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人TPX2基因过表达慢病毒质粒的构建及其人宫颈癌细胞稳定表达株的筛选被引量：4: 2017年; 目的构建人TPX2基因过表达慢病毒质粒,并筛选该基因的人宫颈癌HeLa细胞稳定表达株。方法经PCR法扩增人TPX2基因序列,克隆至线性化的慢病毒载体LV11中,构建重组慢病毒质粒,进行酶切及测序鉴定。将鉴定正确的重组慢病毒及空载体LV11(LV11-NC)分别与辅助质粒共转染293T细胞进行病毒包装,并检测病毒滴度。用重组慢病毒感染HeLa细胞,经不同浓度G418(0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5、2.0 mg/ml)筛选TPX2基因过表达稳转细胞株,同时设阴性对照(感染LV11-NC慢病毒)及空白对照(未感染病毒)。采用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测各组HeLa细胞中TPX2基因m RNA转录及蛋白的表达水平。结果经酶切及测序鉴定证明重组慢病毒质粒构建成功。经293T细胞包装后,获得重组慢病毒的滴度为3×10~8 TU/ml。采用0.6 mg/ml G418成功筛选出TPX2过表达细胞株。与阴性对照及空白对照比较,感染重组慢病毒的HeLa细胞中,TPX2基因m RNA转录及蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论成功构建了人TPX2过表达慢病毒质粒,并筛选出TPX2稳定表达的HeLa细胞株,为进一步研究TPX2基因在宫颈癌中的作用奠定了基础。; 常海平杨彩荣郑健; 关键词：过表达慢病毒宫颈癌 HELA细胞

过表达TPX2对人宫颈癌Hela细胞增殖和周期的影响及机制被引量：1: 2018年; 该文的目的是研究过表达Xklp2靶蛋白(targeting protein for Xklp2,TPX2)对人宫颈癌Hela细胞体外增殖和细胞周期的影响及相关机制。构建TPX2过表达慢病毒载体(LV11-TPX2)及阴性对照(LV11-NC),选取稳定感染过表达慢病毒载体(LV11-TPX2)的Hela细胞作为实验组,将稳定感染(LV11-NC)的Hela细胞作为阴性对照组。未感染病毒的人宫颈癌Hela细胞作为空白对照组(CON)。CCK-8法及克隆形成实验检测各组Hela细胞体外增殖能力,FCM法检测各组Hela细胞的细胞周期分布变化。Western blot检测TPX2通路中Aurora A、eg5、P53蛋白质及增殖和细胞周期相关蛋白Ki67、CyclinB2、PCNA的水平。结果显示:与空白对照组及阴性对照组比较,LV11-TPX2感染组Hela细胞增殖能力明显增强(P<0.05);LV11-TPX2组形成的克隆数目明显多于阴性对照组及空白对照组(P<0.05)。LV11-TPX2组S期及G_2/M期细胞所占比例明显增加(P<0.05)。LV11-TPX2感染组Hela细胞中Aurora A、eg5、Ki67、CyclinB2、PCNA蛋白质水平明显上调(P<0.05),P53蛋白质明显下调(P<0.05)。以上结果表明,TPX2基因过表达能促进宫颈癌细胞的增殖,S期及G_2/M期细胞所占比例明显增加,可能与其下调P53蛋白质水平及上调Aurora A、eg5、Ki67、CyclinB2、PCNA蛋白水平有关。; 常海平杨彩荣宋淑芳任杰郑健张龙; 关键词：宫颈癌 TPX2 过表达细胞增殖细胞周期

