小琴
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 供职机构：内蒙古农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学化学工程更多>>
- 乳杆菌重组S-层蛋白的纯化及各型FMDV表位嵌入效果的鉴定
- 口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth DiseaseVirus，FMDV)引起的一种偶蹄动物的急性、热性、高度传染性疾病，一旦暴发之后给畜牧业带来巨大...
- 小琴
- 关键词：口蹄疫重组融合蛋白蛋白鉴定蛋白纯化
- 文献传递
- 2种不同方法纯化乳酸杆菌重组S-层融合蛋白的比较试验
- 2014年
- 将重组菌E.coli BL21(含重组质粒pGEX-SLP)经IPTG诱导获得重组融合蛋白GST-SLP,分别用非特异性的氯化锂沉淀方法和特异性的Pierce GST Spin Purification Kit纯化方法,将该融合蛋白进行纯化,纯化结果采用SDS-PAGE方法进行鉴定。结果显示,2种方法均能够获得大小约为71 ku的目的融合蛋白,但氯化锂沉淀方法纯化效果不及Pierce GST Spin Purification Kit方法。该研究结果为进一步研究乳酸杆菌S-层蛋白生物学特性提供了参考。
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- 关键词：重组菌E.COLIBL21融合蛋白纯化
- 多型FMDV VP1表位融合蛋白SLP-MultiVP1的纯化及鉴定被引量：4
- 2015年
- 口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)主要感染偶蹄兽引起的烈性传染病。本研究对已构建的含有VP1表位肽基因的原核表达载体pGEX-SLP-MultiVP1进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE试验在菌体裂解物中证明了80 000融合蛋白的存在。通过Pierce?GST Spin Purification Kit亲和层析和切胶相结合的方法,成功纯化出融合蛋白GST-SLP-MultiVP1,并用Prescission Protease将该融合蛋白中的GST标签切掉,获得大小为54 000的目的蛋白SLP-MultiVP1,并用Western Blot试验证明了该蛋白与牛A、O、AsiaⅠ型疫苗株阳性血清均有特异性的结合。本试验进一步为口蹄疫VP1表位肽的免疫原性研究奠定了基础。
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- 关键词：口蹄疫融合蛋白纯化
- 嗜酸性乳杆菌MG株S层蛋白的高级结构预测分析及原核表达
- 2013年
- 以嗜酸性乳杆菌MG株slp基因(表达S层蛋白的基因)为材料,应用Genetyx软件推导出其正确的开放阅读框(ORF),并用CPHmodels,Swiss-Model和Swiss-PdbViewer生物软件预测SLP蛋白质的高级结构;此外,构建slp基因的原核表达载体pGEX-slp,经IPTG诱导后,成功表达出重组S层蛋白(S-layer protein,SLP),并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果表明,使用3种不同的软件预测SLP蛋白质的高级结构,预测结果具有很高的相似性,其中α螺旋占3.33%,线性结构占45%,无规则卷曲占51.67%,平均亲水值为-0.262,亲水氨基酸比例为59.1%;表达载体pGEX-slp在E.coli BL21中经IPTG诱导成功表达出重组SLP蛋白,其GST融合蛋白的大小约为70ku。本研究结果为进一步以SLP为材料的生物制品的制备和应用开发奠定了基础。
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- 关键词：原核表达
- 各型FMDV VP1基因表位嵌入型蛋白SLP-MultiVP1对免疫不同小鼠血清IgG亚型的影响被引量：1
- 2017年
- 利用通过Swiss-Model在线软件分析所得的乳杆菌S-层蛋白高级结构3D模拟图,应用Swiss-Pbd Viewer软件对嵌入型蛋白SLP-MultiVP1中的3型口蹄疫病毒(FMDV)不同表位位点进行标注,并用嵌入型蛋白SLP-MultiVP1和重组蛋白SLP分别免疫6周龄的BALB/c和昆明小鼠,分离3次免疫后的血清,用Mouse IgG1Ready-SET-Go和Mouse IgG2aReady-SET-Go ELISA试剂盒检测血清中IgG抗体亚型IgG1和IgG2a。通过SPSS统计学分析发现:嵌入型蛋白SLP-MultiVP1组IgG1和IgG2a水平显著高于SLP组(P<0.05),其中嵌入型蛋白SLP-MultiVP1免疫组的IgG2a显著高于IgG1(P<0.05),但是BALB/c和昆明小鼠之间无显著性差异(P>0.05)。该结果提示,嵌入型蛋白SLP-MultiVP1可能倾向于激发Th1类细胞介导的免疫应答,而且无个体差异。
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- 关键词：抗体亚型表位疫苗
- 短小乳杆菌重组S-层蛋白质的纯化及其体外黏附性的初步鉴定
- 2013年
- 以本实验室已构建的pMD19T-slp为模板,应用PCR方法亚克隆slp基因,将其定点插入到原核表达载体pGEX-4T-3中,成功构建原核表达载体pGEX-slp,经IPTG诱导获得重组融合蛋白GST-SLP并用LiCl的方法进行纯化。应用SDS-PAGE和Western blot方法对表达产物进行鉴定,应用ELISA方法鉴定重组融合蛋白的体外黏附特性。在大肠埃希菌裂解样品中,SDS-PAGE和Western blot结果均证明分子质量大小约为71ku的重组融合蛋白GST-SLP的存在;ELISA结果提示,该重组融合蛋白在体外能够有效地黏附在乳酸乳球菌NZ9000表面。本试验为S-层蛋白质生物学特性的进一步研究奠定了基础。
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- 关键词：纯化体外
