李文洁
- 作品数：11 被引量：75H指数：4
- 供职机构：华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家现代农业产业技术体系建设项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪圆环病毒2型WH株的分离与鉴定
- 本文从临床上表现为仔猪断奶多系统衰竭综合征(PMWS)的病死猪中取淋巴、脑等组织病料，扩增猪圆环病毒2型(PCV2)主要结构蛋白基因ORF2，证实为PCV2阳性病料组织后，接种到无PCV1污染的传代PK-15细胞分离培养...
- 严伟东李文洁邹浩勇郭海兵何启盖
- 关键词：仔猪感染圆环病毒2型毒株分离病毒鉴定
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型的分离鉴定及优化培养被引量：10
- 2012年
- 为研究圆环病毒病的流行情况及防治奠定基础,从湖北省某些大型养猪场采集临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)病死猪的淋巴结、脾等组织病料,进行病毒分离和鉴定。对分离病毒进行了间接免疫荧光鉴定、电子显微镜鉴定、核苷酸序列比对分析及动物感染试验;同时对病毒的培养条件进行优化,用RT-PCR检测感染细胞中的病毒核酸含量。结果表明,从猪病料中分离到1株猪圆环病毒2型(PCV2),命名为PCV2-WH。分离毒株经间接免疫荧光可检测到特异的PCV2荧光斑,电子显微镜下可观察到直径17 nm大小、圆形病毒粒子;利用一对圆环病毒2型ORF2基因引物进行了PCR扩增,将所得序列与GenBank收录的9株圆环病毒2型ORF2基因的核苷酸序列比对,同源性为98.2%～99.9%。非免疫猪接种出现明显的临床症状和病理变化。优化培养的结果显示,细胞与病毒同步接种培养24 h后,用300 mmol/L D-氨基葡萄糖于37℃作用30min后继续培养48 h的病毒滴度最高。本研究为进一步开展该病毒的致病性、疫苗免疫、诊断及分子生物学等研究奠定了基础。
- 严伟东李文洁李文涛汪洋陈焕春何启盖
- 关键词：猪圆环病毒2型
- 猪圆环病毒2型WH株的优化培养
- 目的：针对分离鉴定的PCV2-WH株通过四种不同的方法进行病毒增殖优化培养，使培养的病毒滴度达到理想状态。
方法：①细胞与病毒同步接种并用300 mm的D-氨基葡萄糖处理;②同步接种不用D-氨基葡萄糖处理;③不...
- 严伟东李文洁李文涛崔晓汪洋何启盖
- 关键词：猪圆环病毒2型病毒增殖
- 文献传递
- 多重PCR方法快速检测猪的5种呼吸道病原菌被引量：25
- 2009年
- 猪胸膜肺炎放线杆菌(App)、副猪嗜血杆菌(Hps)、支气管败血波氏杆菌(Bb)、产毒性多杀巴氏杆菌(T+Pm)和猪肺炎支原体(Mhp)是最常见的几种猪呼吸道病原菌。笔者参照文献报道的基因序列设计针对App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的特异性引物,对单一PCR条件进行系统优化后建立5重PCR方法。该多重PCR方法能对同一样品中5种病原菌的DNA模板进行扩增,且在5种病原菌之间没有交叉反应;对大肠杆菌等其它6种常见猪细菌性病原的检测结果均为阴性;对5种病原菌DNA模板检出的最小量均低于160 pg,且能从攻毒小鼠(App、Hps、Bb和T+Pm)肺脏组织8 h增菌的培养物中快速检测出相应的病原菌。对中国华中地区269份临床样本的检测结果表明,5种呼吸道病原菌在华中地区猪群中普遍存在,且混合感染情况十分严重。这些试验结果表明该多重PCR方法可用于猪呼吸道病原菌App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的单一或混合感染的鉴别诊断及病原流行病学调查。
- 薛云赵战勤陈杨邹浩勇何启盖李文洁熊金凤陈焕春
- 关键词：多重PCR
- 猪圆环病毒2型WH株的分离与鉴定
- 从临床上表现为仔猪断奶多系统衰竭综合征(PMWS)的病死猪中,取淋巴、脑等组织病料。扩增猪圆环病毒2型(PCV2)主要结构蛋白基因ORF2,证实为PCV2阳性病料组织后,接种到无PCV1污染的传代PK-15细胞分离培养,...
