方宏筠
- 作品数：78 被引量：1,431H指数：24
- 供职机构：辽宁师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省科技厅科技攻关项目辽宁省教育厅资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 人egf基因在突变枯草芽孢杆菌WYBS2001中的转化、分泌表达及其产物功能研究(英文)被引量：6
- 2003年
- 通过紫外线突变诱导获得了对感染致病菌具有显著抑菌作用的枯草芽孢杆菌突变株WYBS2 0 0 1。采用PCR技术人工合成了 175bp的人表皮生长因子 (hEGF)的基因片段 ,并引入PstⅠ、HindⅢ酶切位点、起始密码子及pUS186载体信号肽序列CTTAGA。经DNA测序分析 ,合成的片段与人egf基因序列完全一致。然后将其克隆至枯草杆菌分泌型质粒载体pUS186上构建成重组质粒pUSE ,并转化枯草杆菌突变菌株WYBS2 0 0 1,获得转人egf基因的枯草杆菌生态工程菌WYBS2 0 0 1T。RIA检测结果表明 ,WYBS2 0 0 1T阳性工程菌培养的上清液中可检测到hEGF ,含量为 7 6ng ml。如果培养液中添加蛋白酶抑制剂可提高hEGF检测量。通过多代的培养仍然能够稳定地分泌表达hEGF。生物学功能实验表明 ,分泌的hEGF对人K5 6 2体外培养细胞的增殖和生长具有明显生物学活性。对烧伤动物模型的功能性实验观察到 ,WYBS2 0 0 1T工程菌制剂对动物的烧伤有明显的治疗作用。该研究表明 。
- 王关林易庆方宏筠
- 关键词：分泌表达
- 黑核桃体细胞胚状体发生及其基因转化系统的建立被引量：53
- 2000年
- 以我国种植的优良品种黑核桃 (JuglansnigiaL .)幼胚和幼叶为外植体诱导出体细胞胚状体 ,通过根癌农杆菌介导将nptⅡ和gus基因导入体细胞胚 ,同时研究了激素、体细胞胚的发育时期及预培养等对转化率的影响 ,建立了黑核桃体细胞胚基因转化系统 ,还分析了体细胞胚胎转化系统的特点和潜力。
- 方宏筠王关林
- 关键词：黑核桃体细胞胚GUS基因基因转化
- 抗虫基因(CpTI)辣椒转化的初步研究被引量：22
- 2002年
- 以辣椒叶片为外植体 ,通过比较基因型、培养基成分等因素对不定芽分化的影响 ,建立了具有较高分化频率的再生系统。用农杆菌介导把豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入辣椒 ,在筛选培养基上获得抗性植株 ,经Southern斑点杂交检测 。
- 王朋王关林方宏筠
- 关键词：辣椒基因转化抗虫基因CPTI农杆菌介导抗性植株
- 雪花莲凝集素基因转化菊花及转基因植株的抗蚜性研究被引量：43
- 2004年
- 针对菊花存在的蚜虫虫害问题 ,采用农杆菌介导法将gna基因导入菊花叶片 ,共获得 93个转化克隆。研究了影响转化频率的主要因素 ,得出在使用 pH5 6的YEB培养基 ,菌液浓度OD60 0 =0 4 ,4 5日苗龄中部叶片预培养 1d ,共培养 4d ,共培养的培养基中加入 0 5mg/LGA3 的条件下可使转化频率提高到 11 2 1%。PCR、实时荧光PCR检测结果表明 ,外源基因已整合到植物细胞基因组中。转化植株幼苗饲虫实验表明 ,不同转化克隆的抗蚜性差异较大 ,蚜口密度抑制率从 10 %～ 84 %不等 ,平均蚜口密度抑制率为 39.4 %。
- 王关林刘彦泓郭绍华王宇纪彦方宏筠
- 关键词：菊花根癌农杆菌
- 苦参对鸡大肠杆菌的抑菌作用及其机理研究被引量：49
- 2006年
- 目的阐明苦参的抑菌作用及机理,为生产实践提供理论依据。方法采用牛津杯法及液体倍比稀释法对鸡大肠杆菌等常见致病细菌进行了敏感性试验;通过电镜观察,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对蛋白表达的研究,生长曲线的绘制以及流式细胞仪对菌体细胞周期的分析,对苦参碱粗提物的抑菌作用及机理进行研究。结果苦参对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌均有明显抑制作用,抑菌谱广;药物是通过抑制鸡大肠杆菌功能蛋白的表达,从而影响菌体的细胞周期,使I期菌数增加,R期菌数下降,最终菌体不能达到正常对数生长期而直接进入衰亡期;菌体形态结构发生明显变化,表现为菌体缢缩变形,中间凹陷呈规则元宝状,细胞质固缩,质壁分离,最终细胞壁破损,内容物泄漏而使菌体死亡。结论苦参碱对鸡大肠杆菌抑菌机理是抑制调控细菌生长、分裂相关蛋白的合成,阻滞其分裂和生长,并且与细胞内的蛋白质结合,细胞质固缩、解体而死亡。
