杨小康
- 作品数：24 被引量：61H指数：5
- 供职机构：安徽理工大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金国家级大学生创新创业训练计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 多重PCR快速诊断单纯疱疹病毒、真菌及棘阿米巴角膜炎被引量：3
- 2014年
- 目的建立多重PCR体系对单纯疱疹病毒(HSV)、真菌及棘阿米巴性角膜炎同时诊断,并对真菌性角膜炎主要致病真菌进行菌属鉴定。方法建立两个多重PCR体系,检测HSVⅠ型、HSVⅡ型、4株棘阿米巴分离株及9种主要真菌性角膜炎致病真菌,比较该体系对真菌临床菌株、人类基因组及其他血液常见致病微生物的检测效果。结果根据DNA模板,该体系可扩增出不同特异性条带,能够准确检测HSV和棘阿米巴,并将9种待测真菌分为4个菌属。84株真菌受试菌株中81株的鉴定结果与常规鉴定结果一致。该体系对人类基因组及其他血液常见致病微生物DNA的扩增结果均为阴性。模板最低阳性扩增的浓度均为10 fg。结论通过两个多重PCR体系可同时诊断HSV、真菌及棘阿米巴性角膜炎,并可将真菌性角膜炎在菌属水平进行鉴定。该方法具有高效、简便、特异、灵敏的特点,具有较好的临床应用前景。
- 吴静胡东杨小康张荣波顾志波孙丹张世武
- 关键词：单纯疱疹病毒性角膜炎真菌性角膜炎棘阿米巴角膜炎多重PCR
- 不同形态的烟曲霉对巨噬细胞自噬水平的影响被引量：4
- 2014年
- 目的探究烟曲霉静息孢子、膨胀孢子以及菌丝对巨噬细胞自噬水平的影响。方法培养烟曲霉并收获静息孢子,在沙保弱液体培养基中振荡不同时间获得膨胀孢子及菌丝。以3种形态的烟曲霉分组处理RAW264.7细胞,免疫印迹法检测LC3BⅡ蛋白的表达量,逆转录PCR检测自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12 mRNA的转录水平。观察不同形态的烟曲霉刺激GFP-LC3B-RAW264.7细胞后GFP-LC3B的表达与定位。结果膨胀的烟曲霉孢子及菌丝刺激巨噬细胞后LC3BⅡ表达水平升高;Atg5与Atg12 mRNA的转录均明显增高,Atg7转录水平无显著变化;膨胀孢子诱导LC3B呈斑点样聚集并与之共定位,烟曲霉菌丝刺激后自噬体增多。结论烟曲霉膨胀孢子与菌丝能显著提高巨噬细胞自噬水平,静息的分生孢子不能引起巨噬细胞自噬功能的应答。
- 杨小康戴京京祁真玉郝帅王干勋王立宇胡东张荣波
- 关键词：自噬烟曲霉LC3侵袭性曲霉病
- 血清学检测在21,18-三体综合征筛查中的应用价值
- 2013年
- 目的探讨了孕中期孕妇外周血中甲胎蛋白（AFP）、游离β人绒毛膜促性腺激素（free—β—HCG）和游离雌三醇（uE3）联合检测在21，18-三体综合征临床诊断中的价值。方法采用时间分辨免疫荧光分析法（DELFIA）对我院10624例15～20周孕妇血清中AFP，free—β—HCG和uE3的水平进行检测，并根据孕妇的年龄、孕周、体质量、胎数等因素采用配套软件对胎儿21-三体综合征（DS）和18-三体综合征（ES）进行风险评估，并对高危产妇行羊膜腔穿刺羊水细胞培养或脐血管穿刺脐血细胞培养染色体分析。结果10624例孕妇中，DS风险率高于临界值者513例，阳性率为4．83％，阳性者行染色体核型分析确诊6例；DS风险率低于临界值者胎儿分娩后检出2例，假阳性率为14．28％。ES风险率高于临界值者89例，阳性率0．84％，染色体分析确诊2例；ES风险率低于临界值者分娩后未检出ES患儿。结论血清学指标可有效预测胎儿三体综合征，是临床预防和降低先天性染色体异常疾病的主要手段。
- 邵娟杨小康吴静张荣波胡乐林胡东
- 关键词：21-三体综合征18-三体综合征甲胎蛋白游离雌三醇
- LC3-LpqH增强Ag85B抗结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫保护作用被引量：2
- 2014年
