宗凌
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
- 供职机构：中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 羊水干细胞拟胚体与耳蜗基底膜共培养向神经元分化的可行性被引量：3
- 2019年
- 目的探讨人来源的羊水干细胞以拟胚体样结构与小鼠耳蜗基底膜组织共培养,分化为神经元的可行性。方法分离培养人来源的羊水干细胞,悬滴法培养,观察羊水干细胞拟胚体形成情况;免疫荧光检测拟胚体细胞干性标记物的表达;将拟胚体与小鼠基底膜组织共培养,不添加神经生长因子及神经元信号诱导因子,观察拟胚体向神经元分化情况。结果羊水干细胞经悬滴培养可形成拟胚体样结构,表达神经干细胞标记物Sox2、Nestin;与小鼠耳蜗基底膜组织共培养,拟胚体细胞有神经元标记物Tuj1表达,但无神经元形态特征。结论羊水干细胞体外悬滴后可形成形态均一且具有神经干性的拟胚体,与耳蜗基底膜组织共培养,不能诱导拟胚体细胞向形态典型的神经元分化。
- 宗凌宗凌
- 关键词：拟胚体神经元分化
- 焦磷酸测序技术在遗传性聋基因筛查中的应用被引量：1
- 2012年
- 目的研究焦磷酸测序(Pyrosequencing)单样本及多样本混合测序方法在遗传性聋基因筛查中的可行性及适用性。方法利用焦磷酸测序遗传分析检测系统,选择遗传性聋常见突变位点SLC26A4IVS7-2A>G及少见的突变位点GJB3 538C>T、547G>A,分别对100例经过Sanger测序法验证的遗传性聋病例DNA样本进行单个样本和多样本混合的位点突变频率定量,分析两种方法的相关性,并进一步制定针对耳聋常见突变位点的焦磷酸测序技术筛查的标准曲线。结果焦磷酸测序技术SNP与Sanger测序法结果一致(N=100),准确率为100%。焦磷酸测序技术对SLC26A4IVS7-2A位点突变位点频率相对荧光比值与实际基因突变频率(Sanger测序法)存在线性相关(r=0.994,P<0.01),实际突变频率x与相对荧光比值y的线性关系为y=6.984+0.861x。焦磷酸测序技术DNA池的相对荧光比值的均值与对应DNA池中样本的个体相对荧光比值的平均值存在线性相关(r=0.892,P<0.01),实际突变率y与DNA池突变率x的线性关系为y=-0.003+0.801x。同时,焦磷酸测序技术对突变频率低的GJB3 538C>T、547G>A突变位点的频率定量分析显示,混合样本的筛查突变率和实际突变率较一致(实际突变率均数与定量值差异95%CI范围为-3.07%～-1.35%)。结论焦磷酸测序技术单样本及多样本混合测序方法在遗传性聋基因筛查中具有可行性,适用于进一步开展耳聋相关基因的大规模筛查研究。
- 陈垲钿宗凌杜进涛周蔚姜鸿彦
- 关键词：焦磷酸测序遗传性聋SLC26A4GJB3
- VEGF抗体抑制磨损颗粒诱导骨溶解的实验研究被引量：6
- 2012年
- 目的通过观察局部注射VEGF及VEGF抗体对小鼠植骨气囊模型中磨损颗粒诱导骨溶解的影响,探讨VEGF在人工关节无菌性松动中的作用。方法取人工髋关节翻修术取出的金属关节假体柄,参照真空球磨法体外制备磨损颗粒,PBS配制成浓度为10 mg/mL颗粒悬液。取8～10周龄雌性昆明小鼠50只,体重约25 g。10只作为气囊植骨模型颅骨供体。剩余40只小鼠随机分为4组(n=10),分别为空白对照组(A组)、颗粒组(B组)、VEGF刺激组(C组)和VEGF抑制组(D组);小鼠背部皮下注射无菌空气制备气囊,第8天切开气囊植入颅骨骨片,制备植骨气囊模型。于植骨后第1天B、C、D组气囊内注入0.5 mL颗粒悬液,A组注入0.5 mL PBS。气囊制备期间第6、7天及植骨后隔天,C、D组气囊内分别注射0.2 mL重组人VEGF和Bevacizumab溶液,A、B组注射0.2 mL生理盐水。植骨2周后取囊壁连同骨片行HE染色、实时荧光定量PCR及ELISA检测。结果各组小鼠均存活至实验完成。大体观察见A组气囊红肿程度轻,新生血管少;B、C、D组气囊明显红肿,可见较多渗出及新生血管,其中C组最重,B组次之,D组介于A、B组间。组织学及分子生物学检测发现,B组囊壁明显炎性反应及骨溶解,囊壁厚度、细胞密度及TNF-α、IL-1β、VEGF表达均较A组明显增加(P<0.05);C组囊壁炎性反应及骨溶解最显著,以上观察指标均高于B组(P<0.05);D组囊壁亦可见炎性反应及骨溶解,但以上指标均低于B组(P<0.05),高于A组(P<0.05)。结论 VEGF在人工关节无菌性松动中具有促进炎性反应及骨溶解作用,局部给予VEGF抗体可抑制磨损颗粒诱导的骨溶解。
- 戴闽钟艳春宗凌杨小刚程明杨康骅
- 关键词：人工关节无菌性松动VEGFVEGF抗体骨溶解
- 小鼠前庭支持细胞诱导人羊水干细胞定向分化为功能性神经元的初步研究被引量：1
- 2020年
