廖海印
- 作品数：4 被引量：14H指数：1
- 供职机构：齐齐哈尔大学生命科学与农林学院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家重点基础研究发展计划黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程医药卫生生物学化学工程更多>>
- 结核分枝杆菌Rv0859基因的克隆、表达、纯化及蛋白的亚细胞定位被引量：1
- 2009年
- 本研究体外克隆了结核分枝杆菌Rv0859基因,融合表达并纯化了Rv0859蛋白。首先提取H37Rv标准菌株中的基因组DNA,设计Rv0859基因两端的引物,以H37Rv基因组DNA为模板通过PCR方法扩增Rv0859基因。用HindIII和BamHⅠ两种限制性内切酶双切Rv0859基因,T4连接酶连接到pET30载体上,再转入大肠杆菌JF1125中,经过筛选鉴定后抽提质粒测序,得到重组正确载体,转化到表达宿主大肠杆菌BL21中。用IPTG进行诱导表达,通过聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及质谱鉴定重组表达蛋白。0.05mol/L浓度的IPTG37°C诱导4h重组蛋白的表达量最高。制备重组蛋白的多克隆抗体,通过亚细胞分离及Western-blotting分析蛋白的亚细胞定位。结果成功地构建原核表达载体pET30a-Rv0859,并获得47845D左右的大量表达的Rv0859蛋白,Western-blotting结果表明Rv0859蛋白主要定位于细胞膜中,微量存在于细胞壁中,为进一步的Rv0859蛋白功能研究奠定了一定的基础。
- 刘岩岩马国举廖海印张鹭王洪海
- 关键词：克隆纯化
- 双歧杆菌的分离与培养被引量：11
- 2008年
- 利用大多数双歧杆菌具有半乳糖苷酶且活性较高的特性,在改良的MRS培养基中加入X-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-半乳糖苷)作为显色底物,产生颜色反应,进而从市售酸奶中分离出3株双歧杆菌,并对其中的1株进行生长曲线的绘制及培养基成分的优化,为今后双歧杆菌产品的开发及生物学功能的探索奠定基础。
- 秦玲玲廖海印金雨华张宁张鹭
- 关键词：双歧杆菌培养基
- 里氏木霉306产t-PA固态发酵条件的研究被引量：1
- 2005年
- 对基因工程菌株里氏木霉(Trichodermareesei)306生物合成组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)的固态发酵培养基成分和发酵条件进行了研究;分析了发酵过程中t-PA的生成、总糖的消耗和菌体生长的规律。在优化的固体发酵条件下,t-PA的最大酶活是924.63IU/g干重培养基,较初始条件下提高了5倍。通过浅盘进行了放大实验,最大酶活为983.64IU/g干重培养基,t-PA合成速率为:13.66IU/g干重培养基.h,较三角瓶固态发酵最高产酶提高了6.38%,产酶速率提高了24.07%。
- 冮洁杜连祥路福平廖海印
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂T-PA固态发酵发酵条件基因工程药物
- 结核分枝杆菌Rv2461c基因的克隆、表达、纯化及其抗原性的初步检测被引量：1
- 2008年
- 目的:探索结核分枝杆菌Rv2461c基因编码的clpP蛋白作为结核检测抗原的可行性。方法:克隆结核分枝杆菌clpP蛋白的编码基因Rv2461c,构建pET30a-Rv2461c重组质粒,并将其成功的转化到大肠杆菌JF1125克隆载体中,测序鉴定结果正确。将pET30a-Rv2461 c重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,表达纯化目的蛋白进行质谱分析.制备clpP蛋白的多克隆抗体,通过亚细胞分离及Western检测分析蛋白的亚细胞定位,纯化的clpP蛋白通过间接ELISA实验进行抗原性的初步检测。结果:结核分枝杆菌clpP蛋白大量存在于细胞质中,少量存在于细胞壁和细胞膜中。重组抗原在检测肺结核病人中的检出率为38.3%(23/60),检测敏感性为38.3%,特异性为90%。结论:为后续深入研究clpP蛋白的生物功能、clpP作为诊断靶标、药靶候选蛋白的可行性提供了基础。
- 王庆忠张鹭马国举廖海印王洪海
- 关键词：结核分枝杆菌蛋白表达亚细胞定位