慢病毒介导的TPX2基因沉默对人宫颈癌HeLa细胞系增殖、迁移和细胞周期的影响及机制被引量：2: 2017年; 目的:研究慢病毒介导的TPX2基因沉默对人宫颈癌He La细胞系增殖、迁移和细胞周期的影响及其机制。方法:构建4种靶向TPX2基因的慢病毒表达载体(LV-TPX2-sh RNA-1/2/3/4),同时构建阴性对照质粒,将5种质粒分别转染到293T细胞中制备慢病毒。慢病毒感染宫颈癌He La细胞后,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测TPX2 m RNA和蛋白的沉默效果。选择沉默效果最佳的重组慢病毒进行后续功能实验。分别采用CCK-8法、Transwell迁移实验及流式细胞术检测各组细胞的增殖、迁移及细胞周期分布情况。Western blot检测TPX2-sh RNA转染前后Ki-67、cyclin B2、Aurora-A及P53的表达。结果:与对照组比较,构建的靶向TPX2基因的RNA干扰慢病毒载体均可持续稳定的抑制He La细胞TPX2基因的表达,尤其以LV-TPX2-sh RNA-1最为明显(P<0.01),故选择LV-TPX2-sh RNA-1进行后续实验。与对照组比较,沉默TPX2基因的表达能降低He La细胞增殖及迁移能力(P<0.05),使G2及S期细胞比例明显增加(P<0.05),且上调P53蛋白的表达水平,下调Ki-67、cyclin B2及Aurora-A蛋白的表达水平(P均<0.05)。结论:沉默TPX2基因蛋白表达能抑制宫颈癌细胞的增殖及迁移能力,可能与其改变细胞周期分布及下调Ki-67、cyclin B2、AuroraA蛋白表达水平,上调P53蛋白表达水平有关。; 宋淑芳常海平杨彩容赵荣伟张龙任杰郑健; 关键词：宫颈癌慢病毒细胞周期

靶向TPX2基因shRNA慢病毒载体的构建及鉴定被引量：3: 2017年; 目的构建靶向TPX2基因的RNA干扰慢病毒载体,获得稳定感染的人宫颈癌He La细胞株,为宫颈癌细胞TPX2基因的相关研究奠定基础。方法以TPX2基因为靶点,设计并合成四组对应于目标shRNA的双链DNA发卡结构,分别与慢病毒载体Pglv2-U6-Puro连接经转化感受态细胞,阳性克隆经测序、病毒包装、滴度测定、感染细胞、嘌呤霉素筛选得到TPX2基因沉默稳转细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot检测TPX2 mRNA和蛋白的沉默效果。流式细胞计量术检测其对细胞周期分布及凋亡的影响。结果测序结果证实5种慢病毒载体均包装成功,采用0.4μg/m L嘌呤霉素成功筛选出TPX2沉默细胞株。He La细胞感染4种载有TPX2-shRNA的重组慢病毒后,均发挥了沉默效应,尤以TPX2-shRNA-1沉默效果最佳,TPX2 mRNA相对表达量为0.21±0.07,低于对照组的1.08±0.07(P<0.01);TPX2蛋白质相对表达量为0.19±0.28,低于对照组的0.64±0.03(P<0.01);G2及S期细胞高于对照组(P<0.05);细胞凋亡率明显多于对照组(P<0.05)。结论获得了一种有效TPX2基因的干扰序列,成功构建了TPX2 shRNA慢病毒干扰载体,并筛选出TPX2基因沉默的He La细胞株,为进一步研究TPX2基因在宫颈癌中的作用奠定了基础。; 常海平宋淑芳任杰; 关键词：宫颈癌慢病毒

纤溶酶原激活系统与肿瘤侵袭的关系: 2005年; 目的:探讨uPA系统与肿瘤侵袭的关系。方法:查阅国内外有关文献,加以总结。结果:在多种恶性肿瘤中,uPA系统表达异常。结论:uPA系统与肿瘤侵袭转移关系密切,将会对肿瘤治疗提供新途径。; 常海平; 关键词：UPA UPAR PAI-1 肿瘤

