期感冒,尤其孕早期感冒有关;先心病胎儿的母亲孕前和(或)孕早期感染HPVB19、TOX、RV可能与先天性心脏病有关,需进一步对引产先心病胎儿心肌组织进行相关病原体基因检测来验证这一结论。
- 郭彦孜张国成苏海砾李军许东亮杨晓蕾豆玉凤
- 关键词：先天性心脏病孕期
- 快速诊断人细小病毒B19感染方法学比较研究
- 2013年
- 目的比较本实验室自行构建的ELISA法与德国ELISA试剂盒方法及PCR法快速诊断人细小病毒B19感染的临床应用价值。方法血液标本215份,分别采用B19病毒VP1独特区(VP1u)蛋白包被ELISA板建立B19病毒抗体检测方法(自行构建ELISA法),德国ELISA试剂盒方法检测标本B19病毒IgM与IgG,并采用PCR法检测B19病毒DNA,分析自行构建ELISA法检测B19病毒的敏感性、特异性及准确度。结果自行构建的B19病毒ELISA体系最佳抗原包被量为25ng/孔,最佳标本血清稀释倍数为1∶200;以德国B19病毒ELISA试剂盒为对照,自行构建ELISA法检测B19病毒IgM的敏感性、特异性及准确度分别为79.07%,87.18%,94.89%,检测B19病毒IgG的敏感性、特异性及准确度分别为88.46%,90.79%,93.53%;以PCR法检测B19病毒DNA为标准,自行构建ELISA法检测B19病毒IgG的敏感性、特异性及准确度分别为90.32%,77.77%,95.71%。结论本实验室自行构建的ELISA检测方法与德国B19病毒抗体检测ELISA试剂盒法及PCR法检测B19病毒DNA有较好一致性,可作为B19病毒感染常规诊断方法。
- 许东亮张国成聂晓晶成胜权孙新李志宏杨晓蕾吕香萍
- 关键词：人细小病毒B19ELISAPCR
- cdx2基因在儿童白血病的表达及临床意义研究被引量：6
- 2011年
- 本研究旨在探讨cdx2基因在儿童急性白血病骨髓及外周血单个核细胞中的表达及临床意义。采取33例初发儿童白血病患儿骨髓及外周血,运用RT-PCR方法检测cdx2基因在各型白血病及正常对照组中的表达,随访25例并观察其与疗效的关系。结果发现,病例组中30例急性白血病(AL)患儿cdx2表达阳性25例(83.3%),30例中21例急性淋巴细胞白血病(ALL)和9例急性髓细胞白血病(AML)cdx2表达阳性分别为20例(95.2%)和5例(55.6%),两组相比有统计学意义(p<0.05);3例慢性粒细胞白血病(CML)中1例cdx2表达阳性。对照组20例健康体检者外周血cdx2表达阴性,与病例组比较差异有统计学意义(p<0.01)。25例AL患儿cdx2阳性21例(ALL17例,AML4例)与阴性者4例(ALL1例,AML3例)经治疗后均达到完全缓解(CR)。cdx2是否阳性表达可能与CR率无相关关系。对8例cdx2表达阳性AL患儿治疗后动态观察,结果初诊cdx2阳性表达在CR时仍阳性,但随着CR延长cdx2表达逐渐转为阴性,而初诊时cdx2阴性表达在骨髓CR时仍为阴性。结论:cdx2在儿童AL患者中广泛高表达,ALL者该基因表达阳性率高于AML患儿。CML患儿中也有cdx2表达;cdx2基因表达与AL患者CR率无明显相关。
- 李迎侠潘凯丽范芳钱新宏杨晓蕾邓跃林刘雨东
- 关键词：CDX2基因白血病基因表达
- 实时荧光定量PCR快速诊断肠道病毒71型感染被引量：11
- 2012年
- 目的探寻快速准确早期诊断肠道病毒71型(human enterovirus 71,EV71)感染的方法。方法手足口病患儿871例,采用实时荧光定量PCR检测患儿咽拭子或疱液的EV71感染情况,实时荧光定量PCR检测EV71阳性患儿采用ELISA法检测血清EV71-IgM和EV71-IgG。结果871份标本中,RT-PCR检测EV71感染阳性率为17.91%,其中5月份检测阳性率(24.44%)最高,12月份检测阳性率(4.17%)最低;随机抽取64例RT-PCR检测阳性患儿外周血,EV71-IgM阳性率为51.56%,EV71-IgG阳性率为14.06%。结论 RT-PCR能快速准确诊断EV71早期感染。
- 许东亮聂晓晶张国成钱新宏杨晓蕾邓军霞李玲莉
- 关键词：肠道病毒71型实时荧光定量PCR手足口病
- 先天性心脏病危险因素的病例对照初步研究被引量：15
- 2011年
- 目的探讨西安地区先天性心脏病(CHD)的危险因素,为CHD的科学预防及其病因学研究提供参考依据。方法采用前瞻性、以医院为基础的病例对照研究。对在西京医院进行胎儿心脏超声检查的637名孕妇进行问卷式调查、统计CHD的危险因素;经胎儿尸检或婴儿生后复查心脏超声确诊CHD和非CHD(non-CHD);对98例病例组(CHD组)和196例对照组(non-CHD组)进行1:2病例对照研究,应用χ2检验、单因素和多因素Logistic回归分析CHD的危险因素。统计软件采用SPSS13.0软件包。结果按α=0.05水准,用χ2检验对59个研究因素进行分析,初步筛选出32个可疑危险因素,再经单因素Logistic回归分析从32个可疑危险因素中筛出13个CHD的危险因素,最后进行多因素Logistic回归分析,最终筛选出6个CHD的主要危险因素。(1)单因素Logistic回归分析结果表明13个CHD的危险因素:孕早期接触射线(OR=10.482)、孕早期饲养宠物(OR=8.668)、孕早期饮酒(OR=6.326)、发现怀孕周数晚(≥13周OR=11.158)、严重早孕呕吐(OR=2.369)、孕期12周前感冒发热(OR=6.334)、孕早期住地离最近交通主干道的距离(<50mOR=3.223,50～100mOR=7.877)、住地或单位附近污染企业(OR=7.617)、孕期负性生活事件(≥10个OR=3.628)是CHD的危险因素;孕妇孕期12周前补充复合维生素(OR=0.535)及叶酸(OR=0.519)、孕期经常食用蛋肉鱼水产品、牛奶及豆制品可降低CHD的患病风险。(2)多因素非条件Logistic回归分析结果表明6个CHD的主要危险因素:孕早期接触射线、孕早期饮酒、孕早期住地离最近交通主干道的距离、住地或单位附近污染企业是CHD发生的主要危险因素;孕期经常食用蛋肉鱼水产品、牛奶及豆制品可降低CHD的患病风险。结论孕早期是胎儿心脏发育的关键时期,孕早期接触射线、孕早期饮酒、孕早期住地离最近交通主干道的距离、住地或单位附近污染企业等4项是CHD发生的主要危险因素
- 郭彦孜张国成苏海砾李军许东亮杨晓蕾
- 关键词：先天性心脏病病例对照研究
