张波
- 作品数：10 被引量：20H指数：3
- 供职机构：徐州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金江苏高校优势学科建设工程资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 刚地弓形虫抑制蛋白主要特性分析与抗原表位预测被引量：2
- 2015年
- 目的用生物信息学方法分析刚地弓形虫抑制蛋白（ T. gondii profilin, TgPRF）的主要特性与抗原表位，筛选该蛋白的T／B细胞联合抗原表位。方法利用NCBI上的ORF finder, Prot-Param, SignalP, TMHMM. MotifScan. WoLF PSORT, PSORT Ⅱ, SOPMA, Bcepred. SYFPEITHI.NetCTL等生物信息学在线分析程序．结合Gene Runner和DNAMAN等生物信息学软件．分析并预测TgPRF蛋白的开放阅读框、理化性质、信号肽、跨膜区、翻译后修饰位点、亚细胞定位、二级结构、表面可及性、可塑性、亲（疏）水性及T/B细胞抗原表位。结果TgPRF基因的开放式阅读框为492个碱基的核苷酸序列。TgPRF蛋白由163个氨基酸组成，相对分子质量为17555．2，分子式为C764H^1160N204O258S7，等电点为4．40，有4个表面可及性参数≥1．9的区域、5个亲水性参数得分≥1．9的区域、3个柔韧性参数得分≥2的区域、10个翻译后修饰位点、8个潜在B细胞抗原表位和3个T／B细胞联合表位。结论TgPRF蛋白有多个优势抗原表位．为后续弓形虫免疫保护性的研究提供理论指导。
- 刘转转原飞张波郑葵阳张小凡马佳智
- 关键词：刚地弓形虫抑制蛋白生物信息学抗原表位
- 小鼠肝内胆管上皮细胞的分离与鉴定被引量：1
- 2015年
- 为建立一种简单可靠的小鼠肝内胆管上皮细胞(MIBECs)分离培养方法,用Ⅳ型胶原酶进行门静脉灌注,取出肝内胆管,用DNaseⅠ、pronase E和Ⅳ型胶原酶分类消化,小鼠肝内胆管组织细小、均匀的细胞团培养于含100mL/L胎牛血清(FBS)和10ng/mL表皮生长因子(EGF)、肝细胞生长因子(HGF)和胰岛素转铁蛋白硒(ITS)的DMEM/F12培养基中。细胞贴壁后,利用细胞角蛋白19免疫荧光法鉴定目的细胞。在培养的过程中,用CCK8测定细胞的生长曲线。结果显示,成功分离出MIBECs,细胞纯度约95%。细胞培养3d^7d内呈对数生长状态。以上结果表明本分离培养方法是一种简单可靠的小鼠肝内胆管上皮细胞分离纯化培养技术。
- 王艳红张波李波张蓓蓓于倩颜超华慧汤仁仙郑葵阳
- 关键词：小鼠肝内胆管上皮细胞
- 华支睾吸虫感染FVB小鼠的试验研究被引量：4
- 2016年
- 为了观察华支睾吸虫感染FVB小鼠肝脏组织病理变化,将12只健康雌性FVB小鼠随机分成2组,分别为正常组与感染组,每组6只。感染组小鼠经口灌饲45个华支睾吸虫囊蚴。于感染后25d用NaOH消化法检测粪便虫卵阳性率,感染后第112天收集肝脏组织,进行HE染色及Masson染色观察肝脏病理变化情况;收集外周血,ELISA检测血清中华支睾吸虫特异性IgG抗体。虫卵检查结果显示,感染组小鼠在感染后25d检查到虫卵,肉眼观察小鼠肝小叶边缘有白色结节样病变,肝脏表面有白色透明水泡。感染组小鼠血清中华支睾吸虫特异性IgG水平显著高于正常组(P<0.01)。HE染色观察小鼠肝脏组织,见到虫体,炎症细胞浸润严重,纤维化明显并伴有点状坏死。肝细胞肿胀,肝窦狭窄,胆管扩张增生显著,胆管上皮细胞水肿、坏死,部分胆管上皮细胞胞浆均质红染。Masson染色显示肝脏组织尤其是虫体周围出现大面积纤维化。试验结果表明,华支睾吸虫感染FVB小鼠肝脏病变严重,因此可利用该品系小鼠建立华支睾吸虫感染模型,为深入研究华支睾吸虫的致病机制奠定基础。
- 张蓓蓓张波沈莉萍李波颜超汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫肝脏病理变化
- PI3K/AKT/mTOR在华支睾吸虫感染小鼠肝纤维化模型中的表达及意义被引量：5
- 2016年
- 目的探讨脂酰肌3激酶-蛋白激酶B-雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)在华支睾吸虫感染小鼠致肝纤维化作用。方法 6周龄雌性C3H/HeN小鼠随机分为正常对照组和华支睾吸虫感染组,感染组每只小鼠经口灌胃45个华支睾吸虫囊蚴,对照组每只小鼠经口灌入等量的生理盐水,感染28d后取出小鼠肝脏组织,Masson染色,观察病理变化;免疫组织化学染色检测肝脏组织中α-SMA和p-mTOR蛋白的定位与表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测小鼠肝脏组织中α-SMA、COL1和TGF-βmRNA表达水平;Western blot法检测小鼠肝脏组织中TGF-β、α-SMA、pPI3K、p-AKT和p-mTOR的蛋白水平。结果成功建立小鼠肝纤维化模型。与对照组相比,感染组小鼠肝脏的胶原沉积显著增加,α-SMA及p-mTOR阳性细胞数量显著增多(t=-8.374,P<0.01;t=-9.545,P<0.01),α-SMA、COL1、TGF-βmRNA(t=-3.553,P<0.01;t=-3.448,P<0.01;t=-3.052,P<0.01)以及α-SMA、TGF-β、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR的蛋白表达水平显著升高(t=-7.076,P<0.01;t=-5.054,P<0.01;t=-6.941,P<0.01;t=-8.123,P<0.01;t=-7.445,P<0.01)。结论 PI3K/AKT/mTOR在华支睾吸虫感染小鼠肝脏高度表达,因此推测该信号通路在华支睾吸虫感染致肝纤维化中发挥重要作用。