慢病毒介导的TPX2沉默对人宫颈癌HeLa细胞凋亡和侵袭的影响及机制被引量：3: 2017年; 该文的目的是研究慢病毒介导的Xklp2靶蛋白(targeting protein for Xklp2,TPX2)沉默对人宫颈癌He La细胞凋亡、侵袭的影响及机制。构建4种载有TPX2-sh RNA的重组慢病毒及其阴性对照,将5种重组慢病毒分别稳定感染人宫颈癌He La细胞,利用实时荧光定量PCR和Western blot筛选出TPX2沉默效果最佳的一组He La细胞作为干扰组进行后续实验。采用Transwell基底膜侵袭实验测定各组细胞的侵袭能力。采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。Western blot检测TPX2-sh RNA转染前后细胞凋亡及侵袭相关蛋白质Bcl-2、Bax、Caspase-3、MMP9、TIMP-1及nm23-H1水平。结果显示,筛选出的RNA干扰慢病毒载体LV-TPX2-sh RNA-1可有效抑制He La细胞TPX2的表达;与对照组相比,干扰组的He La细胞凋亡率明显增加(P<0.01);穿过Transwell小室基底膜细胞明显减少(P<0.01)。He La细胞感染LV-TPX2-sh RNA-1能下调凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平,上调Caspase-3及Bax的表达水平(P<0.05);上调侵袭相关蛋白质nm23-H1及TIMP-1水平,下调MMP9水平(P<0.05)。以上结果表明,沉默TPX2表达能增加宫颈癌细胞的凋亡,可能与其上调Caspase-3及Bax水平,下调Bcl-2水平有关;沉默TPX2表达能抑制宫颈癌细胞侵袭能力,可能与其上调TIMP-1及nm23-H1水平,下调MMP9的水平有关。; 常海平杨彩容赵荣伟张龙任杰; 关键词：宫颈癌慢病毒细胞凋亡细胞侵袭

siRNA特异性沉默TPX2基因对人宫颈腺癌Hela细胞体外生长的影响被引量：2: 2012年; 目的:应用TPX2-siRNA转染Hela细胞,探讨TPX2基因沉默后对Hela细胞增殖和侵袭力及周期分布的影响。方法:合成TPX2特异性的siRNA 4对,随机siRNA阴性对照1对。Lipofectamine 2000介导siRNA转染Hela细胞株。RT-PCR检测转染前后mRNA表达的变化,Western blot检测转染前后蛋白表达的变化,MTT、流式细胞术(FCM)、Transwell小室和Matrigel基质侵袭实验观察细胞增殖、周期、及侵袭能力的变化。结果:在600μL转染体积中,在siRNA浓度为20μmoL/L时,siRNA和Lipoectamine2000以2.5:2比例搭配时,转染效率最高,24h为(98.33±1.53)%。TPX2mRNA沉默效果尤以TPX2-siRNA4最强达(82.5±0.43)%,其蛋白表达水平明显降低,抑制率达(63.4±1.05)%。TPX2-siRNA4转染组发生了明显的细胞周期S期停顿现象,细胞增殖受到显著抑制。TPX2-siRNA4转染组穿膜细胞为13.33±1.53显著低于空白对照组54.33±2.52和阴性对照组53.00±4.00(P<0.05)。结论:siRNA干扰TPX2后能抑制Hela细胞增殖和侵袭,影响其周期分布,因此TPX2可以作为人宫颈腺癌基因治疗的候选靶点。; 常海平田原王敬芝徐杰勾晓娟程建新; 关键词：HELA细胞细胞周期

宫颈鳞癌组织中TPX2的表达及其临床意义被引量：5: 2012年; 目的探讨TPX2蛋白和mRNA在宫颈鳞癌组织中的表达及其与宫颈鳞癌患者临床病理资料之间的相关性。方法 2009年10月至2010年11月在河北医科大学第四医院,采用免疫组织化学法、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法,对62例宫颈癌、15例正常宫颈组织和30例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织进行检测,分析TPX2的mRNA和蛋白质的表达。结果经RT-PCR检测,正常宫颈组织中几乎不表达TPX2mRNA,宫颈鳞癌组织中相对含量为0.441±0.011,两者之间差异具有统计学意义(t=-19.568,P<0.01)。经免疫组化检测,TPX2蛋白在正常宫颈鳞状上皮组织中不表达,在CIN和宫颈鳞癌组织中呈阳性表达,三者之间差异具有统计学意义(P<0.05)。宫颈鳞癌组织中TPX2的表达与组织学分级、FIGO分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),而与年龄无关(P>0.05)。结论 TPX2可能参与了宫颈鳞癌的发生和发展,TPX2可作为宫颈鳞癌早期诊断及预后估计的一个指标。; 常海平王敬芝田原徐杰勾晓娟程建新; 关键词：宫颈肿瘤 TPX2 逆转录聚合酶链式反应免疫组织化学

