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一种重组质粒及其构建方法: 本发明公开了一种重组质粒，包括载体及基因片断，所述的基因片断包括含有启动子的吡啶核苷酸转氢酶基因，及含有启动子的异柠檬酸脱氢酶基因。本发明与现有技术相比，表达及纯化工艺简便，双启动子表达载体不仅将为更多难表达的蛋白质提供...; 朱国萍徐琴郑恩霞王宝娟葛亚东王鹏赵旵军朱友明许希晨; 文献传递

可溶性转氢酶促进链球菌异柠檬酸脱氢酶基因表达的研究: 2009年; 目的构建携带E．coli可溶性吡啶核苷酸转氢酶（UdhA）基因的双启动子双基因表达载体，鉴定此载体系统对表达效率不高的链球菌异柠檬酸脱氢酶（SmIDH）的促进表达。方法PCR法扩增SmIDH基因，插入pBluescript ⅡSK（＋）得表达载体pSX。从E．coli基因组扩增UdhA基因，插入pBluescriptⅡSK（＋），构建表达载体pUX。再用以pUX为模板PCR扩增lac启动子和udM基因片段，插入pSX中，获得双启动子双基因表达载体pUS。IPTG诱导表达，SDS—PAGE鉴定SmIDH的表达。结果酶切证实UdhA和SmIDH双基因正确克隆到pBluescriptⅡSK（＋）中，序列测定显示双基因与GenBank报道一致及两个lac启动子方向相同，并且初步的表达实验证明UdhA促进了SmIDH的表达。结论UdhA的表达促进了SmIDH基因的表达，为该表达策略的通用性研究奠定了基础。; 徐琴郑恩霞汪新颖朱友明朱国萍; 关键词：异柠檬酸脱氢酶双启动子

变铅青链霉菌异柠檬酸脱氢酶的异源表达及序列分析: 2009年; 通过同源性引物成功扩增和克隆了变铅青链霉菌(Streptomyces lividans)TK54的异柠檬酸脱氢酶(isocitratedehydrogenase,IDH)(简称SlIDH)基因icd(GenBank登录号为EU661252)。icd的起始密码子为GTG,GC含量为69.55%,显示了链霉菌基因的高GC含量特征,实现了SlIDH在E.coli中的异源高效表达。0.5 mmol/L的IPTG为最佳诱导条件。SlIDH的分子量约为80 kD。在Mn^(2+)或Mg^(2+)条件下,SlIDH以NADP^+为辅酶时的活性分别为7.94 U/mg及4.00 U/mg,以NAD^+为辅酶时的活性分别为0.58 U/mg及0.27 U/mg,SlIDH更偏爱以NADP^+为辅酶。与不同种属单体IDH的氨基酸序列比对显示,SlIDH与单体IDH的序列一致性均在60%以上。因此本工作首次以实验性证据初步鉴定了SlIDH为NADP-依赖型单体IDH。本工作为进一步探索单体IDH的结构与功能以及单体IDH与同源二聚体IDH的进化关系奠定了基础。; 张贝贝徐琴黄恩启刘爱民郝家胜朱国萍; 关键词：变铅青链霉菌异柠檬酸脱氢酶活性同源二聚体

一种重组质粒及其构建方法: 本发明公开了一种重组质粒，包括载体及基因片断，所述的基因片断包括含有启动子的吡啶核苷酸转氢酶基因，及含有启动子的异柠檬酸脱氢酶基因。本发明与现有技术相比，表达及纯化工艺简便，双启动子表达载体不仅将为更多难表达的蛋白质提供...; 朱国萍徐琴郑恩霞王宝娟葛亚东王鹏赵旵军朱友明许希晨; 文献传递

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徐琴