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肝细胞癌高表达基因TPT1真核报告表达载体的构建及鉴定被引量：2: 2005年; 目的构建TPT1真核报告表达载体pEGFPN3TPT1,为进一步研究其功能奠定基础。方法通过PCR和酶切的方法获取具有黏性末端的TPT1基因的全长开放读码框,将其定向连入真核表达载体pEGFPN3绿色荧光报告基因的氨基侧,构成pEGFPN3TPT1的真核报告表达载体,通过酶切和测序鉴定TPT1的正确插入。结果酶切和测序均证实TPT1正确插入了真核报告表达载体pEGFPN3TPT1中。结论成功构建了TPT1的真核报告表达载体pEGFPN3TPT1。; 高天慧段芳龄马军周云孙嫣孙艳王晓薛乐勋; 关键词：高表达基因肝细胞癌真核表达载体开放读码框报告基因

TPT1真核表达载体的构建及在肝癌细胞系SMMC-7721中的表达被引量：1: 2005年; 目的:构建TPT1真核表达载体,并转染肝癌细胞系SMMC-7721,为进一步研究奠定基础。方法:通过PCR的方法在TPT1 ORF(open read ing fram e,开放读码框)两侧添加EcoR I和BamH I的识别序列,将其定向插入真核报告表达载体pEGFP-N3中,构成pEGFP-N3TPT1重构体,卡那霉素筛选阳性克隆,碱裂解法抽提质粒,Sanger法测序,VecScreen和BLAST分析测序结果,lipofectAM INE转染肝癌细胞系SMMC-7721,荧光显微镜及RT-PCR方法检测表达效率。结果:成功扩增了带有特异性核酸内切酶识别位点的TPT1 ORF片段,双酶切后连入pEGFP-N3,测序结果证明TPT1正确插入pEGFP-N3中,转导SMMC-7721后,在荧光显微镜下,可见细胞发出明亮的绿色荧光,转染效率在30%左右。RT-PCR分析显示,pEGFP-N3TPT1转导的细胞,TPT1mRNA水平较对照高0.78倍(P<0.05)。结论:成功构建了TPT1的真核报告表达载体pEGFP-N3TPT1,pEGFP-N3TPT1可在SMMC-7721细胞内高效表达。; 高天慧段芳龄周云孙艳孙嫣王晓; 关键词：肝细胞癌真核表达

成人急性腹泻被引量：4: 2003年; 一、定义急性腹泻:排出大量稀便,持续不超过14天。二、发病机制引起急性腹泻的病因主要有以下几种:细菌、病毒、寄生虫以及非感染性疾病。通常认为腹泻是粪便中的水和电解质增加,以至于形成多次不成形粪便。肠壁的吸收和分泌失平衡导致了粪便中的水分增加。在肠内特别活跃的非侵袭性微生物可引起水性腹泻,这种腹泻不伴有发热,或仅伴有低热。这些微生物是通过与肠黏膜的相互作用引起腹泻的。具有肠毒性的大肠杆菌和霍乱弧菌在肠脏外不传播,它们并不侵袭肠上皮,但可增加肠毒素的产量,从而引起液体分泌而导致腹泻。一些微生物破坏肠道微绒毛的吸收表面,可引起双糖酶缺乏,如感染兰氏贾第鞭毛虫时可发生这种情况。还有一些侵袭性的微生物可穿透肠上皮而引起炎性紊乱,最常见于志贺菌感染。; 孙嫣陈香宇段芳龄; 关键词：成人急性腹泻寄生虫同性恋高发人群

体外诱导人骨髓间充质干细胞及其亚群HLA-DR～-C-Kit～-细胞向肝系细胞分化的实验研究: 对于各种终末期肝病，临床上主要采取基础疗法和对症治疗，肝移植作为治疗急、慢性肝衰竭的有效手段，由于供肝缺乏、费用昂贵、免疫排斥等问题，使其临床应用受限。虽然生物人工肝对改善终末期肝病患者症状、延缓预后有一定作用，但由于肝...; 孙嫣; 文献传递

不同来源干细胞向肝系细胞转化的研究进展及应用前景被引量：3: 2003年; 孙嫣段芳龄; 关键词：干细胞肝细胞系肝病干细胞移植

TPT1基因转染对肝癌细胞系SMMC-7721生物学行为的影响被引量：3: 2005年; 目的:观察TPT 1转染对肝癌细胞系生物学行为的影响。方法:用Q IAGEN超纯质粒抽提试剂盒抽提TPT 1的真核表达质粒pEGFP-N 3TPT 1和pEGFP-N 3,通过lipofectAM INE,在24 h内连续3次转染肝癌细胞系SMM C-7721,通过荧光显微镜、RT-PCR观察转染、表达效率,通过M TT实验、软琼脂克隆形成实验、细胞周期分析,研究TPT 1转染对肝癌细胞系SMM C-7721生物学行为的影响。结果:用此重构体转染后,在荧光显微镜下,可见细胞发出明亮的绿色荧光,转染效率约在30%左右。RT-PCR分析显示,pEGFP-N 3 TPT 1转染的细胞,TPT 1 mRNA水平升高0.78倍(P<0.05)。与对照组相比,pEGFP-N 3TPT 1转染可明显增强肝癌细胞系的增殖能力和软琼脂克隆形成能力(P值均<0.05),使G 2+S/M期细胞数增多。结论:pEGFP-N 3 TPT 1可在肝系细胞内高效表达,TPT 1可增强肝癌细胞系SMM C-7721的恶性表型。; 高天慧段芳龄周云尚佳孙嫣孙艳王晓; 关键词：转染细胞系肿瘤