- 李波王海玉沈莉萍方凡程晓丹张蓓蓓张波颜超汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫小鼠肝纤维化
- 刚地弓形虫抑制蛋白的原核表达与免疫反应性分析被引量：3
- 2015年
- 目的克隆并表达刚地弓形虫抑制蛋白(Tg PRF)基因,并分析其免疫反应性。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,根据Tg PRF的基因编码序列设计引物,RT-PCR扩增产物双酶切后连接入p ET30a(+)载体,重组质粒转化入大肠埃希菌(E.coli)DH5α,经双酶切、PCR和测序鉴定阳性菌落。p ET30a(+)-Tg PRF转化至E.coli BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。重组蛋白经镍亲和层析法纯化后,以兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析r Tg PRF蛋白的免疫反应性。结果 Tg PRF基因RT-PCR扩增产物约为492 bp。经双酶切、PCR和测序结果显示,重组质粒p ET30a(+)-Tg PRF构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约35 000的可溶性重组蛋白。Western blotting结果显示,r Tg PRF蛋白能被兔抗弓形虫血清识别。结论本研究克隆的Tg PRF基因序列能在原核表达系统中表达,且具有免疫反应性。
- 原飞刘转转张波曹建平郑葵阳王德广
- 关键词：刚地弓形虫抑制蛋白基因克隆原核表达免疫反应性
- 重组刚地弓形虫抑制蛋白滴鼻免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答被引量：2
- 2016年
- 目的观察不同浓度重组刚地弓形虫抑制蛋白(r Tg PRF)滴鼻免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答,探讨其最佳免疫剂量。方法 50只雌性BALB/c小鼠随机分为5组,免疫组分别用10、20、30μg和40μg r Tg PRF溶于20μl磷酸盐缓冲液(PBS)后滴鼻免疫,对照组用20μl PBS。分别于第0、14和21天滴鼻免疫小鼠,末次免疫后2周,颈椎脱臼处死小鼠。无菌取脾,采用CCK-8法测定脾淋巴细胞刺激指数(SI),酶联免疫吸附试验(ELISA)测定脾淋巴细胞上清液中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10浓度。结果经r Tg PRF刺激,30μg和40μg免疫组小鼠脾淋巴细胞SI均高于对照组(P均<0.05),且30μg组显著高于40μg组(P<0.05)。与对照组比较,所有免疫组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ含量升高(P均<0.05),20、30μg和40μg组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IL-2含量增加(P均<0.05),其中30μg组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ(P均<0.01)和IL-2含量最高(P均<0.01);所有免疫组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IL-4和IL-10含量与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 r Tg PRF滴鼻免疫小鼠可诱导脾淋巴细胞增殖和Th1型细胞免疫应答,以30μg剂量免疫效果最佳。
- 刘转转张波原飞张开利王婷郑葵阳
- 关键词：刚地弓形虫抑制蛋白滴鼻免疫脾淋巴细胞免疫应答
- 华支睾吸虫成虫抗原和排泄分泌产物对T细胞的作用研究
- 2017年
- 目的观察华支睾吸虫成虫抗原(Crude antigen,CA)、排泄/分泌产物(excretory-secretory products,ESPs)对T细胞的作用。方法体外分离小鼠骨髓细胞诱导分化为未成熟骨髓树突状细胞(immature DC,iDC);磁珠分选仪分选小鼠脾脏细胞的初始CD4+T细胞;流式细胞术检测DC、CD4+T细胞的纯度;抗原刺激DC细胞,实验分为PBS阴性对照组,LPS阳性对照组,CA和ESPs刺激组;负载抗原后的DC细胞与分选的CD4+T细胞共培养72h;Real time-PCR检测T-bet、GATA3mRNA的相对表达量;ELISA检测细胞培养上清中IFN-γ、IL-4细胞因子的表达量。结果与PBS组相比,ESPs刺激组Tbet、GATA3mRNA表达水平升高(P<0.05),而CA刺激组T-bet、GATA3 mRNA表达水平差异不显著;与PBS组相比,ESPs刺激组细胞因子IFN-γ、IL-4的含量均升高(P<0.05),CA刺激组仅IFN-γ的分泌增高(P<0.05),IL-4无明显变化。结论 CA可能诱导宿主产生Th1型免疫应答,ESPs可能诱导宿主产生Th1型、Th2型免疫应答。