- 目的探讨微管相关蛋白轻链3-脂蛋白前体-LpqH(LC3-LpqH)DNA佐剂对Ag85B抗结核分枝杆菌(MTB)DNA疫苗免疫保护作用的影响。方法分别用纯化的pCMV-Ag85B、pCMV-LpqH/pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-LpqH/pCMV-Ag85B、pCMV质粒DNA对BALB/c小鼠进行3次肌肉注射免疫。末次免疫2周后,ELISA检测血清中抗Ag85B IgG亚型及滴度。Ag85B刺激下培养各组小鼠脾脏淋巴细胞,ELISA检测血清白细胞介素2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-4、IL-10分泌水平。末次免疫3个月后,用MTB标准毒株H37Rv尾静脉注射感染小鼠,计数肺和脾脏MTB载量并观察肺组织病理变化。结果与Ag85B免疫组相比,LC3-LpqH/Ag85B免疫组抗Ag85B的IgG2a水平显著提高,而IgG1水平显著降低,并伴随IL-2、IFN-γ分泌增加及IL-4、IL-10减少,肺和脾脏内MTB载量降低,肺组织病变程度减轻。结论 LC3-LpqH可显著增强Ag85B抗MTB疫苗的Th1型免疫应答,并显示较好的免疫保护效应。
- 胡东杨小康陈功吴静王婉戴京京陈天义张荣波
- 关键词：结核分枝杆菌DNA疫苗免疫保护
- 自然戒断期成瘾药物依赖者CD4^+CD25^+CD127^(low)调节性T细胞的变化特征及意义被引量：6
- 2013年
- 目的研究自然戒断期成瘾药物依赖者外周血CD4+CD25+CD127low调节性T细胞(Treg)及外周血单个核细胞(PBMC)中转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达水平的变化,探讨成瘾药物对成瘾药物依赖者体内Treg的影响。方法采集自然戒断6个月和18个月半的成瘾药物依赖者各40例及30例健康人的外周血,使用流式细胞仪检测Treg,用RT-PCR检测PBMC中TGF-β1 mRNA表达水平。结果与对照组比较,戒断18个月组Treg、TGF-β1 mRNA含量显著增高,而戒毒6个月组未发现显著性变化。结论成瘾药物对依赖者Treg的影响是长期性的,其介导的Treg异常,可能是引起成瘾药物依赖者免疫功能紊乱的原因之一。
- 王文洋张荣波邢应如张世武胡东吴静何江杨小康付计锋赵辉胡乐林
- 关键词：调节性T细胞
- 烟曲霉感染时NADPH氧化酶通过诱导活性氧活化巨噬细胞自噬被引量：8
- 2015年
- 目的研究NADPH氧化酶(NOX)参与烟曲霉孢子诱导巨噬细胞自噬及其作用机制。方法取对数生长期的RAW264.7细胞,随机分为3组:以烟曲霉孢子刺激的处理组、烟曲霉孢子联合NOX抑制剂氯化二亚苯基碘鎓(DPI)的处理组和无处理的空白组。细胞作用2 h后荧光显微镜观察细胞内二氯荧光黄亮度以检测活性氧(ROS)水平,免疫印迹法检测微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达量,免疫荧光技术观察LC3的表达与定位。结果烟曲霉孢子刺激后RAW264.7细胞的ROS与LC3BⅡ表达水平显著升高,同时LC3呈斑点状聚集并与烟曲霉孢子共定位;以DPI抑制后ROS与LC3 BⅡ表达量与空白组相比无明显变化,并且LC3在细胞内弥散分布。结论烟曲霉感染时NOX通过产生ROS活化巨噬细胞自噬。
- 胡素侠杨小康何江
- 关键词：自噬烟曲霉NADPH氧化酶活性氧组分
- LC3-LpqH自噬靶向性抗结核DNA疫苗的制备被引量：2
- 2014年
- 目的制备结核杆菌脂蛋白抗原前体LpqH基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的抗结核DNA疫苗,探究其诱导与靶向自噬的效应。方法构建pCMV-LpqH与pCMV-LC3-LpqH重组质粒并转染RAW264.7细胞,免疫印迹法检测LC-3与LC3-LpqH的表达。转染pCMV-LpqH或pCMV-LC3-LpqH至GFP-LC3-RAW264.7细胞,免疫荧光法观察LC3-LpqH蛋白的定位。结果细胞转染pCMV-LpqH后LC-3表达水平增高。pCMV-LC3-LpqH在RAW264.7细胞的表达水平与质粒浓度呈剂量依赖性,并且LC3-LpqH与GFP-LC3体外表达后共定位于自噬体上。结论 pCMV-LC3-LpqH的表达能够增强自噬,并将LpqH抗原靶向定位于自噬体,为设计新型抗结核疫苗提供了新思路。
