宋勤叶
- 作品数：138 被引量：352H指数：11
- 供职机构：河北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河北省科技计划项目河北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学文化科学更多>>
- 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
- 2023年
- 【目的】制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p30蛋白单克隆抗体,为ASFV检测方法的研究提供重要试验材料。【方法】应用大肠杆菌表达重组ASFV p30蛋白,并用该蛋白免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠,应用细胞融合技术将免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合;通过间接ELISA方法筛选分泌p30蛋白特异性抗体的阳性杂交瘤细胞,腹腔接种小鼠制备腹水抗体;应用ELISA方法鉴定单克隆抗体的类/亚类,通过Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定单克隆抗体与p30-N端(1―105位氨基酸)和p30-C端(100―194位氨基酸)区域的反应活性;针对抗体识别的p30蛋白区域合成不同肽段,通过ELISA和斑点免疫印迹法鉴定抗体识别的抗原表位。应用间接ELISA方法分析单克隆抗体与ASFV p72蛋白、猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳(Cap)蛋白、猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白的交叉反应性,以及ASFV抗血清对单克隆抗体抗原结合活性的阻断作用。【结果】获得了2株杂交瘤细胞(C7和G10),其分泌的单克隆抗体(C7和G10)都属于IgG1亚类和κ型(IgG1κ),杂交瘤细胞培养上清和腹水内C7和G10的抗体效价分别为1∶1280、1∶640与1∶10^(7)、1∶10^(6);2株抗体均与p30-C端(100―194位氨基酸)区域特异性结合,并识别同一个抗原表位115 CTSSFETLFEQEPSSEVPKD^(134);2株抗体与ASFV p72蛋白、PCV2 Cap蛋白及PEDV S蛋白无交叉反应;ASFV抗血清能有效阻断2株单克隆抗体与p30蛋白结合。【结论】获得2株分泌p30单克隆抗体的杂交瘤细胞株,鉴定了单克隆抗体的抗原识别表位,丰富了p30蛋白的抗原表位信息,为ASFV致病机制的进一步研究提供支撑。
- 马天天张亚楠冯亚文岳怀宁王亚文苏恺袁晨逯纪成孙泰然薛文阁宋勤叶
- 关键词：单克隆抗体表位
- 猪圆环病毒2型引起猪免疫功能紊乱的分子基础
- 宋勤叶李焕荣周双海陈立
- 该项目属于畜牧、兽医科学学科领域（230）家畜传染病学和兽医免疫学研究方向。猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2, PCV2)引起的猪圆环病毒病严重威胁着全球生猪产业的健康发展。该病毒广泛调...
- 关键词：
- 关键词：家畜传染病学
- 猪流行性腹泻病毒HBMC2012株的分离鉴定及其致病性研究被引量：9
- 2016年
- 为从腹泻仔猪肠道内分离鉴定猪流行性腹泻病毒(PEDV)并明确其致病性,本文研究应用Vero-81细胞从腹泻仔猪小肠及其内容物中分离鉴定了一株PEDV(HBMC2012株),分析了其遗传变异特征,并将该病毒分离株经口腔感染5头3 d健康初生仔猪,观察其临床表现和病理变化,检测病毒在组织中的分布,分析病毒血症和经粪便排毒的动态。结果显示,分离的PEDV HBMC2012株可以引起明显的细胞病变,与目前国内及美国流行的PEDV株同源性高,与2010年之前的国内流行PEDV株、欧洲株CV777和韩国株DR13同源性低。该病毒株可以导致仔猪出现PED典型的临床症状与病理变化,病毒主要分布于空肠后端、回肠和十二指肠黏膜上皮细胞内,病毒血症和粪便排毒至少持续14 d。该研究结果为PEDV的致病机制和弱毒疫苗研究奠定了基础。
- 朱卫霞郭海勇陈立功李艳琴宋勤叶李潭清赵丹萍
- 关键词：猪流行性腹泻病毒遗传进化分析初生仔猪
- 牦牛大肠埃希氏菌的肠毒素试验被引量：16
- 2001年
- 从自然病死牦牛体内分离出 3株大肠埃希氏 ,用改良Mundell产毒液体培养基分别培养 ,培养物经高速离心 ,过滤 ,使用滤液做兔回肠结扎试验 ,乳鼠灌胃试验和大鼠回肠环袢试验。结果表明 3株大肠埃希氏菌均产生肠毒素 ,阐明了牦牛腹泻的病因。
- 曾群辉陈明勇张冰宋勤叶武洁梅
- 关键词：牦牛肠毒素
- 脑心肌炎病毒先导蛋白结构与功能研究进展被引量：1
- 2019年
- 脑心肌炎病毒(EMCV)可感染人和多种动物,其基因组先导蛋白编码区是比较保守的区域之一,含有两种高度保守的功能域,即锌指基序和酸性结构域。研究表明,先导蛋白基因组具有一定的容纳外源基因片段的能力,同时先导蛋白与病毒复制、干扰素产生以及细胞凋亡等均有关系。论文综述了EMCV先导蛋白结构与功能的研究进展。
