杨文娟
- 作品数：7 被引量：15H指数：2
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- 靶向RhoA基因的shRNA对卵巢上皮性癌裸鼠移植瘤的影响及作用机制
- 2013年
- 目的探讨靶向RhoA基因的短发夹状RNA（shRNA）对卵巢上皮性癌（卵巢癌）裸鼠移植瘤的影响及可能的抗肿瘤作用机制。方法建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型，应用随机数字表法将荷瘤裸鼠随机分为3组，即实验组（予携带靶向RhoA基因的shRNA慢病毒液治疗）、阴性对照组（予携带针对随机无关序列的shRNA慢病毒液治疗）、空白对照组（予磷酸盐缓冲液），比较3组裸鼠的移植瘤生长情况，包括移植瘤生长速度、肿瘤体积、肿瘤质量；光镜下观察3组裸鼠移植瘤及主要器官组织的病理形态学特征。采用实时荧光定量PCR技术、免疫组化SP法和蛋白印迹法检测移植瘤组织中RhoAmRNA和蛋白的表达；脱氧核苷酸末端转移酶介导的核苷酸缺口末端标记（TUNEL）法检测3组裸鼠移植瘤细胞的凋亡情况[以凋亡指数（AI）表示]。结果（1）自治疗开始的第9天起，实验组裸鼠移植瘤的生长速度滞后于阴性对照组和空白对照组，差异均有统计学意义（P〈0．01）。治疗结束后10d，实验组裸鼠的移植瘤体积为（338±114）mm^3，小于阴性对照组和空白对照组[分别为（1190±332）和（1101±396）mm^3]，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）；实验组裸鼠平均肿瘤质量为（0．23±0．11）g，低于阴性对照组和空白对照组[分别为（0．79±0．19）、（0．74±0．17）g]，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。而阴性对照组裸鼠移植瘤的生长速度、移植瘤体积、肿瘤质量分别与空白对照组比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。光镜下观察，实验组肿瘤细胞呈大片坏死区域且核固缩多见，而阴性对照组和空白对照组肿瘤细胞无明显变化。（2）实验组裸鼠移植瘤组织中，RhoAmRNA的表达水平为0．304±0．05，低于阴性对照组的0．95±0．06和空白对照组的1．00±0．11，分别比较，差异均�
- 蒋文燕康佳丽王小霞杨文娟聂妙玲周聪
- 关键词：异种移植模型抗肿瘤试验
- 慢病毒和质粒作为shRNA载体沉默人卵巢癌RhoA基因效果的比较被引量：6
- 2013年
- 目的研究慢病毒和质粒作为RNA干扰载体在沉默卵巢癌RAS同源基因家族成员A(RhoA)基因表达方面的差异。方法分别将慢病毒及质粒载体携带的针对RhoA基因的siRNA序列感染或转染卵巢癌HO8910细胞,经过嘌呤霉素筛选建立稳定沉默RhoA基因的细胞株。通过荧光显微镜观察、实时荧光定量PCR、Western blot法、血管形成实验、细胞划痕实验研究两种载体随着细胞培养代数的增加在抑制卵巢癌RhoA基因表达及侵袭和转移能力上的差异。结果采用质粒载体及慢病毒载体分别建立人RhoA基因稳定沉默卵巢癌细胞株,通过荧光显微镜观察,质粒组细胞绿色荧光蛋白的表达率随培养代数的增加而下降;第15代、第25代时表达率分别为70%、45%,而慢病毒组细胞绿色荧光蛋白表达率维持在95%以上,实时荧光定量PCR及Western blot法发现质粒组和慢病毒组细胞在第3代时RhoA mRNA及蛋白的表达无明显差异;随培养代数的增加,慢病毒组RhoA mRNA及蛋白持续低表达,而质粒组RhoA mRNA及蛋白的表达逐渐增高;细胞划痕实验及血管形成实验表明慢病毒较质粒作为载体介导siRNA对RhoA基因沉默更能持续稳定地抑制卵巢癌细胞的侵袭、转移(P<0.05)。结论慢病毒较质粒作为载体介导RNA干扰能更好沉默目标基因的表达。
