李剑凤
- 作品数：9 被引量：26H指数：3
- 供职机构：安徽大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省优秀青年科技基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：生物学化学工程环境科学与工程更多>>
- Trametessp.AH28-2漆酶A的诱导合成及其基因5′-端调控区的克隆与分析被引量：9
- 2005年
- Trametessp.AH28_2漆酶同工酶的合成需要铜离子的存在,较高浓度的Cu2+有利于漆酶合成。在以葡萄糖为碳源补加0·5mmol/LCu2+的培养基中生长时,发酵液漆酶活性为44·3u/L,同时补加4·0mmol/L邻甲苯胺时,漆酶酶活提高到71·0u/L;而在补加Cu2+和邻甲苯胺的纤维二糖培养基中,酶活上升至2584u/L,为葡萄糖培养基的36·4倍。邻甲苯胺和铜离子诱导产生的漆酶同工酶组分,均为漆酶A(LacA)。竞争性RT_PCR分析表明,漆酶A基因(lacA)转录本的累积伴随有发酵液漆酶活性的增加,邻甲苯胺对lacA的调控发生在转录水平。lacA结构基因长2110bp,含有10个内含子;lacA的cDNA序列为1560bp,编码520aa的漆酶蛋白,其氨基酸序列与其它真菌漆酶具有较高的相似性。采用改进的反向PCR技术,扩增得到的lacA5′_端调控区长1881bp,分析表明,该区域上分布有1个TATA框、7个CAAT框和多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括5个MRE元件、9个CreA结合位点、4个XRE元件、2个STRE元件和7个氮因子调控位点等。这些序列位点的存在部分地对应了菌株摇瓶发酵条件下lacA的表达规律。
- 洪宇植肖亚中房伟房伟查向东张书祥周宏敏
- 关键词：真菌漆酶定量RT-PCR顺式作用元件
- 新型栓菌漆酶基因的克隆及其在酵母细胞活性表达
- 漆酶(Laccase,EC 1.10.3.2)是一类含铜的多酚氧化酶,能催化多种酚类和非酚类化合物等发生氧化,并伴随有分子氧还原成水,在木素降解、异生物转化、纺织染料脱色等工业和环境生物技术领域有重要潜在应用价值。栓菌4...
- 洪宇植李剑凤肖亚中
- 文献传递
- 栓菌420漆酶同工酶B基因克隆及异源表达被引量：3
- 2007年
- 根据铜结合区的保守氨基酸序列设计简并引物,扩增栓菌420(Trametessp.420)基因组,结合长距离反向PCR(LD-IPCR)技术,克隆得到新型漆酶同工酶B基因(lacB),包括结构基因(2255bp)及5′-和3′-非编码序列。lacB含12个内含子,其cDNA序列长1560bp,编码495aa成熟多肽和24aa信号肽。lacB与其它不同来源的真菌漆酶基因具有较高的同源性,而与植物、细菌、昆虫的漆酶基因同源性低于25%。将不含信号序列的lacBcDNA通过质粒pPIC9克隆到表达载体pPIC9K上,电击转化毕赤酵母GS115细胞,经BMM-ABTS平板筛选得到漆酶分泌阳性转化子。
- 李剑凤洪宇植肖亚中
- 关键词：毕赤酵母漆酶基因克隆异源表达
- 漆酶基因在毕赤酵母中高效表达
- 根据真菌漆酶铜结合区保守的氨基酸序列设计简并引物，扩增Trametessp.420基因组，结合长距离反向PCR(LD-IPCR)，成功获得新型漆酶同工酶基因lacE。克隆得到的lacE序列长2717bp，包括完整的结构基...
- 李剑凤
- 关键词：异源表达漆酶基因毕赤酵母分子生物学
- 文献传递
- 栓菌420漆酶基因的克隆及其在Pichia pastoris的高效表达
- 采用简并引物和长距离反向PCR(LD-IPCR),以栓菌420(Trametes sp．420)的基因组为模板,克隆得到一新的漆酶同工酶基因lacD。该基因开放读码框长2052bp,含有8个内含子。lacD序列与其它担子...
- 洪宇植周宏敏李剑凤肖亚中
- 文献传递
- 一种重组酵母Pp420D生产漆酶的方法
- 一种重组酵母Pp420D生产漆酶的方法，由申请人自主构建的基因工程菌株酵母Pp420D制备种液后接种在培养基上于25～31℃条件培养20～30小时，维持溶氧25～35％，然后按每升发酵培养基每小时添加12～25mL营养液...
- 肖亚中洪宇植周宏敏李剑凤
- 文献传递
- 一种重组酵母Pp420D生产漆酶的方法
- 一种重组酵母Pp420D生产漆酶的方法，由申请人自主构建的基因工程菌株酵母Pp420D制备种液后接种在培养基上于25～31℃条件培养20～30小时，维持溶氧25～35％，然后按每升发酵培养基每小时添加12～25mL营养液...
- 肖亚中洪宇植周宏敏李剑凤
- 文献传递
- 栓菌420漆酶C基因的克隆、高效表达及重组酶的染料脱色潜能被引量：14
- 2007年
- 根据漆酶铜结合保守区氨基酸序列设计简并引物,从新型漆酶合成菌株栓菌420(Trametes sp.420)基因组DNA扩增得到一新的漆酶同工酶基因(lacC)片段,应用长距离反向PCR技术获得其两端侧翼序列。克隆得到的lacC序列长3640bp,包括长2263bp的开放读码框及5′和3′-非编码区。lacC cDNA序列长1560bp,编码一519aa的多肽。推导的LacC蛋白序列内部存在有10个潜在的N-糖基化位点和4个铜原子结合区。将不含自身信号序列的lacC cDNA以pPIC9载体为媒介克隆到表达载体pPIC9K上,转化毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115细胞。重组菌在含有0.3mmol/LCuSO4和0.8%丙氨酸的BMM培养基中20℃培养9d,重组漆酶(rLacC)产量达到1.62×104U/L。用发酵粗酶液对终浓度50mg/L的染料进行脱色实验,结果表明,6U/L的rLacC对测试的三甲基类和偶氮类染料具有良好的脱色作用,小分子介体ABTS和HBT能够提高rLacC对染料的脱色效率和脱色速度。
- 李剑凤洪宇植肖亚中
- 关键词：TRAMETES真菌漆酶异源表达染料脱色
- 真菌漆酶合成调控的分子机制
- Trametes sp.AH28-2漆酶A（LacA）的合成需要铜离子的存在.在Cu2+和邻甲苯胺存在的条件下,纤维二糖培养基中的酶活（2,584U/L）是葡萄糖培养基的36.4倍.定量RT-PCR分析表明,lacA转录...
- 洪宇植李剑凤房伟肖亚中
- 关键词：真菌漆酶定量RT-PCR顺式作用元件
- 文献传递