- 李睿文王许航李丽敏李丽敏宋勤叶孙继国
- 关键词：脑心肌炎病毒
- 莱芜猪和杜长大猪盲肠和结肠微生物菌群结构组成和功能分析
- 2023年
- 旨在研究莱芜猪盲肠和结肠肠道微生物群落的结构组成、功能以及与杜长大猪的区别,为从肠道菌群层面深入理解莱芜猪高脂肪沉积、耐粗饲和抗逆等特性奠定基础。以12头莱芜猪和6头杜长大猪为试验动物,采用高通量测序技术测定盲肠和结肠微生物菌群16S rRNA V3-V4区序列,分析微生物菌群的组成、丰度和多样性,预测生物功能,通过对莱芜猪和杜长大猪菌群丰度比较分析、LEfSe物种差异判别分析、微生物菌属与背膘厚和血清生化指标相关性分析,鉴定影响莱芜猪品种特性的微生物菌属。结果发现:1)莱芜猪的背膘厚和血清总蛋白、甘油三酯、葡萄糖、高密度脂蛋白胆固醇等指标与杜长大猪存在显著性差异(P<0.05)。2)莱芜猪具有与杜长大猪不同的盲肠和结肠微生物菌群多样性和相对丰度,莱芜猪盲肠微生物菌群的Simpson指数显著高于杜长大猪(P<0.05),盲肠的厚壁菌门(Firmicutes)的相对丰度显著低于杜长大猪(69.16%vs.89.59%,P<0.05)。3)盲肠和结肠中一些微生物菌属的丰度与背膘厚和部分血清生化指标具有显著相关性(P<0.05),且与这些表型指标相关的盲肠微生物菌属比结肠更多,相关系数也更高,表明盲肠微生物菌群对猪的表型起到了更大的作用。4)甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)、梭杆菌属(Fusobacterium)和大肠杆菌-志贺菌属(Escherichia-Shigella)、活泼瘤胃球菌([Ruminococcus]_gnavus_group)、拟杆菌属(Bacteroides)等与脂肪沉积、耐粗饲和抗逆性强等有关,可能是影响莱芜猪特性的微生物菌属。本研究阐述了莱芜猪和杜长大猪盲肠和结肠微生物菌群特征,加深了肠道菌群对莱芜猪品种特性影响机理的了解,为地方猪肠道微生物资源的开发与利用奠定基础。
- 李超赵雪艳赵雪艳王彦平任一帆王彦平王怀中王继英宋勤叶
- 关键词：莱芜猪微生物菌群盲肠结肠
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白抗体检测间接ELISA方法的建立与应用
- 引言猪圆环病毒2型(PCV2)引起的猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)及猪皮炎肾病综合征、猪呼吸道综合征、母猪繁殖障碍等相关疾病,是危害当今养猪生产的重要免疫抑制性传染病。猪群中PCV2感染普遍,感染率可高达80%以上...
- 魏艳秋李丽敏孙泰然宋勤叶逯继成李潭清张义明
- 核酸疫苗研究进展被引量：17
- 2004年
- 核酸疫苗 (DNA疫苗 )是 2 0世纪 90年代诞生的一种新型疫苗 ,具有能够激发机体全面免疫反应、不散毒、便于储存和运输等优点。抗原递呈细胞在 DNA疫苗诱导产生的 CTL反应中起主导作用。 DNA疫苗的运输载体 (脂质体、减毒突变的胞内菌等 )、佐剂 (细胞因子等 )以及疫苗接种方法和途径等因素可以提高和改变 DNA疫苗的免疫效果与反应类型。 DNA疫苗自诞生以来 ,其安全性一直是人们关心的问题 ,也是 DNA疫苗得以日后应用于临床的关键。
- 宋勤叶杨汉春
- 关键词：核酸疫苗免疫机制接种方法免疫效果
- 猪流行性腹泻病毒血清IgA抗体间接ELISA方法的建立被引量：11
- 2019年
- 建立了检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)IgA抗体的间接ELISA方法,旨在为PEDV感染检测与免疫效果评价提供技术手段。以重组PEDV结构蛋白(S1蛋白)作为包被抗原,采用方阵滴定法确定抗原包被浓度、封闭液、稀释液以及待测血清和酶标抗体的最佳工作浓度,建立了PEDV IgA抗体检测间接ELISA方法。进而检测方法的特异性、批内与批间重复性,评价建立方法与国外试剂盒的符合率,分析ELISA检测血清特异性IgA抗体水平与中和抗体的相关性。结果显示,ELISA方法的最佳抗原包被浓度为1 mg/L,封闭液和抗体稀释液为含5%犊牛血清的PBS,待检血清和酶标抗体的工作浓度分别为1∶40与1∶1 500倍稀释。结果表明,该ELISA能够特异地检测PEDV抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型等病毒的抗血清无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数低于10%,与现有试剂盒的总符合率为94.8%,血清特异性IgA抗体水平与中和抗体呈正相关(r=0.69,P<0.001)。
- 孙立旦陈立功周双海李艳琴郭海勇李潭清宋勤叶
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S1蛋白间接ELISAIGA中和抗体
- 猪细胞因子被引量：11
- 2005年
- 宋勤叶郭鑫杨汉春
- 关键词：细胞因子天然免疫淋巴细胞炎性细胞
