杨勇
- 作品数：12 被引量：57H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院特产研究所更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金国家高技术研究发展计划吉林省重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- O型口蹄疫病毒样颗粒疫苗及其制备方法和应用
- O型口蹄疫病毒样颗粒疫苗及其制备方法和应用，属于基因工程学和免疫学领域，解决了现有灭活口蹄疫疫苗存在的安全性差、使用效果不理想的问题。该疫苗的氨基酸序列如序列表中的SEQ ID NO:1所示，编码该氨基酸序列的核苷酸序列...
- 郭利杨勇杨艳玲孙娜程世鹏任静强席娜李家伟刘莹林鹏宁浩然
- 文献传递
- 水貂出血性肺炎病原分离鉴定及药物敏感性分析
- 水貂出血性肺炎近几年在我国各地养殖场频繁发病，造成严重的影响。本实验主要收集来自山东某水貂养殖场具有典型的出血性肺炎症状的病死水貂的肺脏和肝脏等组织样品，分离培养病原菌，并采用生化鉴定和PCR方法对疑似菌株进行鉴定。采用...
- 孙娜杨勇陈强汪梦航温永俊程世鹏
- 关键词：水貂出血性肺炎药物敏感性
- 犬瘟热病毒活疫苗耐热冻干保护剂及制备方法
- 本发明涉及犬瘟热病毒活疫苗耐热冻干保护剂及制备方法，其特征在于按质量份数由以下物质混配而成：蔗糖10-30、L-谷氨酸钠0.01-5、聚乙烯吡咯烷酮1-2、水解乳蛋白10-30、蜂胶0.1-10，余量为蒸馏水。其制备方法...
- 谭斌温永俊孙娜张淑琴王凤雪杨勇
- 文献传递
- 水貂部分Toll样受体(TLRs)基因的分子克隆、序列分析及组织表达分析被引量：2
- 2015年
- 试验旨在研究Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)在水貂抗病毒免疫中的作用机制,并为抗病育种积累可供选择的基因素材。本试验以雪貂TLRs基因为参考序列设计4对引物对水貂TLR4、TLR6、TLR7及TLR8进行分子克隆,并对所得序列进行生物信息学分析,进一步利用半定量RT-PCR技术分析TLR4和TLR7基因mRNA在不同年龄水貂各组织中的表达情况。结果表明,水貂TLRs与食肉目动物(雪貂、北极熊、大熊猫、海象、海豹、犬、老虎和猫)具有较高的同源性,在系统发育树中距离最近;组织表达分析表明TLR4和TLR7在检测的组织中广泛表达且表达量存在差异,相比成年水貂,仔貂各组织中TLR4或TLR7基因表达量更高。
- 仝明薇易立杨勇程悦宁王建科赵航林鹏程世鹏
- 关键词：TOLL样受体水貂
- 水貂肠炎病毒VP2基因原核表达及鉴定被引量：9
- 2015年
- 采用PCR技术扩增MEV VP2基因,将该基因片段定向克隆原核表达载体PET-30a,构建MEV VP2基因原核表达重组质粒PET-30a-VP2。将该重组质粒转化到宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导后进行SDSPAGE和Western-blotting分析。结果表明:该基因全长1 755 bp,其目的基因序列完全正确,能编码584个氨基酸。利用载体上的His标签对其进行纯化,经SDS-PAGE鉴定该重组蛋白以包涵体的形式存在,大小约为70 ku;Western-blotting验证该重组蛋白具有被抗MEV血清识别的特性,具有良好的反应原性,可为MEV基因工程亚单位疫苗、免疫学诊断方法等提供参考。
- 林鹏王红梅王建科赵航郭利杨勇程悦宁张淼程世鹏
- 关键词：水貂肠炎病毒VP2基因原核表达
- 高致病性PRRSV JL-04/12株核衣壳蛋白的表达与抗原性分析被引量：2
- 2015年
- 为获得高浓度、高质量的有效原核表达蛋白作为ELISA诊断抗原,通过RT-PCR法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)JL-04/12株的核衣壳蛋白(N蛋白)基因并克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,转入到大肠埃希菌BL-21感受态细胞,经IPTG诱导表达,通过温度和IPTG浓度的优化,进行重组蛋白的高效表达,经SDS-PAGE和Western blot对表达产物的特性进行分析,利用GST柱纯化表达蛋白,并免疫小鼠,ELISA检测其刺激产生抗体的能力-抗原的免疫原性。结果表明,0.1mmol/L的IPTG、28℃诱导4h可高效诱导重组蛋白的表达,在表达上清中目的蛋白达40%,原核表达的重组N蛋白可诱导小鼠产生抗体,抗体效价为1∶256。原核表达的N蛋白与PRRSV具有相同的抗原性。
