张艳敏
- 作品数：39 被引量：69H指数：5
- 供职机构：郑州大学更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家科技重大专项河南省科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生机械工程生物学艺术更多>>
- 从角膜组织中快速检测HBV、HCV的方法探讨被引量：2
- 2006年
- 目的：运用多重巢式PCR技术，同步检测人组织中的乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒，为角膜移植供体组织材料中乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的快速筛查建立方法。方法。参照相关文献和Genbank公布的乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒全基因序列，分别设计并合成乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的半巢式和巢式引物。供体角膜周边组织材料2份，由河南省眼科研究所眼库提供。角膜供体年龄为18～45岁。以上角膜材料均由河南省各地、市级医院送来，供体人员生前是否患有乙型肝炎和／或丙型肝炎均情况不明。在得到角膜周边组织材料后，每份迅速切取10mg左右置于无茵研磨器内研磨，用一步法快速提取基因组DNA和总RNA。首次完成丙型肝炎病毒的反转录cDNA，然后在同一反应体系内同时加入乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒引物，采用“双退火温度”，共35个循环，进行两轮巢式扩增。结果：在32份样本中，乙型肝炎病毒阳性为3份（阳性率9．3％）；丙型肝炎病毒均为阴性（阳性率0％）。结论：从角膜周边组织中提取基因并用于乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的组织快检，可扩大用于角膜移植材料的来源。运用多重巢式PCR技术对角膜供体材料中DNA和RNA的组织快检，具有方法简便、灵敏度高、出结果快、经济等优点，具有推广应用价值。
- 张艳敏鲍玉洲张郑民孔众
- 关键词：丙型肝炎病毒角膜移植聚合酶链式反应
- 荧光探针法检测Leber遗传性视神经病变11778位点突变的研究被引量：2
- 2013年
- 背景Leber遗传性视神经病变（LHON）与视神经炎的病因和治疗方法均不相同，但由于其临床表现相似，因此易被误诊。利用实时荧光定量PCR技术建立一种高通量、简便、快速、特异性高的LHON检测方法具有重要的临床意义。目的建立以实时荧光定量突变特异性Taqman探针技术检测LHON线粒体DNA（mtDNA）11778G〉A突变的方法，实现快速、简便、准确地筛查mtDNA11778位点突变LHON患者。方法根据mtDNA全基因组序列设计针对mtDNA11778G〉A突变的特异性Taqman探针和引物，从河南省眼科研究所分子生物室LHONDNA库任意选取标本84份，另抽取40名18～20岁健康体检者的血样40份作为正常对照，分别用实时荧光定量特异性探针法和序列测定法检测LHONmtDNA11778G〉A突变，并对检测方法进行可靠性验证。结果用实时荧光定量Taqman探针法检测mtDNA11778G〉A突变，84例视神经病变患者中发现mtDNA11778G〉A突变者23例，阴性结果者61例，23例阳性患者样本扩增曲线结果显示ct值为22．993±0．708，正常对照组样本ct值均为0，与直接测序法检测结果完全相符，其符合率为100％，未发现假阳性和假阴性结果者。结论用实时荧光定量突变特异性Taqman探针法检测LHONmtDNA11778G〉A突变位点的方法简单、省时、准确、直观、特异性强、敏感度高，适用于对LHONmtDNA11778G〉A突变的大规模筛查或预防性检查。
- 张艳敏宋丹安慧娟陈慷王志立鲍玉洲赵朝霞
- 关键词：LEBER遗传性视神经病变线粒体DNA实时荧光定量PCR点突变
- 用多重巢式PCR技术同步检测角膜组织中HBV HCV RV的实验研究
- ＜正＞[目的]探索用多重巢式PCR技术同步快速检测角膜移植供体组织材料中HBV、HCV和RV（狂犬病毒）污染的新方法,防止角膜移植手术引起的医源性病毒交叉感染。 [方法]供体角膜周边组织材料48份由本所眼库提供。角膜供体...
- 鲍玉洲王丽娅张艳敏
- 文献传递
- 人表皮生长因子真核细胞缓释型滴眼剂的基因治疗研究
- 鲍玉洲赵国强常凌云张艳敏田小莉孔众谢巍
- 该研究是利用基因工程技术，通过基因扩增、克隆、纯化等方法，在体外构建完成人表皮生长因子（recombinant human epidermal growth factor, rhEGF）的全基因序列，再将其插入真核细胞高...
