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蛇床子素对体外培养成骨细胞成骨相关因子表达的影响被引量：23: 2011年; 目的:研究蛇床子素(Osthol)对体外培养大鼠成骨细胞(Rat calvarial osteoblasts,ROB)成骨相关因子表达的影响。方法:取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法获得成骨细胞,培养于含10%FBS的MEM培养液中,传代之后进行成骨性诱导培养并加药干预,蛇床子素浓度为1×10-5mol/L,于成骨性诱导培养0、6、12、24、48和72小时提取总RNA,RT-Real Time PCR法检测Runx-2、bFGF、IGF-Ⅰ和Osterix(OSX)等成骨性相关因子的表达情况;第3、6、9、12天分别测钙盐沉积量和骨钙素分泌量。结果:1×10-5mol/L的蛇床子素能够显著提高ROB的Runx-2、bFGF、IGF-Ⅰ、Osterix基因的表达量,并促进骨钙素的分泌和钙盐沉积,从而增强细胞成骨性活动。结论:蛇床子素能促进ROB的矿化成熟并增强细胞成骨性活动,是促进骨修复愈合及抗骨质疏松的重要原因之一。; 明磊国王鸣刚陈克明周建韩桂秋朱瑞清; 关键词：蛇床子素骨钙素胰岛素生长因子碱性成纤维细胞生长因子 OSTERIX

淫羊藿素和脱水淫羊藿素对骨髓间充质干细胞成骨性分化影响的比较研究被引量：12: 2011年; 目的比较研究淫羊藿素和脱水淫羊藿素对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的影响。方法贴壁筛选法体外培养rBMSCs,以1×10-5 mol.L-1的淫羊藿素和脱水淫羊藿素对rBMSCs的成骨性分化进行药物干预,比较淫羊藿素组、脱水淫羊藿素组以及不加药的对照组之间碱性磷酸酶(ALP)活性、ALP阳性克隆数(colonies stained positive for alkaline phosphatase,CFU-FALP)、骨钙素分泌量、钙盐沉积量以及钙化结节数量的差异,Real TimeRT-PCR法检测IGF-1、Osterix和Runx-2的基因表达情况。Western-blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量。结果淫羊藿素可显著增强rBMSCs的ALP活性,促进钙盐沉积和骨钙素的分泌,增加CFU-FALP和钙化结节数量,提高IGF-1、Osterix和Runx-2的mRNA水平,同时也可增强Ⅰ型胶原蛋白的分泌,而脱水淫羊藿素并未表现出类似效应。结论淫羊藿素促进rBMSCs成骨性分化的活性显著高于脱水淫羊藿素,可能是二者异戊烷链上的构型差异,导致淫羊藿素的生物活性强于脱水淫羊藿素,提示我们可以通过对药物进行化学结构的改造,增强药效,降低毒性,从而研究开发出新型抗骨质疏松药物。; 翟远坤李志忠陈克明张娜程国政朱瑞清; 关键词：淫羊藿素骨髓间充质干细胞成骨性分化 I型胶原

蛇床子素对体外培养破骨细胞骨吸收及细胞凋亡的影响被引量：31: 2012年; 研究蛇床子素对破骨细胞骨吸收的影响及其分子机制。采用体外分离、培养兔破骨细胞,与盖玻片及骨磨片共同培养,使用1×10?5 mol.L?1蛇床子素刺激破骨细胞,观察活体细胞并依据HE、TRAP、骨陷窝甲苯胺蓝染色鉴定破骨细胞;进行骨吸收陷窝和面积定量分析,吖啶橙染色统计凋亡细胞;real time PCR及Western blotting法检测相关基因和蛋白。与空白对照组比较,1×10?5 mol.L?1蛇床子素能够明显提高破骨细胞凋亡率并通过抑制RANKL和TRAP等相关基因及JNK1/2磷酸化水平抑制其骨吸收。结果提示,蛇床子素可以通过RANK+RANKL/TRAF6/Mkk/JNK途径刺激破骨细胞凋亡并抑制骨吸收。; 明磊国王鸣刚陈克明周建韩桂秋朱瑞清; 关键词：蛇床子素破骨细胞细胞凋亡骨吸收 RANKL OPG TRAP

