张頔
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 供职机构：吉林大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：吉林省重大科技攻关项目国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)在ORFV感染过程中变化规律及其对ORFV病毒复制增殖的影响被引量：4
- 2016年
- 磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol kinase 3-kinase,PI3Ks)蛋白家族参与对细胞增殖、分化、凋亡等多种细胞功能的调节。课题组前期利用Illumina/Solexa高通量测序技术对羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)感染OFTu细胞前后mRNA表达谱进行比较分析发现,PI3K在感染后宿主细胞中显著上调表达。为进一步验证,利用荧光定量PCR、Western blot方法分别从基因转录水平和蛋白表达水平对羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)感染不同时间段(0、3、6、12、24、48、72h)Hela细胞中PI3K的表达变化规律进行分析,与未接毒细胞相比,PI3K在感染后不同时间段均呈上升趋势,且随着感染时间延长而增加,该结果与表达谱分析结果一致。为进一步明确PI3K对ORFV侵染复制的影响,利用PI3K特异性抑制剂LY294002对PI3K进行抑制处理后接种ORFV,收集感染后不同时间段(12、24、48、72h)细胞进行定量PCR检测和TCID50测定,结果显示,加入LY294002处理的Hela细胞,其病毒滴度低于未处理细胞中的病毒滴度,由此可见阻断PI3K对ORFV的入侵具有抑制作用。上述研究结果表明,PI3K对ORFV在宿主细胞中的复制增殖具有明显的促进作用。该研究结果不仅有助于对参与ORFV侵染过程相关信号通路的研究,而且将为深入揭示ORFV致病分子机制奠定基础。
- 黄后双赵魁张頔张月香张希牧周艳龙徐宝成魏广兴宋德光高丰
- 关键词：羊传染性脓疱病毒PI3KLY294002
- 宿主细胞CyPB基因的克隆及表达分析被引量：1
- 2015年
- CyPB作为亲环蛋白(cyclophilins,CyPs)家族成员之一,是环孢菌素A、K506、雷帕霉素等免疫抑制药物在细胞内的主要结合蛋白。本课题组前期利用抑制性消减杂交技术对羊传染性脓疱病病毒(orf virus,ORFV)感染MDBK前后宿主细胞差异基因进行筛选时发现,正向文库中CyPB显著上调表达,但其在ORFV侵染过程中的作用尚不清楚。为了进一步明确CyPB对ORFV侵染复制的影响,根据从GenBank中获取的牛源CyPB基因编码区全长651bp基因序列,设计1对针对牛源CyPB基因的特异性引物,利用RT-PCR方法扩增获得CyPB基因全长基因序列。将获得的CyPB基因连接至PET-32a载体,转化到BL21菌株中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析可见在25 000处有与预期大小一致的蛋白条带。上述结果表明,本研究成功诱导表达纯化出His-CyPB融合蛋白,该结果将为针对牛源CyPB蛋白功能的研究提供重要的物质基础。
- 毕经影宋德光张頔黄后双王春霞王改丽田忠华高丰赵魁
- 关键词：原核表达纯化
- 肉鸽NDV吉林分离株的分离鉴定及其F基因的遗传进化分析
- 2013年
- 利用SPF鸡胚从吉林省某肉鸽养殖场送检的疑似新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染肉鸽体内分离获得1株病毒,通过电镜负染观察、血清学检查、RT-PCR检测以及病理组织学观察等方法对该株病毒进行系统的鉴定,电镜负染观察可见呈圆形、有囊膜的病毒粒子,且在囊膜表面有呈放射状排列的纤突;血清学检查结果显示,该病毒株可凝集鸡的红细胞,具有血凝性;RT-PCR扩增获得与预期目的基因片段大小一致的条带;病理组织学观察可见脑血管及神经胶质细胞周围间隙增大,呈典型的脑水肿变化。综合分析以上结果,证实该分离株为NDV,命名为NDV-cc-12。参照GenBank中NDV F基因的核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,利用RT-PCR成功扩增获得NDV-cc-12分离株F基因并对其进行序列测定。序列分析结果显示,获得的NDV-cc-12分离株F基因片段长为374bp,其裂解位点的氨基酸序列为112RRQKRF 117,符合NDV强毒株裂解位点序列特征。F基因的系统发育进化树结果表明,NDV-cc-12分离株与HLJ4-95毒株的亲缘关系较近,处于同一基因亚型上,属于基因Ⅵ型。
- 张頔周平唐博赵家宽毕经影杨占清丛彦龙赵魁高丰
- 关键词：新城疫病毒F基因遗传进化分析
- 免疫共沉淀联合质谱技术筛选宿主因子CypB的互作蛋白被引量：3
- 2017年
- 为探讨亲环蛋白B(cyclophilin B,CypB)促进羊传染性脓疱病毒(orf virus,ORFV)复制增殖的机制,以ORFV早期感染MDBK细胞为试验材料,利用免疫共沉淀技术筛选与CypB互作的蛋白。免疫共沉淀产物的Western blot和SDS-PAGE的分析结果显示,在大小约为25 000处可见有明显的差异条带。切下该差异蛋白条带进行质谱鉴定分析,将获得的原始质谱数据使用Mascot软件中的串级质谱数据搜索功能(MS/MS Ions Search)进行搜索鉴定,初步筛选获得6个可能与CypB相互作用的病毒相关蛋白。为进一步深入研究CypB在ORFV早期侵染过程中的作用奠定基础。
- 张頔赵魁周艳龙赵宇航钟嘉伟崔珊珊高丰宋德光
- 关键词：羊传染性脓疱病毒免疫共沉淀质谱分析
