朱学亮
- 作品数：59 被引量：100H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 绵羊CD46基因的克隆及真核表达
- 2014年
- 为了研究绵羊CD46蛋白的功能,根据从GenBank数据库获得的绵羊CD46基因的部分cDNA序列设计引物,以绵羊外周血淋巴细胞总RNA为模板,应用RACE方法扩增了绵羊CD46基因的完整开放阅读框序列,利用生物信息学软件对CD46cDNA及CD46蛋白结构进行了预测分析。结果显示,绵羊CD46cDNA序列开放阅读框长1 083bp,编码由360个氨基酸残基组成的多肽,该多肽的理论分子质量为39ku,理论等电点为6.5。对该蛋白结构分析时发现,绵羊CD46第1~42位氨基酸残基为信号肽序列,共有5处N糖基化位点,4处蛋白激酶C磷酸化位点,5处Ⅱ-酪蛋白激酶磷酸化位点,7处N-豆蔻酰化位点。二级结构中无α螺旋,β折叠占26.1%,其余73.9%为转角,该蛋白具有4个结构域,与人源CD46的同源性较高。同时将CD46基因克隆到pCMV-Myc载体中,构建了真核表达质粒pCMV-Myc-CD46;将构建的重组质粒转染哺乳动物细胞CHO-K1以进行瞬时表达。Western-blot结果显示,CD46基因在真核细胞中成功获得了表达。上述研究结果为以后开展绵羊CD46的功能研究奠定了基础。
- 乔洋洋陈蕾孙铭苑朱学亮王海明窦永喜才学鹏
- 关键词：绵羊免疫印迹
- 鉴别诊断羊痘野毒感染的试剂盒及制备与检测方法
- 本发明为公开一种用于鉴别诊断羊痘野毒感染的ELISA抗体检测试剂盒。本发明的鉴别诊断羊痘野毒感染的间接ELISA抗体检测试剂盒中有包被抗原的ELISA抗体检测板和酶标二抗，其包被的抗原为重组羊痘病毒ORF95蛋白和ORF...
- 才学鹏朱学亮刘振勇骆学农窦永喜李辉
- 文献传递
- 组蛋白去乙酰化酶抑制剂对小反刍兽疫病毒复制的影响
- 2022年
- 旨在探究组蛋白去乙酰化酶抑制剂对小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)复制的影响,以确定组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)在PPRV复制过程中的作用。采用RT-qPCR法检测PPRV感染后Vero细胞HDACs(HDAC1~11)mRNA表达水平的变化;用针对不同类型HDACs的抑制剂处理感染PPRV的Vero细胞48 h,Western blot筛选影响PRPV N蛋白表达的抑制剂;应用筛选出的抑制剂处理感染PPRV的Vero细胞,通过RT-qPCR、Western blot和TCID_(50)法进一步分析抑制剂对病毒RNA、蛋白和病毒滴度的影响。结果显示,PPRV感染后,Vero细胞HDAC2 mRNA水平显著升高(P<0.05);SAHA、TMP269、MGCD0103处理后,PPRV N蛋白的表达量明显降低,且呈剂量负相关;SAHA、TMP269、MGCD0103也显著降低PPRV N RNA表达水平(P<0.05,P<0.05,P<0.01)和病毒滴度(P<0.05,P<0.05,P<0.01)。这表明Ⅱa类HDACs抑制剂和Ⅰ类HDACs抑制剂能抑制PPRV的复制,Ⅰ类HDACs(HDAC1~3)和Ⅱa类HDACs(HDAC4~5、HDAC7、HDAC9)可能参与调控PPRV的感染。
- 潘春容邓瑞雪邓瑞雪朱学亮孙跃峰朱学亮蒙学莲
- 关键词：组蛋白去乙酰化酶抑制剂组蛋白去乙酰化酶小反刍兽疫病毒
- 小反刍兽疫病毒H蛋白抗体iELISA检测方法及应用
- 本发明以筛选的小反刍兽疫病毒(Peste Des Petits Ruminants Virus,PPRV)H蛋白B细胞表位为基础，选择其中反应原性较好的4个抗原表位肽串联后合成作为包被抗原，建立针对PPRV H蛋白抗体的...
