杜志坡
- 作品数：8 被引量：30H指数：4
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- BMP4促进人骨膜来源细胞体外成软骨细胞分化被引量：10
- 2013年
- 目的探讨细胞因子BMP4在骨膜来源细胞体外培养中的定向成软骨分化作用。方法采用人胫骨骨膜为材料，体外组织块法分离骨膜来源细胞，置于DMEM／F12完全培养基培养，倒置显微镜观察细胞形态，台盼蓝染色细胞计数法检测第3、9代骨膜来源细胞和BMP4诱导后细胞的增殖活性，绘制细胞生长曲线图。随机分为对照组、软骨诱导组和实验组，分别加入完全培养基、软骨诱导液和BMP4加软骨诱导液，第14和21天分别采用甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色检测细胞的蛋白多糖和Ⅱ型胶原；定量PCR检测软骨基因Aggrecan、Ⅱ型胶原和SOX9mRNA表达。结果（1）骨膜来源细胞在体外贴壁生长，经成软骨诱导1周后可见类圆形细胞形成，2周后细胞呈多角形，甲苯胺蓝染色呈阳性；细胞生长曲线证实诱导分化后细胞与第3代至第9代细胞增殖能力相似。（2）第14和21天软骨细胞标志物阳性率（％）实验组蛋白多糖（分别为40．29±4．29、56．74±5．12）和Ⅱ型胶原（分别为19．27±3．71、38．31±4．25）较软骨诱导组（第14和21天蛋白多糖分别为28．12±3．25、41．23±4．18，11型胶原分别为10．24±1．21、15．28±2．23）明显升高（P〈0．05）。（3）定量PCR：实验组Aggrecan（25．76-t-0．57）、Ⅱ型胶原（6．48±0．48）、SOX9（2．91±0．18）mRNA表达均明显高于软骨诱导组（11．12±0．38、2．24±0．41、1．54±0．35）和对照组（2．37±0．24、1．12±0．31、1．07±0．22）（P〈0．05）。结论骨膜来源细胞体外增殖能力强，经诱导可定向成软骨分化，BMP4在体外具有明显促进骨膜来源细胞分化为软骨细胞的作用。
- 贝抗胜吴礼杨孙庆文熊英辉杜志坡刘延晓
- 关键词：成软骨分化
- 人骨膜细胞体外成骨分化的基因表达和功能检测被引量：3
- 2011年
- 目的探讨并鉴定骨膜细胞经骨形成蛋白7（BMP7）诱导分化为成骨细胞的基因表达和细胞功能。方法成人胫骨骨膜常规体外细胞培养法，分实验组和对照组，分别加入BMP7加成骨辅助剂和单纯成骨辅助剂进行体外培养。CCK-8法检测细胞增殖活性，第5、10、15和20天分别采用Real陆ne-PCR检测骨钙素基因表达，ELISA法检测上清液碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、骨钙素（osteoealein，OCN）及骨桥蛋白（osteopontin，OPN）的水平，甲苯胺蓝染色检测糖胺聚糖（GAG），RealTime-PCR检测Ⅱ型胶原基因，比色法检测细胞ALP活性，ALP染色法检测ALP，VonKossa染色法检测钙结节。结果两组骨钙素基因表达及上清液ALP、骨钙素、骨桥蛋白的含量均增高，实验组与对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。两组细胞的ALP和钙结节染色阳性率增高，实验组与对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。甲苯胺蓝染色阳性率及Ⅱ型胶原基因表达表现为先高后低，实验组与对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论骨膜细胞在BMP7诱导下体外大量增殖和分化成骨，表达出明显的成骨特异基因，并具有合成分泌成骨特异蛋白的功能；成骨化过程中，除直接分化成骨外，还存在部分细胞先经软骨形成再钙化成骨的现象；经骨膜细胞．BMP7途径在体外获取大量成骨细胞可用于组织工程的体外构骨及临床应用。
- 贝抗胜杜志坡熊英辉廖家成苏宝金吴礼杨孙庆文
- 关键词：细胞培养技术骨膜细胞成骨分化细胞功能
- 组织工程软骨种子细胞的定向诱导分化被引量：1
- 2011年
- 背景:软骨修复一直是骨科治疗难题和研究热点。随着组织工程学的发展,近年来应用种子细胞诱导分化为软骨细胞,构建组织工程软骨修复软骨缺损的思路倍受关注,并已取得一定成功。目的:讨论组织工程软骨的种子细胞选择、成软骨定向诱导分化的培养条件,尤其是细胞因子、诱导方法、培养方式等因素的作用。方法:计算机检索中国期刊全文数据库及PubMed数据库2000-01/2010-09相关文章,检索词为"软骨形成,软骨缺损,刺激因子,软骨修复,组织工程,chondrification,cartilage defect;stimulating factor,cartilage repair,tissue engineering"。语种限定为:中文与英文。纳入与软骨形成、诱导分化、组织工程支架方面的基础和临床研究,排除内容陈旧及重复研究。计算机初检得到155篇文献,根据纳入排除标准,最终纳入41篇。结果与结论:种子细胞在特定细胞因子作用下可定向分化为软骨细胞。通过选择合适的种子细胞及细胞因子定向诱导分化构建组织工程软骨,能够为成功治愈关节软骨缺损提供新思路。软骨定向分化因子转化生长因子β、碱性成纤维细胞生长因子、骨生成蛋白、胰岛素样生长因子、生长激素等调控诱导可通过介质添加物、基因转染、不同培养方式等几种方式促进向软骨方向转化。相信随着软骨定向诱导分化研究的深入,为临床上运用软骨组织工程学来解决关节软骨缺损修复这一难题提供了有效依据,有广泛的临床应用前景。
