公共文化服务平台

共 6 条记录，以下是 1-6

全选清除导出

排序方式：

DADS提高rAAV介导HSV-TK/GCV自杀基因系统旁观者效应机制的实验研究: 李忠庆谭浅丁芝祥

重组腺相关病毒介导的HSV—tk／GCV体系对兔晶状体上皮细胞的抑制作用被引量：3: 2009年; 目的探讨2型重组腺相关病毒（rAAV2）载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因／丙氧鸟苷体系（HSV—tk／GCV）对体外培养兔晶状体上皮细胞（N／N1003A）的抑制作用，以及晶状体上皮细胞死亡的机制。方法实验研究。rAAV2载体介导增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP）转染体外培养N／N1003A细胞，倒置荧光显微镜观察细胞中EGFP的表达，流式细胞仪检测病毒的转染效率。重组病毒rAAV2／HSV—tk转染体外培养的N／N1003A细胞为实验组，以没有转染重组病毒的细胞作为对照组，MTT法检测HSV—tk／GCV体系对细胞作用的浓度依赖性、时间依赖性和旁观者效应；相差显微镜、透射电镜、Hoechst33258染色观察细胞凋亡、坏死改变，流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化。不同浓度GCV对两组细胞的作用结果采用两因素析因设计的方差分析；两组细胞周期和凋亡的比较采用两样本t检验。结果rAAV2载体能介导EGFP基因稳定高效转染N／N1003A细胞。GCV对两组细胞的杀伤作用有剂量-效应依赖关系（F=13076．239，P〈0．001）；实验组N／N1003A—tk细胞的存活率低于对照组，差异有统计学意义（F=53947．119，P〈0．001）。实验组GCV的IC50为2mg／L，而对照组IC50为524mg／L。GCV的杀伤效应随时间延长而增强，且存在明显的旁观者效应。N／N1003A-tk细胞在GCV作用下出现明显的细胞凋亡和坏死，细胞的凋亡率7．18％±2．04％，与对照组（3．50％±0．56％）比较差异有统计学意义（t=3．83，P〈0．01）；S期细胞比例明显增加，G0／G1期细胞比例明显减少，与对照组比较差异有统计学意义（S期细胞比例：f=3．55，P〈0．01；G0／G1期细胞比例：t=4．29，P〈0．01）。结论GCV可有效杀伤重组腺相关病毒rAAV2／HSV-tk转染的兔晶状体上皮细胞，并具有较强的旁观者效应。; 丁芝祥谭浅刘双珍杨静李忠庆刘丹胡梅; 关键词：依赖病毒单纯疱疹病毒属胸苷激酶上皮细胞

早期生长反应因子1在H_2O_2损伤的晶状体上皮细胞中的表达及其意义被引量：1: 2008年; 目的探讨早期生长反应因子1(early growthresponse-1,Egr-1)在经H2O2损伤后的晶状体上皮细胞中的表达及其意义。方法用SP免疫组化法测定经H2O2处理后2h、8h、24h的晶状体上皮细胞中Egr-1的表达,用MAIS300图像分析系统测定其光密度值,采用t检验分析其在各时间点的表达水平。结果在H2O2作用后2h的晶状体上皮细胞中,Egr-1多为强阳性表达,平均光密度值为0.55±0.08;在H2O2作用后8h的晶状体上皮细胞中,Egr-1多为阳性表达,平均光密度值为0.40±0.09;两组比较,差异有非常显著的统计学意义(P<0.01)。在H2O2作用后24h的晶状体上皮细胞和对照组晶状体上皮细胞中,Egr-1未见表达,平均光密度值为0。结论Egr-1在H2O2损伤后的晶状体上皮细胞中早期表达,可能为氧化损伤引起的白内障的早期反应之一。; 刘丹谭浅李忠庆丁芝祥; 关键词：H2O2 免疫组化