- 关键词：
- 关键词：基因治疗人表皮生长因子角膜滴眼剂
- rhEGF基因治疗角膜碱烧伤的实验研究被引量：2
- 2007年
- 目的探讨重组人表皮生长因子(rhEGF)基因缓释型滴眼液对兔角膜碱烧伤的基因治疗。方法新西兰白兔75只,分为A(rhEGF-pcDNA3.1-脂质体基因滴眼液)、B(rhEGF衍生物滴眼液)、C(pcDNA3.1空质粒-脂质体对照组)三组分别点眼治疗兔角膜碱烧伤。每天观察模型眼眼表、荧光素染色并照相。分别测定hEGFmRNA、hEGF和EGFR在角膜组织中的表达。结果A组眼表结膜充血、分泌物、角膜水肿和角膜混浊程度均比B组和C组轻。角膜荧光素染色显示A组角膜上皮的溃疡面积较B组和C组范围小,21d转为阴性。A组基因在行滴眼24h后在全层角膜细胞内可见hEGFmRNA和蛋白质表达,第3d达高峰,细胞阳性率高达95%,随后逐渐降低,21d仍有弱表达。结论rhEGF-PcDNA3.1-脂质体基因滴眼液能够降低角膜的炎症反应,促进角膜上皮细胞的增生,加速角膜碱烧伤的损伤修复过程。
- 高岚赵国强张艳敏鲍玉洲
- 关键词：重组人表皮生长因子角膜碱烧伤
- 人表皮生长因子慢病毒载体的构建及表达被引量：3
- 2010年
- 目的:构建人表皮生长因子(hEGF)慢病毒(LV)载体。方法:酶切并收集pcDNA3.1-hEGF载体中的hEGF目的基因片段,克隆进入含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体内,将所得重组体LV-GFP-hEGF与辅助载体pΔ8.2和pVSVG共同转染人胚肾293T细胞,进行病毒包装。收集上清液,按按10-1～10-7倍比稀释后培养,检测病毒滴度;裂解细胞,进行Western Blot分析。结果:PCR扩增、HindⅢ酶切鉴定及测序结果均证实LV-GFP-hEGF构建成功。将LV-GFP-hEGF转染293T细胞,紫外光下检测可见绿色荧光;LV滴度达5×108TU/mL,转染效率>75%,Western Blot证实转染细胞可表达hEGF。结论:成功构建了含有GFP报告基因的hEGF慢病毒载体,包装后的慢病毒可在293T细胞内高效表达。
- 张丽梅冯龙张艳敏马晶赵国强安玉会鲍玉洲
- 关键词：人表皮生长因子慢病毒载体基因构建
- Leber病14484原发合并新继发位点突变频谱研究被引量：1
- 2012年
- 目的:分析中国人Leber遗传性视神经病变14484位点突变的频谱及其遗传特征。方法:针对57例疑似LHON 14484位点突变的患者设计引物进行PCR扩增,PCR产物用限制性片段长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(SSCP)并联合DNA测序的方法进行分析。同时选取20例正常健康成人作为对照。结果:57例LHON疑似14484位点突变者中,确诊9例为14484位点突变,占15.8%。其中2例单纯性14484位点突变,占22.2%;3例14484位点联合14502位点突变,占33.3%;3例14484位点联合14470位点突变,占33.3%;1例14484位点联合14569位点突变,占11.1%。对照组正常健康成人测序结果均为正常序列。结论:中国人线粒体LHON14484原发性位点突变中,存在与其他继发性位点联合致病的倾向,其中以14484+14502和14484+14470这两个突变位点为主。
- 安慧娟张艳敏宋丹孙艳艳杨旭鲍玉洲
- 关键词：LEBER遗传性视神经病线粒体DNA
- 感觉统合训练在自闭症患儿康复中的应用效果观察被引量：10
- 2018年
- 目的:观察感觉统合训练在自闭症患儿康复中的应用效果。方法:选取40例自闭症患儿作为研究对象,按照随机数字表法将其分为对照组和观察组各20例。对照组给予常规干预,观察组在对照组基础上行感觉统合训练。比较两组干预前后自闭症儿童行为检查量表(ABC)和儿童感觉统合检核表评分。结果:干预后,观察组感觉统合失调评分明显高于对照组,ABC量表各维度评分均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:在常规干预基础上采用感觉统合训练能改善自闭症患儿感觉统合失调和临床症状,效果优于单纯常规干预。
- 张艳敏尚清
- 关键词：感觉统合训练自闭症感觉统合失调
- 人表皮生长因子基因真核表达载体的构建及其基因转染被引量：3
- 2006年
- 目的:构建人表皮生长因子基因真核表达载体,并将其导入细胞中表达表皮生长因子重组蛋白。方法:经HindⅢ、BamHI酶切PGEM-TEasy-hEGF,将人表皮生长因子基因定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1中。在脂质体的包裹下将pcDNA3.1-hEGF导入角膜组织细胞中,分别从DNA、RNA、蛋白质3个水平上检测人表皮生长因子基因表达情况。结果:经T7/SP6和hEGF内套引物进行PCR扩增及酶切鉴定重组体,分别得到310bp和162bp两条基因片段,将162bp条带经纯化后用AVaⅢ限制性内切酶切鉴定,可分别得到89bp和72bp两条片段;将人表皮生长因子基因序列与Genbank上公布的序列相比,碱基同源性达98.2%,氨基酸完全相同;PCR,RT-PCR在转染后21d之内,在DNA、RNA水平上可检测到人表皮生长因子基因;免疫组织化学检测法在转染后第3天可检测到人表皮生长因子蛋白表达,2周之后,人表皮生长因子蛋白表达结果转为阴性。结论:pcDNA3.1-hEGF重组质粒与LipofectamineTM2000以适当比例混合形成的微囊可携带人表皮生长因子基因进入细胞内并表达功能蛋白。
- 鲍玉洲张立华张艳敏
- 关键词：表皮生长因子基因转染
- 针灸配合小儿智力糖浆治疗精神发育迟滞疗效评价被引量：6
- 2018年
- 目的:研究针灸配合小儿智力糖浆治疗精神发育迟滞的临床效果。方法:将86例精神发育迟滞患儿作为研究对象,随机分成两组,每组43例。对照组予以小儿智力糖浆治疗,实验组在对照组基础上予以针灸治疗,比较两组治疗前后的发育商、治疗效果。结果:实验组治疗后的发育商、治疗总有效率较对照组更有优势(P<0.05)。结论:对精神发育迟滞患儿进行针灸、小儿智力糖浆联合治疗,可有效改善发育商,临床应用价值较高。
- 张艳敏段佳丽高超
- 关键词：针灸小儿智力糖浆精神发育迟滞
