左琴
- 作品数：42 被引量：33H指数：4
- 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学机械工程更多>>
- c-Ha-ras在转基因小鼠模型C57-ras各组织中的表达谱分析被引量：5
- 2013年
- 目的:分析转基因c-Ha-ras在C57-ras癌症小鼠模型中的组织表达谱及时空表达差异。方法:利用半定量及荧光定量RT-PCR法,分析不同首建鼠系、不同周龄小鼠各脏器中转基因c-Ha-ras的表达。结果:转基因c-Ha-ras在心、肝等13种组织器官中均有表达,在肺脏中表达最高,在肝脏中表达最低,No.2、No.3和No.5等3个首建鼠均呈现相似的变化规律;转基因在No.5首建鼠中表达水平最高,而在同一个首建鼠系中,12周龄时表达高于8周龄和24周龄。结论:转基因c-Ha-ras在各脏器中能高效表达,并间接表明该转基因能稳定遗传,为C57-ras癌症小鼠模型用于新药临床前致癌性评价提了供理论支持。
- 刘甦苏周舒雅高正琴左琴岳秉飞贺争鸣刘佐民张冰范昌发
- 关键词：基因表达谱
- 模式小鼠总DNA三种提取方法比较被引量：4
- 2014年
- 目的建立简便、快捷、经济的模式小鼠总DNA提取方法,以快速鉴定大批量模式小鼠基因型。方法采用苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法提取同种模式小鼠总DNA,对比DNA纯度、得率、耗费时间,并比较基因型鉴定结果。结果苯酚抽提法得率最高,异丙醇沉淀法最低;而纯度则按照苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法顺序递减;在耗时上鼠耳煮沸法最短。三种方法提取的DNA均可做模版用于基因型鉴定。结论鼠耳煮沸法操作简单、成本最低,快速、基因型鉴定结果可靠,可用于规模化的基因型鉴定实验中。
- 刘甦苏左琴周舒雅王辰飞贺争鸣李保文范昌发
- 关键词：基因型鉴定PCR反应
- 一种EV71疫苗的体内效力评价方法及抗病毒药物筛选方法
- 本发明涉及一种EV71疫苗的体内效力评价方法及抗病毒药物筛选方法，具体涉及生物领域。更具体地，本发明建立了一个由动物模型、假病毒以及活体成像组成的敏感、安全、方便的EV71疫苗效力体内评价体系，为已有疫苗的质量控制和评价...
- 范昌发周舒雅刘强吴星陈盼吴曦王佑春毛群颖刘甦苏左琴黄维金李保文梁争论李文辉贺争鸣
- 文献传递
- C-HA-RAS在转基因小鼠模型C57-RAS各组织中的表达谱分析
- 目的 本文旨在分析转基因C-HA-RAS在C57-RAS癌症小鼠模型中的组织表达谱及时空表达差异.方法 利用半定量及荧光定量RT-PCR法,分析了不同首建鼠系、不同周龄小鼠各脏器中转基因C-HA-RAS的表达.结果 ...
- 刘瓺苏周舒雅高正琴左琴岳秉飞贺争鸣刘佐民张冰范昌发
- 关键词：基因表达谱
- SNP标记在近交系大鼠品系鉴定中的应用及引物序列
- 本发明公开了一种SNP标记在近交系大鼠品系鉴定中的应用及引物序列。本发明提供的SNP标记包括4个SNP位点，能够对选自BN、F344、WKY、Lewis、DA、PVG、SHR和TSC的8个近交系大鼠品系中的部分或全部进行...
- 王洪魏杰李欢周佳琪赵蓝刘巍朱婉月马丽颖左琴付瑞岳秉飞
- C57-ras转基因小鼠模型的建立被引量：10
- 2013年
- 目的:建立用于临床前药物安全性致癌评价的人类原癌基因c-Ha-ras转基因小鼠模型。方法:通过PCR方法克隆人的原癌基因c-Ha-ras,全长6.5 kb,含有4个外显子,以及该基因本身的启动子、调控序列和poly A信号序列;并将其通过原核注射注入C57BL/6J小鼠受精卵雄原核。通过PCR,real-time RT PCR和反转录cDNA测序比对等手段鉴定c-Ha-ras基因的插入和表达,并结合病理切片分析自发肿瘤的发生。结果:人类原癌基因c-Ha-ras在原核注射后的基因整合率达到1.6%,共得到人类c-Ha-ras基因的插入的首建鼠6只,其中3只得以成活,并且人类c-Ha-ras基因能够稳定遗传,建成C57-ras转基因小鼠系;C57-ras转基因小鼠反转录cDNA测序比对与人源c-Ha-ras一致;3个转基因小鼠系c-Ha-ras基因的表达分别是野生型小鼠的70.53、59.07和99.68倍;病理切片分析,6只首建鼠中3只有自发肿瘤发生。结论:本研究成功建立了C57/B6J背景的人类c-Ha-ras转基因小鼠模型。该C57-ras转基因小鼠的制作和用途已申请专利(CN101532018A),这是我国首个以临床前药物致癌性实验为目的的c-Ha-ras转基因小鼠,也是在我国建立符合ICH规范的、拥有自主知识产权的临床前药物安全性致癌评价替代方法体系的基础。