- 王关林唐金花蒋丹方宏筠刘照斌
- 关键词：苦参苦参碱抑菌作用抑菌机理
- 培养条件对银杏悬浮培养细胞黄酮合成影响研究被引量：25
- 2003年
- 对12个不同品种的银杏树幼叶及其诱导的愈伤组织进行了银杏黄酮含量测定,发现其存在较大差异.梅核品种幼叶黄酮含量最高,为3.32%,大白果品种幼叶黄酮含量最低,为0.84%;梅核品种幼叶愈伤组织黄酮含量最高,达1.26%,岭南品种幼叶愈伤组织黄酮含量最低,为0.22%.选取生长旺盛、银杏黄酮含量高的愈伤组织在B5液体培养基中进行了银杏细胞悬浮培养,研究了多种条件对银杏细胞生长和银杏黄酮含量的影响.结果表明,在150mL培养瓶中装有50mL培养液,接种量为鲜质量30～40g/L,对培养细胞给予3000～4000lx的光照、以蔗糖为碳源最有利于黄酮的合成,以葡萄糖为碳源则最有利于细胞生长.HPLC检测结果显示,银杏悬浮培养细胞中银杏黄酮含量可达细胞干质量的2.82%.
- 李春斌王关林岳玉莲姜波方宏筠
- 关键词：银杏细胞悬浮培养银杏黄酮愈伤组织
- 甜樱桃矮化砧木新品种Gisela的研究进展被引量：8
- 2014年
- 甜樱桃矮化砧木新品种Gisela引入我国十多年来,已在多地进行了大量的试种比较试验及机理研究。为正确认识及推广应用该新品种,在多年科研的基础上结合目前种苗市场存在的问题,对该新品种的园艺特性、抗逆性、嫁接亲和性、苗木繁育及其缺点和栽培注意事项等作全面综述。
- 王关林方宏筠
- 关键词：甜樱桃矮化砧木
- 樱桃砧木叶片再生系统建立及抗菌肽基因转化被引量：47
- 2003年
- 以优良樱桃砧木新品系 98 1、Colt、大青叶为试材进行叶片离体再生及根癌农杆菌介导遗传转化 ,建立了高频率再生系统 ,并获得抗菌肽转基因植株。诱导叶片再生的最佳培养基为MS附加BA 1.0～2 .0mg/L、NAA 0 .3～ 0 .5mg/L、GA 0 .5mg/L、AgNO3 5 .0～ 10 .0mg/L。农杆菌及受体感受态是影响转化的关键 ,延迟筛选可提高叶片中转化细胞对卡那霉素的抗性而利于再生。PCR及SouthernBlot检测为阳性 ,表明抗菌肽基因已整合到樱桃砧木 98 1基因组。
- 王关林夏秀英钟文田方宏筠姜明兰
- 关键词：樱桃砧木抗菌肽基因转化
- 大白菜AB-81高频再生系统的建立及gusA基因瞬时表达的研究被引量：44
- 2001年
- 以大白菜自交系AB 81的子叶和真叶切块为外植体 ,建立了高频不定芽离体再生系统。在MS附加TDZ 0 .2mg/L ,NAA 2 .0mg/L ,AgNO310mg/L和ABA 0 .2 5mg/L的再生培养基上 ,子叶和真叶的不定芽再生频率分别达到 93.3%和 90 .0 % ,每块外植体的不定芽数达 3～ 6个 ,最多达 2 1个。以EHA10 5/pMOG4 10为载体转化侵染大白菜AB 81的子叶 ,获得较高gusA基因瞬时表达频率的条件为 :子叶预培养 2～ 3d ;侵染的工程菌液的浓度OD 0 .3～ 0 .5;侵染时间 2～ 10min ;共培养时间 2～
- 王火旭王关林王晓岩方宏筠贾士荣Tang Yixiong唐益雄魏毓棠
- 关键词：大白菜子叶真叶基因表达
- 风信子外植体植株再生系统的研究被引量：13
- 1999年
- 风信子叶片及鳞片直接诱导不定芽的培养基为ＭＳ附加６－ＢＡ２．５ｍｇ／Ｌ、ＮＡＡ２．０ｍｇ／Ｌ、ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ和ＭＳ附加６－ＢＡ２．５ｍｇ／Ｌ、ＮＡＡ２．５ｍｇ／Ｌ．不定芽发育成小鳞茎的培养基为ＭＳ附加ＧＡ０．２ｍｇ／Ｌ、ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ．鳞茎移栽成活率为９０％．
- 李艳李英慧田广澍方宏筠王关林
- 关键词：风信子鳞片叶片花卉