- 王凤雪刘莹杨勇朱洪伟孙娜刘杏程世鹏温永俊
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白原核表达
- 水貂绿脓杆菌分离鉴定及药物敏感性分析被引量：10
- 2015年
- 本试验旨在通过对山东某水貂养殖场送检的5只具有典型出血性肺炎症状的病死水貂进行细菌分离鉴定及耐药情况分析,为临床用药和治疗提供依据和参考。通过细菌分离纯化、生化鉴定和PCR方法对分离菌株进行鉴定,采用K-B药敏法检测分离菌株对常用药物的敏感性,并通过PCR方法检测分离菌株耐药基因的携带情况。经鉴定共分离得到5株绿脓杆菌,药物敏感性试验结果显示,5株绿脓杆菌对氟喹诺酮类药物、第3代和第4代头孢类药物较敏感,对氨基糖苷类、四环素、氯霉素、青霉素类、第1代和第2代头孢类药物耐药。耐药基因检测结果显示,5株绿脓杆菌共检测出6种耐药基因aadA1、aac(3’)-Ⅱc、aac(6’)-Ⅰb、tetA、tetK、cat2。且每株分离菌均检测出3种以上耐药基因。结果表明,分离的5株菌株均为绿脓杆菌,主要引起水貂出血性肺炎。分离菌株耐药性较严重,主要表现为多重耐药现象。菌株携带的耐药基因呈多样性,可引起菌株对相应药物产生耐药现象。
- 孙娜陈强温永俊杨勇汪孟航程世鹏
- 关键词：水貂绿脓杆菌出血性肺炎药物敏感性
- 口蹄疫病毒O型病毒VP1蛋白表达及鉴定被引量：4
- 2016年
- 利用大肠杆菌p ET-30a表达系统表达口蹄疫病毒(FMD)O型野毒株完整的VP1蛋白,并以Western blot试验进行鉴定。结果表明:VP1蛋白以可溶性表达,大小约为25 ku,可与标准O型口蹄疫病毒阳性血清特异结合。由此说明,口蹄疫病毒VP1原核表达蛋白有良好的反应原性,为构建口蹄疫病毒病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)和快速特异诊断试剂研制奠定基础。
- 李家伟杨勇任静强席娜张加力程世鹏郭利
- 关键词：口蹄疫病毒VP1蛋白重组质粒
- 牛病毒性腹泻病毒LAMP检测方法的建立与应用被引量：23
- 2015年
- 针对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR基因(GenBank登录号:AY278459.1)序列设计4条特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,特异性识别靶基因序列上4个独立区域,采用LAMP技术,利用实时浊度仪实时检测LAMP反应过程中所产生的焦磷酸镁白色沉淀,实时监测反应液浊度来判断反应结果,实现对扩增反应全过程的监控,建立BVDV的LAMP快速检测方法。通过实时浊度仪在恒温63℃下50min完成检测,对方法的特异性、灵敏度、重复性进行了评价。结果显示,经优化该方法只检测BVDV阳性,特异性强;病毒10-6倍稀释时仍能被检测到,比PCR方法灵敏度至少高100倍;重复性良好。LAMP实时浊度法具有简单、快速、灵敏度高、特异性强的优势,为BVDV的临床检测提供了一种简单快速的试验手段。
- 李家伟郭利杨勇王建科张淑琴张加力程世鹏
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒环介导等温扩增技术PCR
- 牛病毒性腹泻病毒Real-timePCR方法的建立及其应用被引量：4
- 2014年
- 本研究在牛病毒性腹泻病毒5'UTR基因的保守区设计并合成了1对引物,建立了可以定量检测牛病毒性腹泻病毒核酸的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。该方法建立的标准曲线相关系数R2为0.999,扩增效率为95.9%,熔解曲线为单一峰值,可检测到初始模板中4.1×101copies/μL的牛病毒性腹泻病毒核酸,是常规RT-PCR方法敏感性的100倍。该检测方法与猪瘟病毒、传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛副流感病毒3型病毒等其它牛源病毒均不发生交叉反应;批内与批间重复性试验变异系数均小于2.2%。本试验建立的荧光定量PCR检测方法可用于牛病毒性腹泻病毒的临床诊断。同时,应用本方法对临床病例的各组织器官进行了病毒RNA定量检测结果表明,胸腺等淋巴组织的病毒含量最高,证实病毒主要侵害淋巴器官,此研究可为临床病例的病毒分离提供借鉴。
- 张淑琴谭斌李鹏杨勇孙娜王凤雪郭利温永俊程世鹏
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒病毒检测荧光定量聚合酶链反应