- 胡东杨小康吴静王干勋王文洋祁真玉陈功张荣波
- 关键词：自噬结核分枝杆菌LC3疫苗
- pCMV-LC3-Ag85B重组质粒DNA疫苗对结核的免疫保护作用被引量：2
- 2014年
- 目的构建结核分枝杆菌Ag85B抗原基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的DNA疫苗,探究其抗结核分枝杆菌保护效应。方法构建pCMV-LC3-Ag85B重组质粒并转染RAW264.7细胞,Western blot法检测目的蛋白的表达水平。分别以pCMV、pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-Ag85B质粒免疫BALB/c小鼠。末次免疫2周后,Ag85B刺激下培养各组小鼠脾脏淋巴细胞,ELISA检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10分泌水平。末次免疫3个月后,用H37Rv标准株尾静脉注射感染小鼠,计数肺和脾脏结核分枝杆菌载量。结果 pCMV-LC3-Ag85B在RAW264.7细胞的表达水平与质粒浓度呈剂量依赖性。与pCMV-Ag85B免疫组相比,pCMV-LC3-Ag85B免疫组的IL-2、IFN-γ分泌显著增加,而肺和脾脏内结核分枝杆菌载量降低。结论 pCMV-LC3-Ag85B可显著增强Th1型免疫应答,并显示较好的抗结核分枝杆菌免疫保护效应。
- 胡东杨小康王婉邢应如王文洋杜昭弘尤其章力陈丽萍吴静张荣波
- 关键词：LC3AG85B免疫保护
- pET28a-PTD-Ag85B质粒构建及原核表达条件的优化被引量：1
- 2015年
- 目的构建p ET28a-PTD-Ag85B原核表达载体,并对其在E.coli BL21(DE3)中表达条件进行优化。方法将TAT-PTD序列插入到用限制性内切酶Nhe I和Bam H I双酶切的p ET28a质粒中,获得p ET28a-PTD重组质粒;RT-PCR法扩增Ag85B基因并将其克隆至p ET28a-PTD质粒中,获得p ET28a-PTDAg85B重组质粒。将重组质粒p ET28a-PTD-Ag85B转化至大肠杆菌,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导PTD-Ag85B融合蛋白表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定表达产物。筛选最适诱导剂浓度、诱导温度和时间,尿素复性包涵体,并用His-tag离子亲和层析柱分离纯化融合蛋白。结果成功构建p ET28aPTD-Ag85B重组质粒,在E.coli BL21中能高效表达PTD-Ag85B融合蛋白。结论成功表达及纯化了PTD-Ag85B蛋白,为获得大量PTD-Ag85B融合蛋白提供了技术储备。
- 杜昭弘王婉戴京京何江王文洋杨小康邢应如尤其穆敏胡东吴静张荣波
- 关键词：AG85B原核表达融合蛋白
- Kallmann家系的突变分析与遗传咨询一例
- 2015年
- 目的分析一例X连锁隐性遗传的Kallmann综合征家系的KAL-1基因突变,对家系成员进行突变筛查。方法从先证者及其部分近亲属的外周血中提取DNA,经体外扩增后进行基因测序。针对突变位点设计引物,进行聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析。结果 KAL-1基因的外显子4上一个碱基发生错义突变(c.487T>C,p.163Cys>Arg),PCR-RFLP结果表明突变与疾病共分离。结论实验结果可用于该家系成员的早期诊断和遗传咨询,从而降低该病的再发风险。
- 徐忠乐佘新平王飞杨小康徐竹南张依生张成梦
- 关键词：KALLMANN综合征