人骨髓组织相容性抗原DR阴性C盒细胞阴性细胞体外分化为肝细胞样细胞: 2005年; 孙嫣段芳龄陈香宇马军; 关键词：肝细胞人骨髓组织相容性抗原阴性 HLA-DR 体外分化

体外诱导人脐血间充质干细胞向肝细胞样细胞分化的研究被引量：36: 2004年; 目的探讨人脐血间充质干细胞能否在体外诱导分化为肝细胞样细胞,并探索其定向诱导分化为肝细胞样细胞的分化机制。方法无菌条件下采集正常产妇脐血,用相对密度为1.077的淋巴细胞分离液分离脐血MNC,进而采用贴壁培养法获得MSC,流式细胞仪检测其表面际志。分别用HGF、FGF4、俩者联合、无生长因子四种处理因素,及含2％FBS的DMEM,1×ITS讲行诱导培养,并于诱导前及诱导后的第7、14、21、28天留取细胞,RT～PCR法检测AFP、白蛋白及C-met FGFR2mRNA的表达,免疫细胞化学法检测AFP、白蛋白、抗肝细胞抗体和CK18的表达,PAS法进行糖原染色,分析是否诱导出肝细胞样细胞。结果 MSC强表达CD29、CD44,不表达CD34。诱导后7,21天分别检测出AFP,白蛋白mRNA及蛋白的表达,28天检测出CK18、抗肝细胞抗体的表达,21天、28天均可检测到糖原染色阳性细胞,随诱导时间的延长C-met,FGFR2 mRNA表达增高,HGF+FGF4诱导组肝系细胞标志阳性率均高于单独生长因子诱导组(P<0.05);单独生长因子诱导组间无明显差异(P>0.05)。无生长因子诱导组在以上时间点均未检测到上述指标。结论HGF、FGF4均能诱导人脐血MSC分化为具有肝系细胞表型和功能的细胞,且二者在一定程度上有联合作用。生长因子与其相幢受体之间,可能存在正反馈调节机制。; 孙艳段芳龄陈香宇孙嫣李玉龙曾艳丽王豪勋; 关键词：体外诱导脐血间充质干细胞免疫细胞

人骨髓间充质干细胞体外分化为肝细胞样细胞被引量：29: 2004年; 目的探讨人骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外培养及特异性诱导为肝细胞样细胞的能力。方法骨髓标本来源于健康志愿者的胸骨,年龄2～35岁,采用淋巴细胞分离液(密度1.077)分离人MSCs,并分别采用HGF、FGF4、HGF+FGF4以及无生长因子四种处理因素体外诱导第三代人MSC向肝细胞样细胞分化。通过流式细胞术分析鉴定.MSCs的纯度,于诱导培养的0、7、14、21、28天时留取细胞检测CK18、AFP和白蛋白的表达情况,同时进行糖原染色验证细胞功能。结果用淋巴细胞分离液分离出的人MSCs纯度可达90％,采用HGF、FGF4及HGF+FGF4三种处理因素均可在体外诱导人MSCs特异分化为具有肝细胞样细胞表型和功能的细胞。结论人MSCs能在体外扩增并定向诱导为肝细胞样细胞。; 孙嫣段芳龄陈香宇孙艳李玉龙曾艳丽王豪勋; 关键词：骨髓间充质干细胞体外分化肝细胞样细胞 MSCS 淋巴细胞

肝细胞癌中差异表达EST的生物信息学分析和功能预测被引量：4: 2004年; 目的　采用生物信息学方法分析、预测在原发性肝细胞癌中差异表达表达序列标签 (expressionsequencetag ,EST)的全长、ORF、电子表达谱、染色体定位和编码蛋白质的功能 ,指导实验研究。方法　应用多种生物学软件进行分析。结果　获得两条新基因的全长序列 ,和RACE方法、测序获得的结果一致 ;两条EST分别定位于 2p13～ 15、3p14 ;高表达EST主要表达于肿瘤组织 ,低表达EST主要表达于正常组织 ;高表达基因所编码蛋白质参与细胞信号转导、前mRNA加工和细胞骨架组装 ,低表达编码蛋白质和机体T淋巴细胞介导的免疫反应有关。结论　采用生物信息学技术有助于高效、快速地克隆、鉴定新基因。; 陈香宇段芳龄李建生朱武凌韩泽广李玉龙曾艳丽孙艳孙嫣; 关键词：肝细胞癌 EST 生物信息学免疫反应

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孙嫣

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