- 成人自体血清体外扩增培养骨髓间充质干细胞的生物学特性分析被引量：2
- 2007年
- 目的:为避免种子细胞培养过程中应用异体或异种血清的排斥及伦理问题,制备成人自体血清体外扩增培养骨髓间充质干细胞,观察其增殖及生长特征。方法:实验于2005-01/2006-01在北华大学医学院细胞生物实验室完成。①细胞来源:选取北华大学医学院附属医院收治的行骨髓干细胞保健治疗的成年志愿者3名,25～30岁,对本实验均知情同意。②实验方法:空腹无菌采集志愿者外周静脉血40mL,4℃静置4h,37℃静置4h,500g离心30min,吸取上清,即自体血清。从骨髓血中提取间充质干细胞,利用DMEM/F12培养基添加自体血清进行黏附培养和扩增。原代记为P1,按1∶3进行传代接种,第2代记为P2,以此类推。每次传代培养的细胞接种密度严格控制与原代培养接种密度相同的水平。③实验评估:倒置光学显微镜下观察骨髓间充质干细胞生长和形态变化,计数和MTT法观察原代和传代培养的增殖及生长特征,免疫组化法分析骨髓间充质干细胞纯度。结果:①原代及传代培养的成人骨髓间充质干细胞的光镜观察:原代培养24h后可见贴壁细胞,部分细胞有伪足伸展,第3天换液时有散在克隆生长,第5天呈克隆式增殖,10～12d可达90%细胞融合,基本铺满孔底面,呈骨髓间充质干细胞特征性的旋涡状生长,排列有方向性,旋涡中心细胞呈多层分布,细胞界限不清,细胞形态多呈梭形。传代细胞的生长较原代快,4h内即发现有贴壁细胞,24h内完全贴壁并伸展,第6～8天即可达到80%以上融合。②成人骨髓间充质干细胞的生长曲线分析:原代接种后2～6d为生长潜伏期,第7天开始形成大小不一的多个细胞克隆,至第9天细胞克隆进一步扩大,细胞数目呈指数级递增,为对数增殖期;第10～12天细胞生长进入平台期,原代培养结束。传至5代内的细胞生长旺盛,生长特性基本与第1代一致。③成人骨髓间充质干细胞免疫组化鉴定结果:P0�
- 张媛陈立梅张雷倪红霞
- 关键词：骨髓间充质干细胞体外培养
- 血栓调节蛋白在糖尿病大鼠心肌中的表达及意义被引量：3
- 2012年
- 目的探讨STZ诱导的糖尿病大鼠心肌组织中血栓调节蛋白(TM)的表达及意义,为糖尿病心肌病(DCM)的防治提供新的靶向。方法从50只SD大鼠中随机选取32只采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型,剩余18只作为正常对照。每日观察大鼠进食、饮水等一般状况,每周固定时间测量体重、血糖及尿糖。分别在2、8、12 w末分批处死一定数量两组大鼠。分别检测各批大鼠的心脏指数(HW/BW)、血糖、血脂;采用透射电镜观察心肌组织超微结构的改变;免疫组化方法观察心肌组织中TM的蛋白表达;通过RT-PCR检测TM mRNA的表达水平。结果与正常对照组相比,2 w末模型组心脏指数无明显差异;8、12 w末心脏指数均显著增加,且12 w高于8 w(P<0.01)。模型组各时间段各项生化指标均高于正常对照组(P<0.01),各项指标变化由低到高排列顺序为2、8、12 w末。2 w末模型组大鼠未见明显病理变化;8、12 w末模型组大鼠出现心肌细胞肥大、排列紊乱、细胞外间质增多,线粒体肿胀、嵴断裂、溶解等病理变化;12 w末模型组大鼠上述病理变化较8 w末模型组更加明显。免疫组化显示,模型组TM表达明显高于正常对照组(P<0.01);组间比较阳性表达由低到高顺序依次是2、8、12 w末。与正常对照组相比,模型组大鼠心肌组织中TM mRNA的表达明显增高(P<0.01),其中,12 w末表达最强,其次是8,2 w末表达最弱。结论 TM在糖尿病大鼠心肌组织中呈时间依赖性高表达,并与病程呈正相关,显示其可能在DCM的发生、发展中发挥重要作用,这为该病的防治提供了新的靶向。
- 张雷董志恒
- 关键词：糖尿病心肌血栓调节蛋白
- Mx1启动子指导下的Cre重组酶基因表达载体的构建
- 王尔孚陈立梅张雷张德刚李桂荣倪红霞
- 研究人类疾病动物模型可以帮助科学家理解疾病的发病机制、病理过程，甚至研究对疾病进行基因治疗，从而治愈人类疾病。迄今为止，小鼠模型已被广泛用于研究人类造血功能，先天和适应性免疫、免疫、传染病、癌症生物学和再生医学等领域。但...
