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猪MAPK12基因cDNA的克隆及序列分析被引量：1: 2006年; 目的克隆新的猪MAPK12基因全长ORF,分析其生物特性,为进一步研究该酶的功能提供信息资料。方法:以已报道的人及小鼠MAPK12基因cDNA序列为依据,利用电脑克隆策略获得的ESTs设计引物,RT-PCR技术扩增新的猪MAPK12基因ORF序列,将PCR产物直接进行序列测定。分析此蛋白的特性并预测其结构。结果分离的ORF全长1101bp,编码367个氨基酸,与人鼠氨基酸序列92%同源;利用生物信息学软件分析出此蛋白的理化特性并预测了其一级、二级和高级结构。结论研究分离的基因片段可命名为猪ERK6,通过分析,获取了该酶的基本信息特征,并与现有的报道结果进行对比分析,为进一步开展猪MAPK12基因的结构功能、表达调控的相关研究奠定了基础。; 曾瑞霞苏玉虹巴彩凤朱宝芹宋慧娟刘东鑫; 关键词：ORF

猪CFL2b基因cDNA克隆初步分析被引量：4: 2009年; 利用基因表达谱芯片分析法筛选出与大白猪高肌肉产量-肌纤维形成有关的CFL2b基因.参考人和小鼠CFL2b基因序列,采用SMART-RACE技术结合EST序列拼接技术,从猪骨骼肌肌肉中首次克隆了猪CFL2b的全长cDNA序列(GenBank登录号EU561660,EU561661),Northern杂交检测CFL2b基因mRNA.结果表明,猪CFL2b基因含有2个转录本,长转录本3012bp,短转录本1466bp.CFL2b基因在多种真核生物中都有表达,且编码区序列非常保守,开放式读码框501bp编码了166个氨基酸的蛋白质.氨基酸序列分析表明,猪CFL2b基因与人和小鼠氨基酸同源性分别为100%和99.1%.核苷酸序列相似性分别为88.1%和74.9%.; 赵微曾瑞霞巴彩凤宋慧娟苏玉虹; 关键词：CDNA SMART RACE NORTHERN杂交

肝细胞生长因子对肝细胞癌细胞系SMMC-7721黏着斑激酶的影响被引量：2: 2009年; 目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对黏着斑激酶(FAK)、Src表达及活性的影响以及PI3K在该过程中的作用.方法:LY294002预处理阻断PI3K的活性、HGF处理SMMC-7721后检测FAK和Src的表达、磷酸化及在细胞内的分布.应用免疫印迹技术检测FAK、Src的表达及磷酸化,免疫荧光技术检测FAK在SMMC-7721细胞中的分布.结果:HGF(50μg/L)可以促进FAKY397位点的磷酸化,对FAK的表达没有影响.应用PI3K抑制物LY294002处理后,FAKY397的磷酸化水平显著降低.HGF处理后,FAK主要位于细胞边缘,呈簇状分布,应用PI3K抑制物,FAK在细胞内弥散分布.HGF处理后,Src激酶和SrcY416的磷酸化水平明显增加,而经LY294002处理后,Src激酶与SrcY416的磷酸化水平明显降低.结论:肝细胞癌中,HGF以PI3K依赖性的方式促进FAK和Src的活化.; 苏荣健李贞李宏丹宋慧娟程留芳; 关键词：肝细胞癌肝细胞生长因子黏着斑激酶 PI3K

犬黑皮质素受体4真核表达载体的构建及表达被引量：3: 2008年; [目的]构建带myc和His标签的犬黑皮质素受体4真核表达载体并在MDCK细胞中进行表达。[方法]以犬MC4R基因组DNA为模板PCR扩增目的基因编码区,将扩增产物进行T-A克隆;酶切、测序鉴定成功后将目的基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A。重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R经酶切和测序鉴定;采用FuGENE HD介导转染技术将重组体导入MDCK细胞;转染后继续培养72 h,提取细胞内总RNA,RT-PCR鉴定目的基因的表达;提取细胞总蛋白,Western Blot检测蛋白表达。[结果]构建带标签的pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R重组真核表达载体,测序结果与GenBank公布的序列相似性为99%。RT-PCR和Western Blot检测到目的基因表达。[结论]成功构建犬真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R,重组体能在MDCK细胞中表达。; 王光川巴彩凤苏荣健张轶博赵微宋慧娟武洁; 关键词：真核表达载体 MDCK细胞

