徐长法
- 作品数：20 被引量：132H指数：7
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- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程农业科学更多>>
- 嵌合分子ut-PA(1)sf-9表达产物的纯化及其性质的初步鉴定
- 2000年
- 嵌合蛋白 ut- PA( u- PA与 t- PA的嵌合型纤溶酶原激活剂 )基因删除编码 u- PA中 R1 78—R1 81的 1 2个核苷酸后 ,得到的嵌合分子 ut- PA( 1 )在昆虫细胞 sf- 9中表达 ,通过苯甲脒 -Sepharose 6B亲和柱层析对表达产物进行纯化 .得到的纯品走 SDS- PAGE,结果显示 ,其分子量为60 k D.血凝块溶解实验结果表明 ,嵌合分子 ut- PA( 1 )有良好的体外溶栓能力 .在不同剂量 PAI- 1的抑制条件下测定 ,亲本嵌合蛋白 ut- PA的活力分别下降 2 2 .7%和 1 3.8%时 ,嵌合分子 ut- PA( 1 )只分别下降了 1 2 .9%和 9.1 % .说明突变体 ut- PA( 1 )具有一定的对 PAI-
- 张拥军余瑞元徐长法
- 关键词：纯化
- 小鼠cAMP应答元件结合蛋白基因在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2000年
- 采用PCR技术 ,删除了小鼠CREBcDNA5′端和 3′端非编码序列 ,并引入便于基因操作的酶切位点。经 30次循环的扩增 ,得到改造后的CREBcDNA ,全长 10 71bp。亚克隆后 ,对此扩增片段进行了限制性内切酶物理图谱分析 ,测定了DNA序列 ,并以其为插入物 ,构建了 pBV2 2 0 -PCR -CREB重组表达载体。经Western印迹法分析证明 。
- 余瑞元王燕峰孙久荣徐长法
- 关键词：PCR
- 猪凝血酶的分离纯化与鉴定被引量：10
- 1994年
- 本文报导以猪血为材料，制备凝血酶，血浆在低离子强度下经等电沉淀得优球蛋白，从该沉淀中采用稀盐溶液提取，氢氧化镁吸附和二氧化碳解吸等步骤获得凝血酶原粗品。后者经脑提取液激活，再经乙醇分级、ＤＥＡＥ－纤维素与磷酸纤维素离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤，得凝血酶制品，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，制品呈单一条带，分子量约为３９ｋＤ，比活达１６１０ＮＩＨＵ／ｍｇ蛋白，以活化的粗品活性为１００％，活性回收率为４８％，纯化倍数约为１０。
- 徐长法王兰仙刘德富马晓岚
- 关键词：猪血凝血酶纯化分子量
- 原位杂交检测大鼠前庭代偿中GAP-43mRNA水平
- 1999年
- 用ＤＩＧ 标记的ＧＡＰ４３ ｃＤＮＡ 为探针， 以大鼠海马切片作阳性对照， 使用原位杂交方法检测了大鼠迷路损毁５ 、１２ 、２０ 和３０ ｄ 后前庭核区ＧＡＰ４３ ｍ ＲＮＡ 水平的变化． 结果表明， 迷路损毁后前庭核区ｍ ＲＮＡ 水平升高．原位杂交的应用， 为前庭代偿中轴突发芽， 突触重组的神经可塑性研究打下了方法学基础．
- 余瑞元牟晓东王燕峰孙久荣徐长法
- 关键词：原位杂交前庭代偿GAP-43MRNA水平
- CREB研究进展被引量：41
- 2003年
- CREB是cAMP应答元件结合蛋白 (cAMPresponseelementbindingprotein)的简称 ,它于80年代后期被发现。CREB由 341个氨基酸残基组成 ,分子量 430 0 0。分子结构分两个区域 ,N端区域与调节转录的功能有关 ,C端区域是与启动子结合的部位。CREB是CREB ATF家族中的一个成员 ,它包括 8种分子亚型 ,其中CREBα和CREBΔα最为重要。CREB是一种细胞核内调控因子 ,它通过自身磷酸化实现调节转录的功能。CREB与学习记忆分子神经机制的关系特别受到注意。CREB能促进果蝇和小鼠等动物长时程记忆的形成。开展对CREB在人类大脑记忆活动中功能的研究 ,是分子神经生物学家感兴趣的课题。