- 关键词：
- 关键词：重组酶动物实验
- 针刺治疗大鼠脑梗塞对神经内分泌免疫网络的调节
- 潘安娜何欣周艳陈立梅张雷张媛倪红霞何娜
- 脑梗塞是由于脑部血液供应障碍，缺血、缺氧引起的局限性脑组织的缺血性坏死，是脑血管疾病最常见的类型。其发病率、死亡率和致残率很高，它与恶性肿瘤、心脏病是导致全球人口死亡的三大疾病。因此研究和防治脑血管疾病，是基础医学和临床...
- 关键词：
- 关键词：脑梗塞针刺治疗脑血管疾病
- 重组小鼠14-3-3蛋白theta亚型的构建
- 2009年
- 目的克隆编码14—3—3蛋白质θ亚型的cDNA，制备该蛋白质的基因重组蛋白质．方法参照小鼠14—3-3蛋白质θ亚型mRNA结构设计引物，以小鼠脑总RNA为模板，RT—PCR法克隆编码14—3—3蛋白质θ亚型的cDNA，插入原核表达质粒pGEX-4T-1，转化大肠杆菌BL21（DE3）使其表达谷胱甘肽S转移酶（GST）为标签的融合蛋白质，以凝血酶定点分解融合蛋白并采用GlutathioneSepharose4B亲和层析纯化目的蛋白．结果RT—PCR扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳分离可见约800bp条带，序列分析表明重组质粒pGEX-1433theta中的插入子为738bp，编码245个氨基酸，其核苷酸及氨基酸序列与PubmedNM-011739展示的结果一致．重组质粒pGEX-1433theta在BL21（DE3）中的表达量随IPTG诱导时间递增，融合蛋白质为可溶性组分．亲和层析纯化的14—3—3theta在SDS．PAGE上表现为单一条带，表观相对分子质量为30ku．每L培养菌液可收获4mg基因重组型小鼠14—3—3theta．结论克隆了编码小鼠14—3-3蛋白质θ亚型的cDNA，制备了高纯度基因重组型小鼠14—3—3theta，为进行单克隆抗体的制备奠定了坚实的基础．
- 张雷王尔孚倪红霞张媛陈立梅
- 关键词：原核表达载体基因重组蛋白
- 泌尿生殖道支原体PCR检测方法的建立及药物敏感性分析被引量：7
- 2008年
- 目的了解本地区解脲支原体(Uu)和人型支原体(Mh)对泌尿生殖道的感染及耐药状况,指导临床合理用药。方法别在解脲支原体及人型支原体16SrRNA的种属特异性区域设计引物,优化反应条件,并对阳性样本做药物筛选。结果检测样本554例,其中阳性为393例,占70.9%;在检测的阳性标本中Uu感染194例,占总标本的35.0%,Mh感染141例,占总标本的25.5%,Uu+Mh感染58占总标本的10.5%。药敏实验结果显示强力霉素、交沙霉素、阿齐霉素、克拉霉素和原始霉素对泌尿系统支原体敏感。结论PCR法与培养法相比具有灵敏度高、特异、快速、经济等优点。本实验与2003-2005年药敏结果比较,2006-2007年阿奇霉素和克拉霉素的耐药性显著提高,这和人们滥用抗生素有直接关系。强力霉素、交沙霉素的耐药性也有上升,但对泌尿生殖道感染仍有较好的疗效。
- 倪红霞张冰张雷
- 关键词：人型支原体药物敏感性实验
- 葛根素影响链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4的表达被引量：17
- 2006年
- 目的:观察葛根素对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响及对糖尿病的治疗作用。方法:实验于2004-10/2005-12在国家人类基因组北方研究中心(北京诺赛基因组研究中心有限公司)完成。选择8～10周龄雄性Wistar大鼠20只,采用静脉注射链脲佐菌素建立链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型。链脲佐菌素(60.0mg/kg)一次性静脉注射,当血糖浓度大于20.0mmol/L并伴有多尿等其他糖尿病症状定为链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型成功。