杨健美
- 作品数：67 被引量：86H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 基因芯片技术及其在寄生虫学研究中的应用被引量：1
- 2011年
- 随着人类基因组计划（human genome project，HGP）和一些模式生物基因组计划的完成，基因序列数据正以前所未有的速度迅速增长，对基因组学的研究已从结构基因组学逐步转向了功能基因组学。由于基因芯片技术操作简便，获得的信息高度特异、稳定，在寄生虫学研究领域已广泛应用。随着寄生虫分子遗传学研究的进展和寄生虫基因芯片检测工具的开发应用，这一技术用于筛选寄生虫功能基因，探索寄生虫与宿主相互作用，研究寄生虫发病机制及筛选寄生虫诊断抗原、药物靶标和疫苗分子等，大大推动了寄生虫学领域的研究步伐，该文主要介绍了基因芯片技术的分类，并就近几年来基因芯片技术在寄生虫学研究方面的应用作一综述。
- 杨健美冯新港林矫矫
- 关键词：基因芯片微阵列功能基因寄生虫学
- 蝙蝠流感病毒与H9N2亚型禽流感病毒的重组特性研究被引量：1
- 2022年
- 人类历史上数次流感大流行,都与不同流感病毒之间的基因重组有关,为了研究新发现的蝙蝠流感病毒与禽流感病毒的重组可能性,本研究利用反向遗传操作技术对嵌合蝙蝠流感病毒(Bat09:mH9mN2)与禽流感病毒(A2093/H9N2)进行替换重组,研究发现仅H9病毒的M基因可单向替换Bat病毒的M基因获得重组嵌合蝙蝠流感病毒,命名为Bat09:mH9mN2-A2093(M),其他基因均不能互换拯救。该重组病毒可以在鸡胚上、MDCK细胞上复制良好,但在禽源LMH细胞上几乎不复制。本研究发现蝙蝠流感病毒与H9N2亚型禽流感病毒之间的基因兼容性并不强,仅有禽源病毒M基因可以单向替换重组,这与之前的研究报道一致,关于M基因的重组兼容性及重组病毒生物学特性还有待进一步研究。
- 张培黄敏滕巧泱刘芹防李雪松张志飞崔宏锐李泽君周雨霞杨健美
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒M基因
- 抗H9亚型禽流感病毒的单克隆抗体、杂交瘤细胞株及其应用
- 本发明公开了一种抗H9亚型禽流感病毒的单克隆抗体，其结合H9亚型禽流感病毒的HA蛋白，并具有血凝抑制活性。本发明还公开了检测H9亚型禽流感病毒抗体的试剂盒及上述单克隆抗体在制备诊断禽流感的产品中的应用。本发明检测H9亚型...
- 李泽君杨健美滕巧泱李雪松戴晓光
- 文献传递
- 表达致PWD和ED大肠杆菌保护性抗原基因的重组菌的构建与免疫保护试验
- 运用PCR技术,分别从大肠杆菌TB1、107/86和C83907菌株中扩增出不含信号肽序列的Stx 2e B亚单位基因(stx 2e B)、F18茵毛的A亚单位基因(fedA)和F4茵毛亚单位基因(faeG),将这3个基...
- 杨健美施慧高崧陈祥刘秀梵
- 关键词：大肠杆菌菌毛融合蛋白重组菌免疫保护
- 文献传递
- 无抗性表达致PWD和ED大肠杆菌保护性抗原基因的重组菌构建被引量：3
- 2005年
- 利用平衡致死系统成功地将构建表达致PWD和ED大肠杆菌保护性抗原基因的重组菌BL21(pFSFaeG)中所含氨苄抗性基因敲除,并转化沙门氏菌宿主菌X4550。经过质粒酶切分析和表达产物的SDSPAGE证实,氨苄抗性基因已经成功敲除,并且目的蛋白仍与谷胱甘肽转移酶相融合,得到有效表达,重组融合蛋白的分子质量约为80ku。经体外连续传代试验,重组菌X4550(pFSFaeG)均能在无抗生素压力下大量扩增并稳定传代,质粒稳定性和蛋白表达稳定性良好。无抗性重组菌的成功构建解决了基因工程疫苗抗性基因潜在危险问题,并有望通过沙门氏菌载体的递送作用,为研制口服疫苗奠定了基础。
- 杨健美张小荣高崧韦栋平刘秀梵
- 关键词：基因敲除蛋白表达
- H3N2禽流感病毒反向遗传操作平台的建立
- 2022年