猪新基因CFL2真核表达载体的构建及在C2C12细胞中的瞬时表达被引量：1: 2008年; 从猪的股二头肌中提取总RNA,利用RT-PCR技术从猪骨骼肌中获得CFL2基因的编码区序列,T-A克隆至PMD-18T载体,经HindⅢ和XhoⅠ酶切后定向克隆至真核表达载体pCDNA3.1(+)中。获得的重组质粒pCDNA3.1(+)/CFL2用限制性内切酶酶切分析和DNA测序分析鉴定,并经脂质体瞬时转染C2C12细胞,最后利用PCR检测转基因细胞中CFL2基因的存在及其表达情况。结果显示:猪CFL2基因已克隆到真核表达载体pCDNA3.1(+)中,转染的C2C12细胞中检测到细胞内较高量CFL2的表达。pCDNA3.1(+)/CFL2真核表达载体的成功构建,为深入研究CFL2基因在猪肌肉细胞中的功能奠定基础,为猪肉质品质的改良提供了新的思路。; 赵微苏玉虹巴彩凤苏荣健宋慧娟; 关键词：真核表达载体 PCDNA3.1(+)C2C12

西藏藏族人群白细胞介素1β基因-511C／T多态性被引量：1: 2014年; 目的：研究白细胞介素1β（IL-1β）启动子-511位点C／T单核苷酸多态性（SNP）在西藏藏族健康人群中的分布特点。方法：采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法，对144名西藏拉萨市藏族人群IL-1β-511位点SNP进行检测，计算其基因型频率和等位基因频率。结果：西藏拉萨市藏族人群IL-1β-511点基因型以CT杂合子型最为多见（52．72％），TT纯合子型次之（36．11％），CC纯合子型较少（11．11％）；其等位基因分布也是以T等位基因最为多见（62．50％），其次为C等位基因（37．50％）。西藏藏族人群的等位基因频率分布与奥地利人、非洲黑人、非洲白人、日本人差异均有统计学意义。结论：西藏拉萨市藏族人群中IL-1^-511位点基因型以CT和TT型为主，等位基因以T为主，其SNP分布与其他种族之间存在差异。; 李文娜李克研宋慧娟苏荣健温有峰任甫李宁; 关键词：白细胞介素多态性

葡萄糖调节蛋白78反义核酸对HEK293细胞粘附和迁移的影响被引量：2: 2009年; 为了研究葡萄糖调节蛋白78(Grp78)对细胞迁移和粘附的影响,应用Grp78反义寡核苷酸(Grp78AS-ODN)处理人胚肾细胞HEK293,对细胞的迁移和粘附特性进行分析。结果发现应用Grp78反义核酸处理细胞可以抑制HEK293细胞的迁移,促进细胞与底物间的粘附。进一步研究发现,应用Grp78反义核酸处理细胞可以促进粘着斑的形成,并引起小GTPaseRhoA在细胞膜和细胞浆中的重新分布。上述结果表明,特异性下调Grp78的表达可以抑制细胞迁移,促进细胞与底物间的粘附。; 苏荣健李宏丹宋慧娟魏嘉; 关键词：葡萄糖调节蛋白78 HEK293 细胞粘附