- 余瑞元王燕峰徐长法
- 关键词：CREB磷酸化作用
- ut-PA抗PAI-1突变体的构建及在sf-9细胞中的表达被引量：3
- 2000年
- 为使嵌合分子 ut- PA获得抗 PAI- 1抑制作用的性质 ,将删除了编码 u- PA中 R1 78- R1 79-H1 80 - R1 81的 1 2个核苷酸的 u- PA c DNA[u- PA( 1 ) ]的 Bam H - Eco R 部分酶切片段 ,克隆到含嵌合蛋白 ut- PA基因的转移载体 p VL 1 392 - ut- PA的相应位点中 ,构建了一个含有新的嵌合蛋白基因 ut- PA( 1 )的转移表达载体 p VL1 392 - ut- PA( 1 ) .在昆虫病毒表达系统 sf- 9细胞中表达该嵌合蛋白基因 ,表达上清具有纤溶性 ,用血纤维蛋白平板法和 S2 4 44 显色底物法分别测得活力为 2 4 8IU/ml和 380
- 张拥军余瑞元徐长法
- 关键词：急性心肌梗塞溶栓药物
- 北京鸭红细胞铜锌超氧化物歧化酶电荷异构体的分离和某些性质被引量：1
- 1995年
- 等电聚焦表明，北京鸭红细胞铜锌超氧化物歧化酶由等电点分别为５．０，５．３，５．９，６．１和６．５的五个主要的活性组分（电荷异构体）构成，利用分析型聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳进行电荷异构体的制备级分离，采用三氯乙酸沉淀法快速确定蛋白条带的位置，电渗洗脱法回收蛋白，获得其中两个电荷异构体，对比研究结果表明电荷异构体的活性，氨基酸组成，二级结构等性质无明显差异。
- 李平卫徐长法王楠李根培
- 关键词：北京鸭红细胞铜锌超氧化物歧化酶
- 低分子量单链尿激酶基因在酵母中的表达被引量：1
- 1998年
- Ｍ１３ｓｃｕＰＡ３２ｋ克隆载体经ＨｉｎｄⅢ酶切得到ｓｃｕＰＡ３２ｋ的基因，与分泌型酵母表达载体ｐＧＬ重组得到正向插入的ｓｃｕＰＡ３２ｋ酵母表达载体．用改进的酵母完整细胞快速高效转化法转化ＡＢ１０３酵母菌株，转化效率达到１．８×１０５个转化子／μｇ载体ＤＮＡ，并在直接测活培养板上筛选出阳性转化子．用纤维蛋白平板溶圈测活法检测结果表明阳性转化子能分泌纤溶酶原激活剂．
- 任育红刘晖徐长法
- 关键词：尿激酶血栓性疾病酵母基因表达链激酶
- 溶栓剂的蛋白质工程被引量：21
- 1996年
- 溶栓剂的蛋白质工程孙天霄，徐长法（北京大学生命科学院北京１００８７１）一、前言溶栓剂是治疗急性心肌梗塞（ＡｃｕｔｅＭｙ－ｏｃａｒｄｉａｌＩｎｆａｒｃｔｉｏｎ，ＡＭＩ）最有效的药物。目前ＡＭＩ的治疗方法有三种：第一，外科手术，这种方法要求条件复杂，费用...
- 孙天霄徐长法
- 关键词：溶栓剂生物制品蛋白质工程
- GHRP-scu-PA-32K突变体的构建、表达及纯化产物的部分性质研究被引量：1
- 2000年
- 在ｓｃｕＰＡ３２Ｋ 的ｃＤＮＡ分子基础上经定点突变，在Ｎ 端紧接Ｌｅｕ１ 之前引入编码ＧＨＲＰ四肽的寡核苷酸序列（ＧＧＴＣＡＴＡＧＧＣＣＴ） ，构建了ＧＨＲＰｓｃｕＰＡ３２Ｋ 的突变体ｃＤＮＡ。将它克隆到表达载体ｐＣＭβｎｅｏ 中，与ｐＣＭβｄｈｆｒ 共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ－ 细胞。筛选到的稳定表达株在无血清培养基的表达量为５８０ＩＵ／（１０６ 细胞·２４ ｈ） 。经锌离子螯合亲和柱纯化的产物，ＳＤＳＰＡＧＥ显示为单一蛋白条带，分子量为３３ ｋＤ，质谱法测定分子量也为３３ ｋＤ。经血纤维蛋白平板法测定比活为１５０ ０００ ＩＵ／ｍｇ 蛋白。对血纤维蛋白的亲和性，突变体为ｓｃｕＰＡ３２Ｋ 的４－５ 倍。
- 焦建伟徐长法
- 关键词：定点突变溶栓药物突变体