- 近几年,禽流感病毒(AIV)跨越禽-犬屏障产生新型H3N2犬流感病毒,后者在亚洲多国的犬中广泛流行,造成潜在的公共卫生安全威胁。尽管如此,H3N2 AIV如何跨宿主传播至犬的分子机制尚不清楚。为此,本研究利用早期筛选到的一株不感染犬和鼠,但感染禽的H3N2禽流感病毒A/Duck/Shanghai/01/2009(H3N2)(简称为SH01),通过RT-PCR技术扩增了病毒的8个全基因片段,并分别克隆至PLLB双向表达载体上。将构建成功的8个质粒纯化后共转染293T细胞,转染48 h后加入TPCK胰酶作用2 h,将上清液和细胞一同接种9~11日龄SPF鸡胚,检测其血凝效价。经测序分析,确定获救病毒的8个基因片段序列与亲本毒株的序列完全一致,表明该病毒拯救成功。H3N2禽流感病毒反向遗传操作平台的成功建立为探索该病毒跨宿主传播犬的分子机制提供了工具。
- 石晓娜闫婉婉陈新武潘学李雪松刘芹防杨健美李泽君滕巧泱
- 关键词：H3N2禽流感病毒
- 两个山丘型疫区牛血吸虫病疫情动态纵向观察被引量：2
- 2012年
- 目的了解山丘型血吸虫病疫区牛血吸虫病流行动态,为正确评估防治效果、制订防控对策提供参考依据。方法选择两个有代表性的山丘型疫区仁美和大仓作为观察点,采用毛蚴孵化法检查牛血吸虫感染情况,比较不同年龄牛感染率;入户调查家畜放牧行为,每年4、9月调查野粪和钉螺分布及感染率。结果与1993年比较,2007年仁美和大仓观察点牛血吸虫感染率分别下降98.4%和93.8%;感染度亦呈下降态势,至2007年基本以低感染度为主。1995年以后仁美观察点野粪阳性率为0,大仓点至2007年处于较低徘徊状态;活螺密度和阳性螺密度呈下降趋势。结论山丘型血吸虫病流行区由于自然环境特殊,疫区往往呈点状或带状分布,加大查治病和扩大化疗力度可迅速降低血吸虫病疫情。要彻底阻断血吸虫病传播还必须加强钉螺孳生环境改造和家畜血吸虫病传染源管理。
- 石耀军李浩陆珂董国栋毛光琼郭莉马坤高建新杨俊凯傅志强朱传刚杨健美金亚美苑纯秀程国锋冯新港林矫矫刘金明
- 关键词：血吸虫病
- H9N2亚型禽流感病毒反向遗传操作平台的建立被引量：1
- 2020年
- H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在自然界中广泛存在和传播,给养禽业造成了巨大损失。为了进一步揭示该病毒的致病机制,本研究采用RT-PCR技术扩增禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/1/2006(简称SH1)的PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS 8个基因片段,并分别克隆至PLLB双向表达载体上。采用8质粒系统共转染293T细胞,转染48 h后加入TPCK胰酶作用2 h,将上清液和细胞一同接种9~11日龄SPF鸡胚,并检测其血凝效价。经序列比对,拯救获得的病毒rSH1的8个基因片段序列均与亲本病毒SH1的序列相同。实验结果表明,本研究成功建立了H9N2亚型禽流感病毒反向遗传操作系统,为该病毒的致病机理和传播机制研究等奠定了技术平台。
- 陈新武石晓娜潘学李雪松杨健美刘芹防陈鸿军滕巧泱李泽君
- 关键词：禽流感病毒H9N2致病
- 3种保虫宿主日本血吸虫特征性差异表达基因的筛选与验证
- 2012年
- 目的筛选日本血吸虫3种重要保虫宿主来源虫体的特征性差异表达基因,寻找可以用于鉴别这3种宿主来源虫体的遗传标记。方法日本血吸虫尾蚴人工感染黄牛、水牛和山羊,收集感染后49 d成虫,分别抽提RNA,逆转录成cD NA,体外转录为cRNA并进行片段化;采用定制的血吸虫芯片分别进行杂交,筛选每种宿主来源虫体的特征性差异表达基因。采用实时定量PCR法对所筛选差异表达基因的表达水平做进一步测定,验证芯片数据的结果,并对这些特征性差异表达基因进行验证。结果通过芯片杂交,分析筛选获得实验黄牛组来源虫体特征性差异表达基因3个,水牛组来源虫体4个,山羊组来源虫体7个。其中黄牛组2个、水牛组3个、山羊组5个特征性差异表达基因在另一批次3种宿主来源虫体的重复试验中得到验证。结论芯片杂交筛选出10个3种宿主来源虫体的特征性差异表达基因,这些基因可能可以作为这3种不同宿主来源虫体的遗传标记。
- 杨健美石耀军冯新港傅志强苑纯秀刘金明洪炀李浩陆珂林矫矫
- 关键词：日本血吸虫保虫宿主芯片
- 日本血吸虫Wnt5基因、蛋白及应用
- 本发明公开了一种日本血吸虫基因，所述基因为编码SEQ？ID？NO.1所示氨基酸序列的Wnt5基因。本发明还公开了上述基因编码的Wnt5蛋白质。本发明的日本血吸虫Wnt5基因和蛋白，参与调控血吸虫的生长发育及生殖系统发育，...
- 苑纯秀高阳邓玲玲叶忠雪塔娜冯新港葛程杨健美林矫矫
- 文献传递
