徐秋芳
- 作品数：6 被引量：87H指数：4
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- 1个Avr/Cf介导的差异表达基因在番茄抗叶霉病中作用的基因沉默分析
- 2008年
- Avr/Cf介导产生过敏性反应时特异表达的cDNA-AFLP片段,称为ACE(Avr/Cf-elicited)片段,从中挑选1个未知功能的基因(记为ACE5)(GeneBank登录号为CK348288),利用VIGS技术对该片段相应基因进行基因沉默分析,分析该基因在植株生长和发育以及番茄抗叶霉病中的作用。结果表明该差异表达片段相应基因对本氏烟的生长发育以及Avr/Cf介导的HR反应均无影响。
- 郑璐平张志新徐秋芳蔡新忠
- 病毒诱导的基因沉默被引量：16
- 2008年
- 病毒诱导的基因沉默"(virus-induced gene silencing,VIGS)一词最早用于描述被病毒侵染的植物的恢复"现象,是一种植物抗病毒侵染的自然机制,现在已被开发成通过插入目的基因片段的重组病毒抑制植物内源基因表达的遗传技术,用于基因功能分析.VIGS由小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)驱动,siRNA单链与RNA诱导的沉默复合物(RNA induced silencing complex,RISC)结合后,特异性地和与siRNA同源的靶标RNA结合,并降解RNA模板.已有源于15种不同类型病毒的VIGS载体得到开发和应用.在VIGS载体中插入的目的片段、重组VIGS病毒载体的植物导入方法、沉默处理时的寄主生育期、沉默处理后的植物培育条件等均显著影响VIGS的效率.作为一种新型的基因鉴定和功能研究技术工具,VIGS具有无需事先知道目的基因全长序列、获取表型迅速、无需构建转基因植株等诸多优点,已越来越广泛地被应用于植物基因功能研究.
- 徐幼平徐秋芳宋晓毅张志新蔡新忠
- 关键词：功能基因组学
- 番茄子叶总蛋白双向电泳体系的建立被引量：32
- 2010年
- 通过对IPG胶条梯度、上样方式、上样量、聚焦条件等4方面条件的优化,建立了番茄子叶总蛋白双向电泳体系,即采用TCA丙酮沉淀法提取番茄子叶总蛋白,选用24cmpH3-7NL的IPG胶条,采用水化上样,上样量300μg,按聚焦程序Ⅰ或Ⅱ聚焦后进行双向电泳分离和银染染色。若采用制备胶,以获取高含量蛋白点,则将上样量提高至1.5mg,按聚焦程序Ⅲ进行聚焦后进行双向分离,并采用胶体考马斯亮蓝染色。采用该优化的体系可以获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱。
- 黎飞徐秋芳臧宪朋赖亿玉程维舜徐幼平蔡新忠
- 关键词：番茄双向电泳子叶
- 适于双向电泳分析的番茄叶片总蛋白提取方法的优化被引量：35
- 2007年
- 比较了三氯乙酸(TCA)、酚和十二烷基硫酸钠(SDS)3种提取方法在所获番茄叶片总蛋白产量及其在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨率等方面的区别,并对3种蛋白溶解液以及超声处理在蛋白质溶解中的作用进行了分析探讨。结果表明,TCA提取法最佳,该方法提取番茄叶片总蛋白的得率最高、所获蛋白在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中形成条带数目最多,最清晰;酚法次之;SDS法最差。由离液剂和去污剂组成的蛋白溶解液复溶蛋白沉淀所获蛋白产量显著高于Tris-NaCl溶解液。还原剂和两性电解质以及超声处理显著增进蛋白质的溶解,提高蛋白产量。采用TCA提取法获得蛋白沉淀,再以溶解液Ⅱ(7 mol/L尿素,2 mol/L硫尿,2%CHAPS,2%SB3-10,65 mmol/L DTT,0.2%两性电解质)溶解,结合超声助溶的方法体系可以获得高得率和高电泳分辨率的番茄叶片总蛋白样品,该方法适用于双向电泳分析等下游操作。
- 徐幼平徐秋芳蔡新忠
- 关键词：番茄蛋白双向电泳三氯乙酸超声处理
- 8个番茄ACE全长cDNA序列的克隆和分析被引量：1
- 2009年
- 本实验室以前已经克隆了278个Avr/Cf介导的过敏性反应产生与不产生时差异表达的番茄ACEcDNA片段.为了进一步分析这些ACE基因在植物抗病中的功能,本研究通过RACE等方法克隆了其中8个番茄ACE片段的全长cDNA序列,即ACE13,ACE14,ACE19,ACE25,ACE29,ACE36,ACE39和ACE112.其中ACE14,ACE25,ACE29,ACE36和ACE39分别与信号传导,防卫反应,蛋白合成,代谢等相关,而另外3个则功能未知.与番茄EST数据库中相关序列的比对分析后发现,ACE13,ACE25,ACE29,ACE39和ACE112与数据库中对应序列高度相似,但ACE14,ACE19和ACE36则与数据库中对应序列有显著差异,ACE143端有322bp片段延伸,ACE19有不同的3端200bp序列,而ACE36则在5端有132bp的插入序列.这些结果表明运用EST库序列资源时应充分考虑到EST序列的不准确性或者可变剪接产生多种产物的可能性.
- 宋晓毅徐幼平张志新徐秋芳蔡新忠
- 关键词：番茄CLADOSPORIUMACE防卫反应基因克隆
- 适于烟草脆裂病毒诱导的本氏烟基因沉默分析的对照载体构建(英文)被引量：6
- 2012年
- 对烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)诱导的基因沉默分析体系中目前最常用的对照载体——空pYL156载体(pYL156∷00)对沉默处理后番茄和本氏烟(Nicotiana benthamiana)植株的病毒症状和生长影响进行分析.结果表明:pYL156∷00沉默处理后的番茄和本氏烟植株均表现出严重的系统性病毒症状,生长受到显著抑制,因此,pYL156∷00并不是一个用于TRV诱导的番茄和本氏烟基因沉默分析的好的对照载体;为获得更好的对照载体,试验构建了2个新的对照载体pYL156∷NIRi和pYL156∷eGFP,它们分别通过在pYL156∷00载体多克隆位点插入253bp菜豆亚硝酸还原酶基因内含子序列和400bp eGFP基因片段而获得,对这2个对照载体对沉默处理后本氏烟植株的病毒症状和生长情况的影响与pYL156∷00进行比较分析.结果表明:pYL156∷00沉默处理后的植株表现出较严重的系统性病毒症状,生长受到显著抑制,其中26.7%植株死亡;pYL156∷NIRi沉默处理后的植株也表现出明显的病毒症状以及生长受抑制现象,但与pYL156∷00相比,所受影响较小,只有13.3%植株死亡;而pYL156∷eGFP沉默处理后的植株不表现明显的病毒症状,植株生长也不受显著影响;病毒积累量检测结果显示,3个对照载体沉默处理的植株病毒症状和生长受抑制情况与植株体内TRV病毒的积累水平密切相关.这些结果表明,新构建的pYL156∷eGFP可以作为一个优越的对照载体应用于TRV诱导的基因沉默分析.
- 程维舜徐秋芳黎飞徐幼平蔡新忠
- 关键词：烟草脆裂病毒基因沉默