特异性下调葡萄糖调节蛋白78对肝细胞癌粘附特性和细胞外基质降解的影响被引量：2: 2009年; 我们以前的研究表明特异性下调葡萄糖调节蛋白78(Grp78)可以抑制肝细胞癌细胞系BEL7402的侵袭和转移。为了进一步研究该抑制作用的分子机制,我们应用小干扰RNA(siRNA)技术特异性下调肝细胞癌细胞系BEL7402中Grp78的表达,并对细胞的粘附、伸展和细胞外基质降解情况进行研究,结果发现特异性下调Grp78可以促进细胞与细胞外基质的粘附,抑制细胞伸展。我们的研究还显示特异性下调Grp78的表达可以抑制基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的表达及分泌,这些说明特异性下调Grp78可以抑制细胞外基质的降解。对机制的研究发现特异性下调Grp78表达可以抑制c-jun的磷酸化。这些结果表明特异性下调Grp78可以抑制肝细胞癌细胞系BEL7402的侵袭和转移,这种抑制作用可能是通过促进细胞与细胞外基质的粘附,抑制细胞伸展和细胞外基质的降解实现的。; 苏荣健李贞李宏丹宋慧娟程留芳; 关键词：葡萄糖调节蛋白78 肝细胞癌细胞粘附细胞外基质降解

大鼠脂肪干细胞体外诱导分化为胰岛样细胞被引量：1: 2011年; 目的：探索大鼠脂肪干细胞（ADSCs）向胰岛样细胞诱导分化的诱导方案。方法：取SD大鼠腹股沟区脂肪组织，酶消化法分离培养ADSCs，观察细胞形态，流式细胞仪检测表面抗原；应用4种方案［NA、 NG、 AG、 NAG， N：尼克酰胺；A：活化素A； G：胰高血糖素样肽-1 （GLP-1）］进行诱导，观察形态变化，ELISA法检测胰岛素及C肽分泌量，行双硫腙染色，RT-PCR检测胰岛β细胞相关基因。结果：ADSCs长梭形，CD44高表达，CD49d低表达，CD31、 CD106阴性；诱导7d细胞突起变短呈鹅卵石样，14d AG、 NAG组细胞近圆形，折光性增强，21d NAG组出现明显的胰岛样细胞团。ELISA显示21d NAG组胰岛素及C肽释放量明显高于其他组。双硫腙染色21d NAG组细胞团呈砖红色阳性表达。RT-PCR 14d仅AG和NAG组检测到胰十二指肠同源盒-1基因（PDX1）， 21d AG和NAG组均可检测到葡萄糖转运蛋白2（GLUT2）、 insulin 2、 insulin 1、 PDX1，但表达水平有差异，NAG组接近正常鼠胰岛β细胞，明显高于AG组。结论：ADSCs具有干细胞特性，在NAG诱导条件下可分化为有功能的胰岛样细胞。; 房艳刘雷宋慧娟单伟曾瑞霞李德华; 关键词：脂肪干细胞分化胰岛样细胞

人葡萄糖调节蛋白78基因磷酸化位点的真核突变载体的构建及表达: 2014年; 目的构建人葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)基因编码区磷酸化位点的真核突变载体,并在肝癌SMMC-7721细胞中进行表达。方法利用定点诱变技术将GRP78基因的两个磷酸化位点进行突变,即203位苏氨酸(T)用丙氨酸(A)替换,466位酪氨酸(Y)用苯丙氨酸(F)替换,以质粒pEGFP-N1-GRP78为模板,进行PCR扩增后,构建突变质粒pEGFP-N1-GRP78(T203A)、pEGFP-N1-GRP78(Y466F)和pEGFP-N1-GRP78(T203A/Y466F),并进行DNA测序分析。将测序正确的突变质粒转染肝癌SMMC-7721细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,Western blot法检测融合蛋白在细胞中的表达。结果突变质粒pEGFP-N1-GRP78(T203A)、pEGFP-N1-GRP78(Y466F)和pEGFP-N1-GRP78(T203A/Y466F)经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;突变质粒组荧光蛋白表达分布于细胞质内,细胞核内无表达产物分布;3个突变质粒转染组在相对分子质量约105 000处均可见目的蛋白条带,大小与预期相符。结论成功构建了人GRP78单突变T203A、Y466F和双突变T203A/Y466F真核表达载体,并可在肝癌SMMC-7721细胞中表达,为进一步研究GRP78基因磷酸化位点T203、Y466在肝肿瘤侵袭和转移中的作用奠定了基础。; 宋慧娟赵颂苏荣健; 关键词：葡萄糖调节蛋白78 磷酸化位点定点诱变真核细胞基因表达

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宋慧娟

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