- 目的探讨通过支持接触共培养模式,小鼠前庭支持细胞体外诱导人羊水干细胞向功能性神经元分化的可行性。方法分离培养人来源的羊水干细胞。从新生C57BL/6J小鼠获取内耳前庭组织,经酶解消化、细胞培养,选取其空心球体,制备单细胞饲养层。将标记慢病毒载体介导产生绿色荧光蛋白nGFP的羊水干细胞种植在饲养层表面,形成支持接触共培养,期间不添加任何外源性神经生长因子及神经元信号诱导因子。检测分化后的羊水干细胞中神经元标记物β微管蛋白(β-Tubulin,Tuj1)、突触后致密蛋白PSD95的表达;标记功能性突触小泡技术(FM1-43穿透)检测分化后细胞是否具有神经元离子通道。同时观察羊水干细胞单独分化、小鼠前庭支持细胞单独分化、Transwell共培养体系中羊水干细胞和饲养层细胞神经元的分化情况。结果单细胞饲养层表达内耳支持细胞特异性标记物细胞周期蛋白激酶抑制因子P27kip1。nGFP标记过的羊水干细胞接种于饲养层后,nGFP表达阳性的部位有(52.0±3.0)%的细胞表达Tuj1,并具有典型的神经元形态特征,突起长度平均(110.7±6.2)μm。饲养层细胞单独分化,仅有(1.1±0.6)%的细胞表达Tuj1阳性且形态典型的神经元;羊水干细胞单独分化,(92.0±1.0)%的细胞表达神经元标记物Tuj1,但无典型的神经元形态特征,突起长度平均(16.0±4.1)μm。将羊水干细胞与饲养层在Transwell中共培养,虽然(92.0±1.0)%的羊水干细胞表达Tuj1,但仍无典型的神经元形态特征,突起长度平均(17.0±4.5)μm,饲养层仅有(1.2±0.9)%的细胞Tuj1表达阳性且具有典型的神经元形态。结论通过支持接触共培养模式,由小鼠前庭来源的内耳支持细胞制备的饲养层,可成功将人羊水干细胞定向诱导分化为功能性神经元。
- 宗凌宗凌
- 关键词：干细胞羊水细胞分化
- 耳聋基因靶向测序技术发现国人新发MYO7A基因复合杂合突变
- 目的 遗传性耳聋涉及的基因众多，其中大部分为罕见基因，不在临床常规耳聋基因检测范围。因此，目前临床的耳聋基因筛查，包括Sanger测序，难以发现这些基因。对于携带罕见基因突变的病例，现阶段仍存在局限性。在这项研究中，我们...
- 陈垲钿宗凌刘敏吴旋姜鸿彦
- 关键词：耳聋
- 200例非综合征型聋患者GJB3和GJB6基因突变分析被引量：6
- 2012年
- 目的研究广东、湖南和广西三省非综合征型聋患者GJB3和GJB6基因突变的特征。方法选择200例来自广东、湖南和广西三省的非综合征型聋患者,提取外周血DNA,PCR扩增后,进行GJB3、GJB6基因编码区测序和GJB6大片段缺失del(GJB6-D13S1830)及del(GJB6-D13S1854)突变检测。结果 200例患者中发现GJB3 580G>A杂合突变2例,其中1例为GJB2 109G>A和GJB3 580G>A复合杂合突变,250G>A杂合突变1例,474G>A杂合突变1例,357C>T杂合突变35例,纯合突变1例,474G>A为首次发现。GJB3等位基因突变频率为1%(4/400)。未发现GJB6基因突变。结论本组广东、湖南和广西三省非综合征型聋患者GJB3基因等位基因突变率为1%;GJB6基因突变致聋罕见。
- 陈垲钿宗凌周蔚刘敏姜鸿彦
- 关键词：GJB3
- 羊水干细胞定向及稳定分化为神经元样细胞体系的建立被引量：2
- 2020年
- 背景:利用干细胞分化代替受损神经元的设想,已经逐渐受到科研工作者的关注。胚胎干细胞和诱导性多能干细胞虽然具有良好的神经元分化潜能,但由于接种活体动物具有致瘤性,限制了其进一步的深入研究。目的:建立稳定的羊水干细胞分选、培养、成神经诱导分化体系,探讨其作为神经元再生种子细胞的可行性。方法:经B超引导下,穿刺获取孕19-22周期间的羊水样本10 mL,磁珠分选其中c-Kit阳性的羊水干细胞。免疫荧光染色鉴定羊水干细胞标记物Oct-4、Sox2;RT-PCR检测羊水干细胞多次传代后干性标记物c-Kit、Oct-4、Sox2、Nestin的表达;羊水干细胞悬滴培养4 d观察拟胚体的形成情况;采用"两阶段"分步诱导羊水干细胞向神经元方向分化,免疫荧光染色观察Neuro D、Tuj1的表达。结果与结论:①羊水中可分选出大约1%的c-Kit阳性羊水干细胞;②(75.0±4.6)%的羊水干细胞表达Oct-4,(86.0±2.8)%的羊水干细胞表达Sox2;③RT-PCR方法检测干性标记物c-Kit、Oct-4、Sox2、Nestin的表达量并不随细胞传代数的增加而改变;④经悬滴培养可形成拟胚体并表达Oct-4;⑤免疫荧光证实未经诱导的羊水干细胞表达神经元标记物Tuj1,但缺乏典型的神经元形态特征;RT-PCR证实不同羊水干细胞标本都能检测到Tuj1的表达,同一样本多次传代也能稳定检测到Tuj1的表达;⑥羊水干细胞经碱性成纤维细胞生长因子、脑源性神经营养因子、神经营养因子3的两阶段分步诱导后表达神经干细胞标记物Neuro D和神经元标记物Tuj1,具有神经元样细胞的形态特征。
- 宗凌宗凌陈观贵张兰珍翟锦明龙艳波
- 关键词：拟胚体神经元分化神经营养因子