- 杨文娟康佳丽王小霞刘启才聂妙玲
- 关键词：慢病毒质粒RNA干扰RHOA基因卵巢癌
- RhoA基因沉默抑制卵巢癌腹腔移植瘤恶性生物学行为的研究
- 2013年
- 目的:研究慢病毒介导RhoA基因沉默对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤生长、侵袭及转移等恶性生物学行为的影响。方法:21只裸鼠随机分为HO8910-RhoA-shRNA组、HO8910-RhoA-NC组和HO8910组,每组7只。细胞接种法建立人卵巢癌腹腔移植瘤模型,每2天测量腹围。4周后解剖裸鼠,大体观察,测定腹水量,统计肿瘤播散器官数及瘤结节数。称量瘤体重量,并计算抑瘤率。镜下观察,应用HE染色分析移植瘤病理形态学特点。实时荧光定量PCR和Western blot检测移植瘤RhoA mRNA和蛋白表达情况。TUNEL技术检测移植瘤凋亡指数(apoptotic index,AI)。结果:与HO8910-RhoA-NC组和HO8910组比较,HO8910-RhoA-shRNA组裸鼠腹围增长明显滞后(P<0.05),腹水量明显减少(P=0.01),肿瘤播散器官数、瘤结节数及瘤体重量均明显减少(P均<0.001),抑瘤率达70.62%。RhoA基因mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P均<0.001)。凋亡指数AI明显升高(P<0.001)。结论:慢病毒靶向沉默RhoA基因能显著抑制人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的恶性生物学行为。
- 蒋文燕康佳丽王小霞杨文娟聂妙玲周聪
- 关键词：RHOA异种移植模型抗肿瘤试验肿瘤浸润
- 血清CA125和Cyfra21-1在子宫内膜腺癌中的表达及临床意义被引量：4
- 2013年
- 目的探讨血清糖类抗原125(CA125)及血清细胞角蛋白片段抗原21-1(Cyfra21-1)在子宫内膜腺癌中的表达及临床意义。方法回顾性分析49例子宫内膜腺癌患者(A组)及46例正常子宫内膜者(B组)术前血清CA125及Cyfra21-1的水平,并与术后病理结果等临床资料进行临床对比分析。结果 A组术前血清CA125及Cy-fra21-1水平显著高于B组;血清CA125及Cyfra21-1诊断子宫内膜腺癌的敏感度分别为26.53%及28.57%,联合检查能提高诊断,敏感度为40.82%。晚期子宫内膜癌患者血清CA125及Cyfra21-1检测阳性率显著高于早期患者(P<0.05)。结论术前联合检测血清CA125及Cyfra21-1有助于子宫内膜腺癌的诊断,术前检测血清CA125及Cyfra21-1的阳性结果反应子宫内膜腺癌患者的期别晚及预后不良的风险增高。
- 聂妙玲康佳丽程杨杨宇王小霞陈静杨文娟
- 关键词：子宫内膜腺癌糖类抗原125
- 靶向RhoA shRNA对卵巢癌HO8910细胞体外侵袭能力影响的研究被引量：1
- 2012年
