李智慧
- 作品数：5 被引量：1H指数：1
- 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 基于Phi BT1整合酶及Phi C31整合酶的基因克隆质粒及其应用
- 本发明属生物技术和基因工程技术领域，具体涉及一种基于Phi BT1整合酶及Phi C31整合酶的基因克隆质粒(pBCFX+和pBCFX-)及其应用。该质粒使用含有Phi BT1整合酶及PhiC整合酶对应attP位点串连序...
- 陈金中李智慧姚纪花田聆薛京伦
- 文献传递
- φC31整合酶及HIV整合酶的结构、功能初步解析
- 基因治疗和转基因研究中，利用定点整合酶有效地将目的基因位点特异性地整合到细胞基因组中，可以使目的基因获得安全和长期的表达。ΦC31整合酶作为一个来源于链霉菌噬菌体的位点特异性整合酶，近年来它被广泛应用于基因治疗和转基因研...
- 李智慧
- 关键词：ΦC31整合酶HIV整合酶慢病毒
- 文献传递
- Sp100与HIV-1整合酶互作并抑制其介导的病毒整合(英文)
- 2013年
- Sp100是核颗粒ND10的组成蛋白,在哺乳动物细胞中广泛存在.Sp100参与多种细胞生理病理过程,如转录调控、细胞内抗病毒免疫等.利用酵母双杂交系统,我们发现了Sp100的互作蛋白HIV-1整合酶,免疫共沉淀实验进一步证实了Sp100与HIV-1整合酶的互作,细胞内荧光共定位实验也证实了二者在细胞内部分共定位.此外,突变体实验表明,Sp100的C端300～480氨基酸和HIV-1的催化结构域是两个蛋白质的互作区域.利用siRNA降低细胞内Sp100的表达量,可以增加HIV-1整合酶介导的病毒的整合,反之,细胞内过表达Sp100则会降低HIV-1整合酶介导的病毒的整合.这是首次发现Sp100可以和HIV-1整合酶发生相互作用,并进而抑制病毒的整合.我们发现了Sp100作为HIV-1整合酶互作蛋白的新功能,并扩展了细胞防御病毒感染的相关研究.
- 林云李智慧王然李文娟王晶晶季朝能薛京伦陈金中
- 关键词：SP100HIV-1整合酶慢病毒
- 基于Phi BT1整合酶及Phi C31整合酶的基因克隆质粒及其应用
- 本发明属生物技术和基因工程技术领域，具体涉及一种基于Phi BT1整合酶及Phi C31整合酶的基因克隆质粒(pBCFX+和pBCFX－)及其应用。该质粒使用含有Phi BT1整合酶及PhiC31整合酶对应attP位点串...
- 陈金中李智慧姚纪花田聆薛京伦
- 文献传递
- ΦC31整合酶的表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2008年
- 目的:提供ΦC31整合酶研究所需的大量纯化蛋白质及特异性抗体。方法:将编码ΦC31整合酶的ORF插入到pET22b+载体构建表达质粒并转化E.coliBL21(DE3),用IPTG诱导表达His-C31整合酶融合蛋白,His-Bind Quick Car-tridge纯化表达产物。重组蛋白作为抗原常规免疫家兔制备相应的多克隆抗体,Western blotting确定抗体的特异性,体外线性底物分子内重组检测系统检测抗体的活性。最后用该抗体检测了ΦC31整合酶在真核细胞HEK293中的定位和分布。结果:16℃条件下0.2 mmol/LIPTG诱导培养30 h,携带pET22b-ΦC31质粒的E.coliBL21(DE3)在YTG培养基中,可表达出大量的融合蛋白,该蛋白经体外线性底物分子内重组检测系统检验具有较高的活性。使用该融合蛋白免疫新西兰大白兔后,分离兔血清可得到ΦC31整合酶多克隆抗体,Western blotting和荧光免疫细胞组织化学方法证实,该抗体可特异性地识别细菌及细胞表达的ΦC31整合酶蛋白抗原。结论:本实验建立了表达ΦC31整合酶的方法,并成功制备了ΦC31整合酶特异性抗体。
- 许正新张茂祥李智慧王秋娟陈金中
- 关键词：ΦC31整合酶蛋白表达多克隆抗体纯化