然后将链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠随机数字表法分为4组,糖尿病模型组,葛根素治疗组,胰岛素治疗组,葛根素+胰岛素治疗组,每组5只。葛根素治疗组大鼠腹腔注射葛根素10.0mg/(kg·d);胰岛素治疗组给予正规胰岛素治疗,皮下注射胰岛素30U/(kg·d);葛根素+胰岛素治疗组混合治疗,大鼠腹腔注射葛根素10.0mg/(kg·d);然后皮下注射胰岛素30U/(kg·d)k治疗4周后断髓法处死大鼠,解剖取出大鼠肾周脂肪组织。经处理后采用Westernblot方法检测脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4的表达。并用Sigmagel软件对X射线胶片上阳性条带实施扫描。加样量误差由β-actin矫正。结果:在实验过程中无动物死亡,全部进入结果分析。①将糖尿病模型组脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4的吸光度设定为1,葛根素治疗组、胰岛素治疗组、葛根素+胰岛素治疗组脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4的吸光度分别为2.70±0.23,2.14±0.28,3.49±0.47,与糖尿病模型组比较,差异均有显著性意义(P<0.01～0.05)。葛根素治疗组葡萄糖转运蛋白4的含量比糖尿病模型组显著增加,大约增加2～3倍。胰岛素治疗组也比糖尿病模型组增加,大约增加1～2倍,不如葛根素治疗组明显。葛根素+胰岛素治疗组比糖尿病模型组显著增加,大约增加2～3.5倍。②Westernblot条带结果显示,以β-actin作为对照,葛根素治疗组和葛根素+胰
- 张雷陈立梅倪红霞于春荣
- 关键词：葛根素单糖转运蛋白质类糖尿病
- 黄芩甙体外诱导大鼠骨髓基质细胞向神经干细胞的分化被引量：3
- 2010年
- 背景：已有实验表明,骨髓基质细胞具有分化为骨骼、神经干细胞及造血干细胞的巨大潜能,而黄芩甙具有诱导细胞分化的作用。目的：探讨黄芩甙体外诱导骨髓基质细胞分化为神经干细胞的可能性。方法：分离培养Wistar纯系大鼠骨髓基质细胞,并将分离的骨髓基质细胞分为实验组和对照组,对照组不干预,实验组用黄芩甙（350-400μmol/L）诱导,2组的培养环境相同。持续诱导6d后选取生长良好的细胞进行蛋白质印迹和反转录PCR（RT-PCR）法检测。结果与结论：黄芩甙诱导7d后,骨髓基质细胞形成较典型的神经细胞形态。诱导前骨髓基质细胞不表达神经细胞标记蛋白mRNA和蛋白;诱导6d表达神经细胞标记蛋白和mRNA;对照组不表达神经细胞标记蛋白和mRNA。证实黄芩甙在体外可诱导成年大鼠骨髓基质细胞分化为神经样细胞。
- 张雷张媛倪红霞陈立梅
- 关键词：黄芩甙骨髓基质细胞巢蛋白
- 一种可调式动物实验用解剖台
- 本实用新型提供了一种可调式动物实验用解剖台，主要由台面和设置在台面下的支腿构成，台面由四块手术板铰接而成，构成可变“W”形，四块手术板上设有下料孔，手术板下方对应下料孔处，设置有下料斗，下料斗与手术板底部设置成抽屉式，每...
- 倪红霞张冰刘楠楠陈立梅张雷张媛
- 文献传递
- 支原体种属特异性PCR引物的设计及对细胞培养物支原体的检测被引量：9
- 2007年
- 目的快速全面检测感染细胞、疫苗等多种生物制品中的支原体.方法从多种支原体的16SrRNA核酸序列中选择了两段高度保守的核酸序列,作为支原体种属特异性引物,对标本进行检测.结果用这对种属特异性引物对已知阳性的50份标本进行检测,检测结果显示全部为阳性.应用于实践,检测了89份疫苗标本,阳性率为31.4%,而用常规培养法检测阳性率为12.3%.结论用该种属特异性引物检测支原体具有检测速度快、检测灵敏度高、特异性强等优点.
- 倪红霞陈立梅张雷
- 关键词：支原体疫苗细胞培养物