重组增强型绿色荧光蛋白腺相关病毒转染兔晶状体上皮细胞的研究被引量：6: 2006年; 目的研究2型重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus2,rAAV2)载体介导增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)对体外培养兔晶状体上皮细胞(N/N1003A)的转染和病毒载体对晶状体上皮细胞增生的影响,探讨rAAV2作为后囊膜混浊基因治疗载体的可行性。方法rAAV2-EGFP按感染复数(mul-tiplicity of infection,MOI)为104、105、2×105、106转染N/N1003A细胞,倒置荧光显微镜下观察晶状体上皮细胞中EGFP的表达,流式细胞仪检测rAAV2-EGFP对N/N1003A细胞的转染效率,MTT比色法测定rAAV2载体对N/N1003A增生的影响。结果EGFP在细胞中的表达呈绿色,弥漫于整个胞浆。rAAV2-EGFP的转染效率随着MOI的增加和时间的延长而增加,MOI=106时,转染后第7d达到71.12%.MTT法显示各转染组与未转染组A值无统计学差异。结论重组腺相关病毒载体可以介导EGFP基因高效稳定转染晶状体上皮细胞,并且对细胞增生无抑制作用,腺相关病毒作为后囊膜混浊基因治疗载体是可行的。; 丁芝祥谭浅刘双珍刘丹李忠庆; 关键词：腺相关病毒增强型绿色荧光蛋白晶状体上皮细胞

HSV1-TK基因重组腺相关病毒载体的构建及表达被引量：4: 2008年; 目的:构建含单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV1-TK)基因的重组腺相关病毒载体质粒pSNAV2.0-TK,制备重组腺相关病毒rAAV2/HSV1-TK,并检测HSV1-TK基因在转染晶状体上皮细胞中的整合和表达,为后囊膜混浊的基因治疗奠定基础。方法:用基因重组技术构建含HSV1-TK基因的重组腺相关病毒载体质粒pSNAV2.0-TK,并通过PCR和酶切鉴定;将该质粒转染BHK-21细胞,经G418筛选出携带该质粒的载体细胞株BHK-21/TK,在辅助病毒的参与下包装成重组病毒rAAV2/HSV1-TK;用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法和高效液相色谱(HPLC)法检测重组病毒rAAV2/HSV1-TK的纯度,用斑点杂交法检测重组病毒的滴度;重组病毒rAAV2/HSV1-TK转染兔晶状体上皮细胞N/N1003A,用PCR和RT-PCR检测HSV1-TK基因的整合和表达。结果:经PCR和酶切鉴定重组质粒pSNAV2.0-TK构建成功;成功制备了重组病毒rAAV2/HSV1-TK,病毒滴度达1×1012v.g./mL;重组病毒转染N/N1003A细胞后,PCR和RT-PCR检测显示HSV1-TK基因在细胞中整合并且有效表达。结论:成功构建了含HSV1-TK基因的重组腺相关病毒载体质粒,制备了高滴度重组病毒rAAV2/HSV1-TK,HSV1-TK基因在转染该病毒的晶状体上皮细胞中可有效表达。; 丁芝祥谭浅刘双珍刘丹李忠庆彭建强; 关键词：腺相关病毒胸苷激酶晶状体上皮细胞基因治疗

DADS提高HSV-tk/GCV自杀基因系统对兔晶状体上皮细胞旁观者效应的机制被引量：1: 2011年; 目的:探讨二烯丙基二硫化物(diallyl disulfide,DADS)提高重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus kinase,HSV-tk)/丙氧鸟苷(ganci-clovir,GCV)系统对兔晶状体上皮细胞旁观者效应的可能机制。方法:应用免疫组织化学方法检测正常兔晶状体上皮细胞间隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)及转染HSV-tk基因的晶状体上皮细胞Cx43的表达,以及不同浓度的DADS诱导下的2种细胞的Cx43表达,MTT比色法检测细胞存活率。结果:兔晶状体上皮细胞Cx43及转染HSV-tk基因的晶状体上皮细胞的Cx43经DADS诱导后表达阳性明显增强,尤其以50μmol/LDADS最明显。MTT比色法检测显示DADS增强了HSV-tk/GCV自杀基因系统的旁观者效应。结论:DADS可以提高晶状体上皮细胞Cx43的表达,并可提高HSV-tk/GCV自杀基因系统对兔晶状体上皮细胞的旁观者效应。; 李忠庆谭浅丁芝祥刘丹; 关键词：二烯丙基二硫化物旁观者效应单纯疱疹病毒胸苷激酶间隙连接蛋白43

全选清除导出

共1页<1>

李忠庆

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

李忠庆

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