李宝宗
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 供职机构：武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 重组pQE30 tPAr质粒在JM109菌株中的稳定性研究被引量：5
- 2003年
- 将构建好的含有人变异tPA基因的重组pQE30tPAr质粒的JM10 9菌株原始种子库菌种 ,在含Amp的平板培养基划线法连续传代至 10 0代 ,其在固体培养基中生长速度、菌落形态和菌体形态、Amp抗性等方面与原始种子库无明显差异 ;每隔 10代提取质粒DNA用HindⅢ和KpnⅠ限制性内切酶切割检查 ,酶切图谱没有改变 ;DNA测序未见tPAr基因变异 .用原代和第 10 0代培养诱导表达tPAr,表达水平和tPAr活性均无明显差异 .菌体的SDS pAGE图谱也完全相同 .以上结果表明所建立的JM 10
- 贺石汉李宝宗郜金荣叶林柏郑永勋佘应龙吴正辉
- 关键词：基因重组纤溶酶原激活剂传代培养
- 毕赤酵母表达的HBV全长Pres蛋白的分离纯化被引量：2
- 2005年
- 巴斯德毕赤酵母工程菌株GS115PreS经发酵在甲醇诱导下可高效表达分泌型全长PreS蛋白。Westernblot证明发酵液中存在着可溶性的分子量为48kD的PreS蛋白和蛋白质颗粒,蛋白质颗粒主要成分为48kD的全长Pres蛋白和28kD的S蛋白,电镜观察发现蛋白质颗粒直径为30nm。发酵液经过脱盐、浓缩处理后,上清液经DEAESFF阴离子交换柱得到纯化的PreS蛋白;超速离心和蔗糖密度梯度离心得到蛋白颗粒。该颗粒的主要组分为全长PreS蛋白(PreS1+PreS2+S),还有少量的主蛋白(S)。ELISA检测证明全长PreS蛋白和蛋白颗粒有着良好的抗原性,PN显示蛋白颗粒的抗原性比PreS蛋白的抗原性高。
- 韩雪叶林柏李宝宗佘应龙叶力郑竑高博郜金荣吴正辉
- 关键词：发酵分离纯化免疫原性
- HBV X基因的表达及在真核细胞中对内质网压力的作用被引量：1
- 2006年
- 运用PCR技术获得HBx基因,分别克隆到原核表达载体pET-his和真核表达载体pcDNA3.1(-)上。重组质粒pET-his-HBx转化大肠杆菌BL21(DE3)后,IPTG诱导表达,利用Ni柱纯化后的蛋白免疫家兔,获得特异性的抗-HBx兔抗血清。重组质粒pcDNA3.1(-)-HBx分别转染HepG2和Hep3B细胞系后,经RT-PCR和Westernblot检测,证明HBx可以在这两种细胞系中表达。通过报告基因的表达研究了HBx对XBP1和GRP78启动子的激活活性,结果表明瞬时转染HBx的细胞系中,XBP1和GRP78启动子介导的荧光素酶活性比相应的对照细胞增加了3～7倍。通过RT-PCR分析证明,转染了HBx的细胞中XBP1mRNA发生了剪切。因此,可以初步推断HBx在HepG2和Hep3B细胞中的表达可以引起内质网压力反应,为进一步阐明HBx表达对内质网的影响和肝脏病原发生机制奠定了基础。
- 高博李宝宗韩涛叶林柏王薇曾莹春孔令保郑竑韩雪吴正辉佘应龙叶力
- 关键词：乙型肝炎病毒HBX蛋白
- 重组tPA及其突变体纤溶活性的比较
- 2004年
- 将重组基因rtPA及其突变体rtPAm分别克隆到原核表达载体pET his上,通过平板筛选,双酶切和PCR鉴定获得阳性克隆子,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3).经IPTG诱导,表达出的两种tPA蛋白都形成不可溶的包涵体.SDS PAGE结果显示两种tPA蛋白分子量为4.0×104左右,表达产量较高.包涵体经尿素变性,透析复性后柱层析纯化,纤溶平板法测定激活纤溶蛋白酶的活性,结果显示rtPAm比活性比rtPA高70%左右.
- 李宝宗郑竑叶林柏郜金荣佘应龙贺石汉吴正辉
- 关键词：组织型纤溶酶原激活物克隆活性比较
- 乙肝病毒X蛋白在肝细胞系中激活内质网压力反应
- 以 HBV 基因组(ayw 亚型)为模板,PCR 获得 HBx 基因,分别克隆到表达载体 pET-his 和 pcDNA3.1(-)上。重组质粒 pET-his-HBx 转化大肠杆菌 BL21(DE3)后,IPTG 诱导...
- 李宝宗叶林柏吴正辉佘应龙郜金荣
- 文献传递
- HCV NS5B蛋白对HCVRNA的模板特异性研究被引量：5
- 2005年
- 在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中表达并纯化HCV的依赖于RNA的RNA多聚酶(RNAdependentRNApolymerase,RdRp,NS5B蛋白)。以HCV正、负链RNA3′末端的序列为模板,体外研究NS5B蛋白催化的RNA合成。结果显示,正链RNA在体外不能指导RNA合成,而负链RNA模板可以产生一条全长的正链RNA产物,表明NS5B对负链RNA具有模板特异性。NS5B对负链RNA的特异性在模板竞争性实验中得到进一步证实,正链RNA的存在和竞争对以负链为模板的RNA合成没有影响。这样,就合理解释了在HCVRNA复制时正链RNA的数量远比负链RNA多这一问题。同时,本实验的结果也为进一步研究病毒或其它细胞因子参与以正链RNA为模板进行的RNA合成,以及有关负链RNA模板特性的研究奠定了基础。
- 叶力叶林柏佘应龙Khalid Amine Timani廖庆姣吴正辉郜金荣孔令保李宝宗曾莹春