- 周舒雅左琴刘甦苏胡培丽吕建军杨艳伟张頔李保文岳秉飞范昌发
- C57-ras转基因小鼠模型的MNU验证实验被引量：5
- 2013年
- 目的:建立国内用于药物临床前安全评价致癌性实验替代方法的C57-ras转基因小鼠模型,并通过甲基亚硝基脲(Nmethyl-N-nitrosourea,MNU)进行初步验证。方法:C57-ras转基因雄性小鼠与BALB/c雌性小鼠杂交,子代通过PCR进行基因型检测,获得C57-ras转基因和野生型小鼠。实验设定2个剂量,75 mg·kg-1MNU和150 mg·kg-1MNU单次腹腔注射给药,共5个组,其中75 mg·kg-1MNU设3个组:(1)转基因小鼠MNU组;(2)野生型小鼠溶媒组;(3)野生型小鼠MNU组;150 mg·kg-1MNU设2个组:(1)转基因小鼠MNU组;(2)野生型小鼠MNU组。其中溶媒组给予同等体积柠檬酸缓冲液,给药后观察29周,观察动物一般症状、生存率、肿物出现时间及大体剖检观察并进行组织病理学检查。结果:75 mg·kg-1MNU给药组小鼠生存率高于150 mg·kg-1MNU。75 mg·kg-1MNU给药后诱发C57-ras转基因小鼠发生淋巴瘤;150 mg·kg-1MNU给药后诱发C57-ras转基因小鼠发生淋巴瘤、肺脏腺瘤和直肠纤维肉瘤。野生型动物溶媒组和野生型动物MNU组均无肿瘤发生。结论:初步验证了自主建立的C57-ras转基因小鼠模型,该模型是临床前药物安全性评价致癌性实验快速替代实验候选模型之一。
- 吕建军刘甦苏左琴周舒雅杨艳伟张頔汪巨峰范昌发
- 关键词：转基因小鼠甲基亚硝基脲
- RT-PCR和TaqMan一步法检测SCARB2转基因小鼠组织中肠道病毒71型病毒分布
- 目的：比较RT-PCR法和荧光定量PCR法在检测感染肠道病毒EV71的小鼠组织中的分布及含量的优缺点,建立一种可靠的检测方法.
方法：用EV71病毒株Henan1-09-China感染自主构建的SCARB2转基...
- 彭泽旭周舒雅刘甦苏左琴王辰飞李保文刘佐明范昌发
- 关键词：肠道病毒71病毒分布
- 文献传递
- 获能培养液等因素对遗传工程小鼠冻融精子体外受精率的影响被引量：1
- 2015年
- 目的探讨遗传工程小鼠精子冷冻、复苏及体外受精率的效果,建立简便、经济的遗传工程小鼠保种体系。方法采用精子冷冻、体外受精和胚胎移植技术,比较了精子获能培养液、雄鼠周龄及精子冻存液等因素对于遗传工程小鼠精子冷冻保存的影响。结果用CPA精子冻存液冷冻保存精子,精子复苏后用PM精子培养液获能培养,体外受精率在82.49%-91.43%,而HTF精子培养液的体外受精率为14.46%-27.38%,同品系间差异极显著（P〈0.01）;10-35周龄的雄鼠精子均能成功冷冻、受精,移植后产仔;使用R18S3,CPM,CPA三种不同精子冻存液冷冻遗传工程小鼠精子,复苏后采用PM精子培养液体外受精,受精率分别是75.85%、88.89%和94.27%,移植后得到阳性小鼠;体外受精后的胚胎成功冷冻保存,移植后产仔。结论采用CPA精子冻存液冷冻保存精子,精子复苏后用PM精子培养液体外受精,能够更有效地保存遗传工程小鼠。
- 左琴范涛张翠平杨文东王劲松范昌发刘佐民贺争鸣李保文
- 关键词：精子冷冻保存体外受精胚胎移植
- 不同小鼠品系囊胚受体对C57BL/6胚胎干细胞种系嵌合效率的影响被引量：2
- 2015年
- 目的考察不同品系的小鼠囊胚对C57BL/6胚胎干细胞种系嵌合效率的影响,进而提高通过在C57BL/6胚胎干细胞中同源重组制作基因打靶小鼠的效率。方法选取近交系B6(Cg)-Tyrc-2J和BALB/c品系及封闭群ICR作为囊胚供体鼠,通过在TLX3、Ai3K和SL三个不同基因修饰ES细胞的种系嵌合实验中,平行比较三者的囊胚利用率、嵌合鼠获得效率以及种系遗传效率等三个方面,并进一步针对囊胚来源这一因素对效率的影响进行统计学分析。结果三种ES细胞均未能通过B6(Cg)-Tyrc-2J品系囊胚的注射获得种系遗传。而BALB/c品系与ICR品系相比,囊胚利用率明显低于ICR品系(P<0.05);嵌合鼠获得效率方面,BALB/c与ICR相当(P=0.115);而种系遗传效率方面,BALB/c品系显著高于其他品系(P<0.01)。结论 BALB/c品系在C57BL/6胚胎干细胞种系嵌合效率方面确实具有优势,然而,由于BALB/c囊胚较难获得,并且存在发育延迟和透明带脆性高等问题,而ICR品系在囊胚获得和利用方面的效率明显高于BABL/c,并且也可以支持C57BL/6胚胎干细胞的种系遗传,因此也是C57BL/6胚胎干细胞囊胚注射中较好的选择。
- 周舒雅左琴刘甦苏王辰飞李保文贺争鸣范昌发