淫羊藿苷对体外培养成人骨髓基质干细胞增殖与成骨性分化的影响被引量：19: 2010年; 目的研究淫羊藿苷对体外培养成人骨髓基质干细胞(human bone marrow stromal stem cells,hBMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法取住院患者术后骨髓标本(男,40岁),利用骨髓细胞处理试剂盒分离单核层细胞,培养于含10%FBS的DMEM培养液中,3d后首次换液,12d后传代培养。培养基中淫羊藿苷终浓度分别为5×10-5、1×10-5、5×10-6、1×10-6、5×10-7、1×10-7mol/L。增殖分析采用MTT法,于成骨性诱导培养第8d测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,第14d进行茜素红染色及钙化结节计数。结果原代培养细胞呈典型成纤维细胞样形态;淫羊藿苷剂量依赖性抑制hBMSCs增殖,但能显著促进其向成骨性分化,表现为提高hBMSCs的ALP活性,增加钙化结节数量。结论终浓度为5×10-5mol/L淫羊藿苷显著促进hBMSCs的成骨性分化,证明淫羊藿苷是中药淫羊藿抗骨质疏松的有效成分。; 明磊国王鸣刚陈克明李志锋翟远坤程国政周建朱瑞清韩桂秋; 关键词：骨髓基质干细胞增殖淫羊藿苷

淫羊藿苷对体外培养乳鼠颅骨成骨细胞增殖、分化及成熟的影响被引量：28: 2011年; 目的:研究淫羊藿苷对体外培养大鼠乳鼠颅骨成骨细胞(Rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖和分化成熟的影响。方法:取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法培养ROB,每3 d换液1次,铺满80%皿底后传代培养。采用终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L的淫羊藿苷进行药物干预,MTT法检测细胞增殖率,同时检测成骨性诱导培养9 d后的碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性,筛选出最佳浓度。以最佳药物浓度干预ROB的分化成熟,比较淫羊藿苷组和不加药的对照组之间的钙化结节数量及碱性磷酸酶阳性克隆数(coloniesstained positive for alkaline phosphatase,CFU-FALP);提取总RNA,Real Time RT-PCR检测Runx-2与Osterix mRNA的表达情况;Western-blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量。结果:淫羊藿苷剂量依赖性抑制细胞的增殖,但可强烈促进ROB的分化成熟,最佳药物浓度为1×10-5mol/L。该浓度下的淫羊藿苷可显著增加钙化结节和CFU-FALP数量,促进与成骨相关的转录因子Runx-2与Osterix mRNA的表达,同时也可增强Ⅰ型胶原蛋白的分泌。结论:浓度为1×10-5mol/L的淫羊藿苷可显著促进ROB的分化成熟,提示淫羊藿苷有较强的促骨形成活性,具备开发为抗骨质疏松新药的潜力。; 翟远坤李志忠陈克明张娜程国政朱瑞清; 关键词：淫羊藿苷成骨细胞分化

不同处理时间50Hz 3.6mT正弦交变磁场对人脐带干细胞增殖与成骨性分化的研究被引量：1: 2012年; 目的：研究50 Hz 3.6 mT不同处理时间的正弦交变电磁场（Sinusoidal electromagnetic field,SEMFs）对体外培养人脐带干细胞（Human umbilical cord stem cells,HUCSC）增殖与成骨性分化的影响。方法：体外分离培养HUCSC,传代后随机分为6组。用频率50 Hz,3.6 mT的SEMFs分别每天处理HUCSC 0.0（对照组）、0.5、1.0、1.5、2.0 h和2.5 h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法测定细胞增殖,在磁场处理后的15 d和17 d分别用茜素红和vonkossa对钙化结节进行染色,在磁场处理后的第4天和第6天PCR检测胶原Ⅰ（Collagen-Ⅰ）和骨形态发生蛋白（Bone morphogenetic protein-2,BMP-2）mRNA表达量的变化,在磁场处理后的10、12、14 d和16 d测定ALP活性。结果：1.0、1.5、2.0 h和2.5 h组促进HUCSC增殖;磁场处理后的7~9 d细胞出现钙化结节;在SEMFs处理后的第14天和第16天0.5 h组和1.0 h组碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）活性显著高于对照;SEMFs处理组能增加HUCSC钙化面积,其中尤以0.5 h和1.0 h最为明显;SEMFs能增加Collagen-Ⅰ和BMP-2mRNA表达量,其中尤以0.5 h和1.0 h组作用最为明显。结论：50 Hz,3.6 mT 1.0、1.5、2.0 h和2.5 h促进HUCSC增殖,同时SEMFs组能促进体外培养HUCSC成骨性分化,尤以处理0.5 h和1.0 h促进成骨性分化最为明显。; 周建葛宝丰王家琪陈克明朱瑞清; 关键词：增殖分化

一种鸡舍通风降温装置: 本实用新型公开了一种鸡舍通风降温装置，涉及降温装置领域，包括底板，底板的底部设置有行走机构，底板的内部设置有调节机构，调节板远离底板的一侧固定连接有连接柱，连接柱远离调节板的一端设置有内部设置有吹风机构的通风管。本实用新...; 任海伟王治业祝英魏亚琴朱瑞清杜津浩; 文献传递