- 目的:观察RNA干扰(RNAi)技术对卵巢上皮癌HO8910细胞株RhoA基因表达的抑制作用,探讨其对HO8910细胞侵袭、迁移的影响。方法:构建RhoA基因特异性短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,以脂质体介导转染卵巢癌细胞HO8910,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测RNAi后HO8910中RhoA的mRNA及蛋白表达水平变化,Transwell小室体外侵袭和划痕试验检测细胞侵袭和迁移能力。结果:转染RhoA shRNA(质粒1、2和3)组的RhoA mRNA的表达明显弱于未转染任何质粒的空白组和对照组,P<0.05,且质粒2组表达最低(27.9%),抑制效率最高(72.1%),具有序列特异性。转染序列特异性RhoA shRNA的细胞(实验组)与对照组比较,RhoA蛋白的表达分别为(6.08±2.24)%和(59.25±17.96)%,P<0.05;细胞平均侵袭能力测值为18.82±2.61和35.25±5.12,P<0.05;愈合百分比为(43.80±6.21)%和(69.35±4.42)%,P<0.05。结论:靶向RhoA的shRNA可抑制卵巢癌HO8910细胞RhoA基因的表达,能降低细胞体外侵袭和迁移能力。
- 王小霞康佳丽聂妙玲杨文娟
- 关键词：RHO因子实时荧光定量PCR肿瘤浸润
- 慢病毒介导RhoA基因沉默对卵巢癌细胞侵袭和迁移的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:建立慢病毒介导RhoA基因稳定沉默卵巢癌HO8910细胞株,研究RhoA基因对HO8910细胞侵袭和迁移的影响。方法:构建靶向沉默RhoA基因的慢病毒载体Lenti-U6-shRhoA,将其感染HO8910细胞,经过嘌呤霉素筛选,建立稳定沉默RhoA基因的HO8910细胞。实时荧光定量PCR检测HO8910细胞中RhoA mRNA的表达;MTT检测HO8910细胞的增殖;Transwell体外迁移和侵袭实验检测RhoA基因沉默对HO8910细胞侵袭和迁移的影响。结果:成功构建靶向RhoA基因的慢病毒载体Lenti-U6-shRhoA,建立了RhoA基因稳定沉默的HO8910细胞。与Lenti-U6-NC对照组对比,RhoA基因稳定沉默HO8910细胞RhoA mRNA的表达明显降低[(30.7±5.40)%vs(95.9±6.53)%,P<0.05];沉默RhoA基因能降低HO8910细胞的存活率[(51.16±7.41)%vs(95.67±2.14)%,P<0.05];RhoA基因沉默组HO8910细胞的侵袭、迁移及黏附能力较Lenti-U6-NC对照组明显受到抑制[迁移穿过人工基底膜细胞数(31±6)vs(84±13)个,P<0.05;穿过微孔膜的细胞数(97±12)vs(689±23)个,P<0.05;黏附率(68.16±6.53)%vs(98.71±4.92)%,P<0.05]。结论:慢病毒介导的RhoA基因沉默能抑制卵巢癌HO8910细胞的侵袭和迁移。
- 杨文娟康佳丽王小霞刘启才王冬昱贾菡
- 关键词：慢病毒RHOA基因卵巢癌
- 超声检查联合血清CA199检测在卵巢成熟型畸胎瘤诊断中的价值被引量：2
- 2013年
- 目的探讨超声检查联合血清CA199检测在卵巢成熟型畸胎瘤诊断中的临床价值。方法回顾性分析133例卵巢成熟型畸胎瘤患者及59例卵巢浆液性囊腺瘤患者在术前进行的超声检查结果及血清CA199的检测水平,并与术后病理结果对比分析。结果超声诊断卵巢成熟型畸胎瘤的敏感度为83.46%,特异度为98.31%,准确度为88.02%;术前血清CA199检测诊断卵巢成熟型畸胎瘤的敏感度为46.62%,特异度为94.92%,准确度为61.46%;两种方法联合平行检测,敏感度为90.98%,特异度为93.22%,准确度为91.67%。结论超声检查联合血清CA 199检测可提高卵巢成熟型畸胎瘤诊断的敏感度和准确度,对卵巢成熟型畸胎瘤的诊断具有很好的临床实用价值。
- 聂妙玲康佳丽王小霞邓玲红余佳陈静杨文娟
- 关键词：卵巢成熟型畸胎瘤超声检查CA199