参苓白术散对宫颈癌化疗时胃肠功能保护机制的探讨被引量：6: 2017年; 目的:探讨参苓白术散对宫颈癌化疗时胃肠功能保护机制。方法:选取108例宫颈癌患者按照入院顺序随机分为对照组和治疗组,每组54例。两组均予新辅助TP化疗方案,治疗组再予参苓白术散口服。观察两组患者治疗前后氧化应激(SOD、MDA)、免疫功能(CD4^+、CD8^+)及生活质量的变化,治疗过程中消化道不良反应发生情况(恶心呕吐、腹泻程度)。结果:治疗后,对照组SOD、CD4^+、CD4^+/CD8^+水平下降(P<0.05),MDA、CD8^+水平升高(P<0.05);治疗组SOD、CD4^+、CD4^+/CD8^+水平升高(P<0.05),MDA、CD8^+水平下降(P<0.05)。治疗后两组比较,治疗组SOD、CD4^+、CD4^+/CD8^+水平高于对照组(P<0.05),MDA、CD8^+水平低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组行动能力、疼痛/不舒服、焦虑/抑郁评分均高于治疗前(P<0.01);两组治疗后比较,治疗组行动能力、疼痛/不舒服、焦虑/抑郁评分均高于对照组(P<0.05)。治疗过程中治疗组恶心呕吐、腹泻程度评分均明显低于对照组(P<0.05)。结论:参苓白术散对宫颈癌化疗患者胃肠功能具有保护作用,其机制可能与调节患者氧化应激及免疫水平有关。; 杨彩荣常海平蒙燕燕; 关键词：宫颈癌参苓白术散化疗胃肠功能

过表达TPX2对人宫颈癌HeLa细胞侵袭和凋亡的影响被引量：6: 2018年; 目的通过TPX2过表达慢病毒载体在人宫颈癌HeLa细胞过表达TPX2基因,在体外研究TPX2对人宫颈癌HeLa细胞侵袭和凋亡的作用及其相关机制。方法构建TPX2过表达慢病毒载体(LV11-TPX2)及阴性对照(LV11-NC),选取稳定感染过表达慢病毒载体(LV11-TPX2)的HeLa细胞作为过表达组,将稳定感染(LV11-NC)的HeLa细胞作为阴性对照组,未感染病毒的人宫颈癌HeLa细胞作为空白对照组(CON)。采用Transwell基底膜侵袭实验测定各组细胞的侵袭能力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况,Western blot检测细胞凋亡及侵袭相关蛋白质Bcl-2、Bax、Caspase-3、MMP-9、基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)及nm23-H1的表达。结果成功构建TPX2过表达慢病毒载体(LV11-TPX2),可有效过表达TPX2 mRNA及蛋白质。与对照组比较,TPX2过表达组的HeLa细胞凋亡率明显减少(P<0.05),穿过Transwell小室基底膜细胞明显增加(P<0.01)。LV11-TPX2感染组HeLa细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2的表达明显上调(P<0.05),Caspase-3及Bax的表达明显下调(P<0.05);侵袭相关蛋白质nm23-H1及TIMP-1水平明显下调(P<0.05),MMP-9水平明显上调(P<0.05)。结论在宫颈癌细胞过表达TPX2基因后,能抑制细胞凋亡,增强其侵袭能力,可能的机制为在宫颈癌细胞过表达TPX2能诱导凋亡和侵袭相关蛋白Caspase-3、Bax、nm23-H1及TIMP-1水平下调,Bcl-2及MMP-9水平上调。; 常海平宋淑芳郑健; 关键词：HELA细胞 TPX2 过表达宫颈癌细胞侵袭

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常海平

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