不同强度正弦交变磁场对体外培养成骨细胞增殖与分化影响被引量：11: 2010年; 目的研究频率为50Hz的不同强度正弦交变电磁场对体外培养成骨细胞(Osteoblasts,OB)的影响。方法原代培养大鼠颅骨成骨细胞,传代后随机分为9组,每组分别暴露在频率50Hz,磁场强度为0(对照组)、0.9、1.2、1.5、1.8、2.1、2.4、2.7、3.0mT的正弦交变磁场中,30min/次/d。倒置相差显微镜下观察细胞形态,48h后测定细胞增殖情况,第3、6、9、12、15d测定碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)活性,第10d进行ALP组织化学染色,第12d进行茜素红钙化结节染色。结果成骨细胞于磁场暴露处理3d～4d后呈漩涡样分布;与对照组相比,0.9、1.2、1.5、1.8、2.1、2.7和3.0mT组均显著抑制细胞增殖(P<0.01或P<0.05),2.4mT组无明显影响(P>0.05);除3.0mT组外,其它各组的ALP活性均高于对照组(P<0.05),尤以1.8mT组最高(P<0.01);1.2、1.5、1.8、2.1和2.4mT组的ALP阳性克隆数明显多于对照组,1.8mT组最多,0.9、2.7和3.0mT组与对照组无明显差别;茜素红钙化结节计数结果与ALP组织化学染色结果的趋势相一致。结论 50Hz,0.9mT～3.0mT的正弦交变磁场(2.4mT除外)均抑制体外培养成骨细胞的增殖,但能促进其分化成熟与钙化,尤以1.8mT效果最为明显。; 周建陈克明葛宝丰李志锋程国政韦哲明磊国翟远坤朱瑞清韩桂秋; 关键词：成骨细胞磁场增殖分化

不同干预时间正弦电磁场对大鼠骨髓基质干细胞成骨性分化的影响被引量：3: 2010年; 目的:研究不同治疗时间正弦电磁场(50 Hz,1.8 mT)对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞成骨性分化的影响,筛选出最佳临床治疗时间。方法:采用贴壁筛选法培养原代大鼠骨髓间充质干细胞,每天在频率为50 Hz,强度为1.8 mT的磁场环境中处理0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h和2.5 h;同时设立未经电磁场处理的细胞作为对照组。于处理后的第3 d、6 d、9 d和12 d分别测定细胞碱性磷酸酶活性、骨钙素分泌量、钙化结节数以及Ⅰ型胶原表达量,并比较各组间差异;于处理后12 h提取细胞总RNA,用RT Real-TimePCR法检测成骨性分化基因Osterix表达情况。结果:正弦电磁场干预1.0 h能明显促进骨髓间充质干细胞的成骨性分化,表现在该组的碱性磷酸酶活性、骨钙素分泌量、钙化结节数、I型胶原表达量以及成骨性分化基因的表达量最高,亦显著高于对照组(P<0.05)。结论:50Hz、1.8mT强度的正弦电磁场能促进骨髓间充质干细胞的成骨性分化,以作用1.0 h成骨效果最为明显。; 程国政王鸣刚陈克明翟远坤朱瑞清韩桂秋周建明磊国; 关键词：正弦电磁场间充质干细胞分化

淫羊藿苷及其拟代谢物的雌激素样作用研究被引量：16: 2012年; 目的:用雌激素受体(Estrogen Receptor,ER)表达阳性细胞株人乳腺癌细胞MCF-7检测淫羊藿苷及其拟代谢物的雌激素样活性[1]及构效关系。方法:用MTT法,增殖细胞核抗原(Proliferating CellNuclear Antigen,PCNA)免疫组化法检测其对体外培养MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响;Real-timeRT-PCR法检测ERα、ERβ和PS2 mRNA表达水平变化。结果:淫羊藿素促进MCF-7增殖,而淫羊藿苷、淫羊藿次苷I和脱水淫羊藿素促增殖效应不明显;淫羊藿素10-9mol.L-1组PCNA阳性表达强于其它三组;淫羊藿素极显著增加ERα和PS2 mRNA的表达水平。所有受试物均不促进ERβmRNA表达。淫羊藿素促进ERα蛋白表达强于其它三组。结论:淫羊藿素有明显的雌激素样作用,而淫羊藿苷及其它两种受试物雌激素样作用不明显。四种受试物均不促进ERβmRNA表达。; 朱瑞清李志忠周建韩桂秋程国政翟远坤; 关键词：淫羊藿素淫羊藿苷人乳腺癌细胞MCF-7 雌激素样作用构效关系

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朱瑞清

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