- 严伟东李文洁郭海兵陈品何启盖
- 关键词：猪圆环病毒2型
- 文献传递
- 我国部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)分子流行病学调查
- 猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type2，PCV2）可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎与肾病综合征（PDNS）、猪呼吸道疾病综合征（PRDC）、猪先天性振颤、母猪繁殖障碍、猪增生性...
- 李文洁
- 关键词：猪圆环病毒2型基因组序列同源性分析流行病学调查
- 文献传递
- 乳胶凝集试验快速检测副猪嗜血杆菌被引量：10
- 2009年
- 利用原核表达并经过纯化的副猪嗜血杆菌TbpBN端蛋白及人工合成的特异性多肽制备单克隆抗体,经碳化二亚胺(EDC)将纯化后的单克隆抗体IgG与羧化乳胶共价偶联,并对偶联乳胶的IgG含量及偶联时间等条件进行合理选择,建立了快速检测副猪嗜血杆菌的乳胶凝集试验方法。利用LAT方法检测148株副猪嗜血杆菌疑似菌株,参考16S rRNA-PCR方法的结果,符合率为83.1%,且致敏乳胶不与临床常见菌株发生凝集反应。结果表明,此检测方法具有操作简便、快速、特异性高的特点,便于在基层推广使用,为副猪嗜血杆菌的诊断和有效防治提供了参考和依据。
- 曹芸陈品何启盖张坤李文洁柴艳东
- 关键词：副猪嗜血杆菌单克隆抗体乳胶凝集
- 猪圆环病毒2型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
- 本研究旨在建立一种针对猪圆环病毒2型特异、敏感的定量PCR方法.根据GsnBank中猪圆环病毒2型ORF 2基因序列的保守区域设计合成引物和探针，以该PMD-ORF2阳性重组质粒为标准品模板制作荧光定量PCR标准曲线.用...
- 李文涛李文洁刘淑清汪洋杨昆邹浩勇何启盖
- 关键词：猪圆环病毒2型实时荧光定量PCRTAQMAN探针
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
- 本研究旨在建立一种针对猪圆环病毒2型特异、敏感的定量PCR方法 .根据GenBank中猪圆环病毒2型ORF 2基因序列的保守区域设计合成引物和探针,以该PMD-ORF2阳性重组质粒为标准品模板制作荧光定量PCR标准曲线....
- 李文涛李文洁刘淑清汪洋杨昆邹浩勇何启盖
- 关键词：猪圆环病毒2型实时荧光定量PCRTAQMAN探针
- 文献传递
- 中国部分地区猪圆环病毒2型的基因型分析被引量：31
- 2009年
- 对中国11个省(市)部分猪场收集的812份病料,应用ORF2-PCR进行检测,发现有235份为PCV2阳性病料。利用鉴别PCR方法从235份阳性病料中,检出10份PCV2a基因型和133份PCV2b基因型,检出率分别为4.2%、56.6%。进一步对ORF2-PCR检测阳性的部分模板进行全基因组扩增,构建阳性重组质粒,对插入质粒的片段进行测序鉴定,利用DNAStar进行同源性分析,同GenBank参考毒株绘制系统发育树,从系统发育树中也可分出PCV2a、PCV2b 2种基因型。鉴别PCR和测序结果说明,我国部分地区流行的猪圆环病毒2型以PCV2b基因型为主,少数为PCV2a基因型,也有既非PCV2a又非PCV2b的基因型(PCV2c?)。
- 李文洁李文涛严伟东陈焕春何启盖
- 关键词：猪圆环病毒2型分子流行病学