- 窦永喜钱榜李彦敏朱学亮张志东张学燕
- 文献传递
- 小反刍兽疫病毒血凝素蛋白与受体蛋白SLAM的相互作用被引量：3
- 2014年
- 旨在利用免疫共沉淀技术验证小反刍兽疫病毒血凝素蛋白和受体蛋白SLAM间的相互作用。鉴于截短的H蛋白仍具有正常的与细胞受体结合的能力,分别构建pcDNA3.1-tH真核表达载体和SLAM及其缺失突变体(m1-胞外区、m2-无信号肽胞外区、m3-胞外区N端29-136位氨基酸和m4-胞外区C端137-240位氨基酸)编码基因的pEGFP-N1系列真核表达载体,将测序正确的重组质粒共转染中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1细胞株,利用免疫共沉淀技术验证tH蛋白与SLAM蛋白相互作用的关键氨基酸区段。结果表明,成功构建了预期的重组表达载体,转染CHO细胞后目的蛋白正确表达;免疫共沉淀时,tH能与SLAM、m1、m2和m3蛋白发生反应,但没有与m4蛋白发生反应。由此可知,SLAM N端29-136位氨基酸是决定SLAM与PPRV H蛋白结合的关键氨基酸区段,这与麻疹病毒属其他宿主SLAM受体的研究结果一致。
- 蒙学莲窦永喜朱学亮骆学农才学鹏
- 关键词：血凝素蛋白SLAM免疫共沉淀相互作用
- 小尾寒羊β2微球蛋白的表达及其二级结构预测分析
- 2020年
- 为研究小尾寒羊绵羊白细胞抗原Ⅰ(Ovis aries leukocyte antigen classⅠ,OLAⅠ)轻链四聚体前体链β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)的结构和功能,根据GenBank中公布的绵羊β2m基因设计特异性引物,提取小尾寒羊全血中的RNA并运用RT-PCR方法扩增绵羊β2m基因,将扩增的绵羊β2m基因克隆到pMD18-T载体,筛选出阳性克隆菌pMD18T-OLAⅠ-β2m,经双酶切后与表达载体pET-28a(+)连接,再转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中构建pET-28a(+)-OLAⅠ-β2m重组表达菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白大小及表达情况;运用SOMPA在线软件预测OLAⅠ-β2m蛋白的二级结构。PCR扩增结果显示,目的基因大小为357 bp,与理论值相符,扩增片段成功克隆到pMD18-T载体,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切筛选及测序,成功获得阳性克隆菌株pMD18-T-OLAⅠ-β2m,插入的目的片段大小为357 bp。阳性克隆菌株与表达载体pET-28a(+)经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后连接,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后获得pET-28a(+)-OLAⅠ-β2m重组表达菌,经IPTG诱导表达,Western blotting检测目的蛋白大小为17.3 ku,目的蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体的形式表达,经洗涤、变性、纯化、初步获得SDS-PAGE纯化的OLAⅠ-β2m蛋白;PORTER在线软件预测OLAⅠ-β2m蛋白的二级结构元件α-螺旋(Hh)、β-折叠(Ee)和无规则卷曲(Cc)分别占22.03%、22.03%和55.93%。本研究成功构建了小尾寒羊β2m基因的pET-28a(+)重组表达体系,运用SOMPA在线软件预测OLAⅠ-β2m的二级结构,为下一步绵羊OLAⅠ类分子四聚体的构建奠定基础。
- 王战红赵志荀吴国华朱学亮黄彩云祁斌亮赵芳燕张志东张强
- 关键词：Β2微球蛋白小尾寒羊主要组织相容性复合体包涵体
- 小反刍兽疫病毒H糖蛋白基因胞外区的表达及分析
- 蒙学莲窦永喜翟军军闫丰超朱学亮骆学农才学鹏
- 一种用于预装柱纯化蛋白的简易助力器
- 本实用新型公开了一种适于预装柱纯化蛋白的简易助力器，其结构由底座、滑杆、止滑结、滑动块、横杆、滑套、增砣套杆和增砣组成；底座放在平整的台面上；滑杆通过螺纹孔和底座相连；止滑结固接在滑杆的等高位置处；滑动块套在横杆上，下面...
- 张少华才学鹏朱学亮骆学农郭爱疆窦永喜侯俊玲郑亚东
- 文献传递
- 基于H蛋白表位合成肽的小反刍兽疫病毒抗体化学发光检测方法及应用
- 本发明建立针对PPRV H蛋白抗体的化学发光免疫分析检测方法，设计合成PPRV H蛋白B细胞表位作为抗原，通过优化各步反应条件，确定临界值且进行特异性、敏感性及重复性试验。研究证实建立的检测方法临界值为S/P>9....
- 钱榜窦永喜朱学亮蒙学莲张学燕赵帅阳孙跃峰张志东李彦敏
- 文献传递
- 一种小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位肽及其确定、制备方法和应用
- 本发明涉及一种小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位肽，抗原表位肽的氨基酸序列为：H123：<Sup>123</Sup>KFLNPDREYDFRDLR<Sup>137</Sup>,或/和H185：<Sup>185</Sup>GT...
- 梁忠祥窦永喜朱学亮蒙学莲张志东才学鹏
- 文献传递