- 杜志坡贝抗胜
- 关键词：软骨修复种子细胞诱导分化
- 干细胞在骨科疾病治疗中的应用被引量：4
- 2010年
- 背景:干细胞可在一定条件下体外培养扩增、定向分化为多种类型成熟细胞系。临床上运用干细胞治疗骨软骨缺损,股骨头坏死,脊髓神经损伤等骨科疾病方面已取得了很多成果。目的:简要综述近年来干细胞相关研究,总结其在骨科基础研究与临床应用中的进展。方法:以stem cells,differentiation,cytokine,bone fracture,bone formation,cartilage defect,tissue engineering为检索词,检索Pubmed数据库(2000-01/2010-01),以干细胞,细胞因子,骨折,骨软骨缺损,肌腱损伤,皮肤损伤,组织工程为检索词,检索中国期刊全文数据库(2000-01/2010-01)。纳入与干细胞以及干细胞在骨科应用方面的基础和临床研究,排除内容陈旧及重复研究。计算机初检得到190篇文献,根据纳入排除标准,最终纳入24篇。结果与结论:作为组织工程种子细胞,目前干细胞应用广泛,已涉及医学多个领域,临床上运用干细胞治疗骨科疾病大量的体外实验已获成功。干细胞具有多向分化潜能,在一定条件下可以分化为成骨细胞、成软骨细胞、成肌细胞和脂肪细胞。而与相应的生物材料相结合,能修复骨、软骨、肌腱、肌肉等多种组织,很多已不仅局限于实验研究,而且试用于临床患者的治疗,并取得了满意的疗效。
- 杜志坡贝抗胜
- 关键词：干细胞诱导分化骨科
- 成骨因子BMP7在骨膜细胞体外培养中的作用被引量：14
- 2010年
- 目的 探讨成骨因子骨形态发生蛋白（BMP7）在骨膜细胞体外培养中的诱导分化作用.方法取材于成人胫骨骨膜,常规细胞培养法行骨膜细胞体外培养,分为实验组和对照组,分别加入BMP7加成骨细胞培养辅助剂和单纯成骨细胞培养辅助剂,相差显微镜观察骨膜细胞形态特征.每组分别在第5、10、15、20天设3个样本,采用ALP试剂盒法及钙结节Von Kossa染色法分别检测成骨细胞特异性标志物ALP和钙结节的表达情况.结果 骨膜细胞在体外生长良好,实验组和对照组形成的成骨细胞增殖良好,形态一致.细胞早期呈梭形,饱满透明,立体感强;分裂期呈立方形或短柱状;后期由长梭形逐渐变成宽梭和不规则形.由BMP7诱导的骨膜细胞的成骨标志物ALP和钙结节染色阳性率明显高于对照组,有统计学意义（P＜0.01）.结论 骨膜细胞具有良好的成骨和再生能力,BMP7在体外培养中具有明显增强骨膜细胞分化为成骨细胞的作用.
- 贝抗胜孙庆文熊英辉季国庆苏宝金廖家成杜志坡吴礼杨
- 关键词：骨形态发生蛋白7骨膜细胞成骨细胞细胞培养
- 人体骨细胞体外构骨的基因表达与相关研究
- 贝抗胜孙庆文熊英辉刘青刘建平廖家成杜志坡欧荣通
- 1，经BMP7诱导后的骨膜细胞符合成骨细胞的典型特征，表达成骨特异基因并合成分泌成骨特异蛋白，具备细胞自身特有功能，提示骨膜细胞已分化为成骨细胞。2，诱导分化细胞的特异性基因与其细胞的合成、分泌成骨、成软骨特异蛋白功能密...
- 关键词：
- 关键词：基因表达
- 人骨膜细胞生物学特性的实验研究被引量：8
- 2011年
- 目的探讨人骨膜细胞体外培养的生物学特性。方法以胫骨骨膜组织为材料，采用组织块法分离细胞，完全培养基培养，通过倒置硅微镜观察细胞形态学，锥虫蓝染色计数法检测细胞增殖能力；流式细胞学分析细胞表面抗原。随机分为3组，成骨实验组和成软骨实验组分别加入不同的定向培养剂，对照组加入完全培养基，采用碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色、甲苯胺能染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色检测各组细胞的成骨和成软骨分化指标。结果骨膜细胞在体外培养条件下呈贴壁乍长，细胞牛K曲线证实骨膜细胞传至第9代仍保持良好的增殖能力；流式细胞仪检测证实细胞表阿抗原CD90及CD105呈阳性；组织化学染色检测证实成骨实验组分化后细胞碱性磷酸酶及钙结节呈阳性，成软骨实验组分化后细胞蛋门聚精及Ⅱ型胶原呈阳性，对照组各项指标均呈阴性。结论骨膜细胞体外培养细胞增殖能力强，具有间允质干细胞的特性和良好的成骨和成软骨分化潜能，其定向诱导分化的成骨细胞和软骨细胞均具有各自明显的细胞功能表达。
- 贝抗胜吴礼杨孙庆文熊英辉杜志坡廖家成
- 关键词：骨膜
- 骨膜细胞体外分化成骨的基因表达和功能检测
- 【目的】： 观察骨膜细胞经成骨因子BMP7诱导后的细胞生物学特征,鉴定骨膜细胞经BMP7体外诱导分化为成骨细胞的基因表达和细胞功能。 【方法】： 取材于成人胫骨骨膜,常规体外培养。实验分为实验组和对照组,分别加入B...
- 杜志坡
- 关键词：细胞生物学特征体外诱导分化成骨细胞细胞功能