- 张波张蓓蓓程晓丹华慧于倩颜超汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫DC细胞CD4+细胞成虫抗原
- 华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白基因的克隆、表达及免疫原性分析被引量：3
- 2015年
- 目的：克隆表达华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白（ Clonorchis sinensisfatty acid binding protein，CsFABP），并对其免疫原性进行分析。方法根据编码CsFABP的已知基因序列设计合成一对引物，应用RT－PCR技术扩增编码CsFABP的基因片段。将扩增的CsFABP的基因片段克隆到原核质粒pET30a（＋）中，转化入大肠埃希菌（ E． coli） DH5α中，经含卡那霉素琼脂平板筛选，小量抽提质粒，经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。将阳性重组质粒转化入E．coli BL21中，经异丙基－β－D－硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导表达，表达产物经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS－PAGE）、考马斯亮蓝染色、Western blot分析鉴定。结果经酶切、菌液PCR以及测序确认，成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，并在E．coli BL21中高效表达。 Western blot试验证实表达的Cs-FABP能被特异的兔抗华支睾吸虫免疫血清识别。结论本研究成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，获得的CsFABP表达蛋白质具有一定的反应原性。
- 张波张蓓蓓李波华慧李向阳刘转转颜超付琳琳汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白原核表达免疫原性
- TLR5在华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠肝脏中表达的初步分析 TLR5在华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠肝脏中表达的初步分析
- 2014年
- 目的 分析小鼠华支睾吸虫感染后小鼠肝脏中Toll样受体5（TLR5）的表达情况.方法 随机选取C3H/HeN雌性小鼠,经口感染35个华支睾吸虫囊蚴建立感染模型.分别在感染0（对照组）、1、7、28、56、84天处死小鼠,取肝脏组织行如下处理：①苏木精-伊红（H-E）染色观察小鼠肝脏病变;②采用免疫组织化学染色观察小鼠肝脏组织TLR5表达情况;③采用逆转录聚合酶链反应（RT-PC R）检测肝脏中TLR5的表达水平.结果 ①肝脏病理结果显示,与对照组小鼠相比,感染第1、7天小鼠肝脏汇管区出现炎症细胞浸润,第28天可观察到肝细胞排列紊乱,出现纤维组织增生和胆管增生;②免疫组织化学染色显示,TLR5在感染华支睾吸虫第1天、7天、28天的小鼠肝内表达增高,其主要表达于汇管区肝细胞、肝胆管上皮细胞和纤维化区域的成纤维细胞;③RT-PCR结果显示,小鼠肝脏中TLR5 mRNA表达量在感染第1天、7天、28天明显高于对照组.结论 C3H/HeN小鼠感染华支睾吸虫可上调肝脏组织TLR5的表达,提示TLR5可能在宿主抵抗华支睾吸虫感染中起着一定的作用。
- 徐江涛张波王林王艳红张曼曼华慧颜超刘相叶刘转转汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫
- 华支睾吸虫感染新西兰兔转化生长因子β1和白细胞介素17的动态变化及其意义被引量：3
- 2014年
- 目的分析华支睾吸虫感染新西兰兔转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素17(IL-17)的变化及意义。方法选择健康新西兰兔8只,经口灌胃华支睾吸虫囊蚴800个;于感染0、1、3、7、14、21、28和42d耳缘静脉采血,分离血清,用ELISA法检测血清中TGF-β1、IL-17水平;于42d剖杀感染兔,取肝脏制作组织切片,HE染色观察病理变化。结果实验兔感染0d时TGF-β1为(706.08±60.72)pg/ml,感染42d时为(1106.26±60.35)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.01)。IL-17水平自感染开始持续增高,在感染3d时[(68.69±6.04)pg/ml]达到最高峰,与感染0d[(50.04±4.16)pg/ml]时相比,差异有统计学意义(P<0.05);此后逐渐降低,至21d时降至感染前水平。结论新西兰兔感染华支睾吸虫早期IL-17高表达,感染42d时TGF-β1高表达。提示TGF-β1/IL-17在华支睾吸虫致病过程中发挥重要作用。
- 华慧徐江涛张波颜超李向阳刘瀛刘转转付琳琳汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫新西兰兔IL-17
