孙佳善
- 作品数：13 被引量：31H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家社会公益研究专项计划哈尔滨市科技创新人才研究专项资金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程更多>>
- 禽流感病毒M2蛋白对细胞自噬过程的影响
- 猪流行性腹泻病毒(PEDV)是一种通过小肠感染,引起猪呕吐、腹泻、脱水的急性高度接触性传染病。PEDV可分为G1与G2基因亚型,两亚型间可诱导机体产生中和抗体的病毒纤突(Spike,S)蛋白氨基酸序列存在缺失、插入和大量...
- 谷琳琳马勇包红梅徐海峰孙佳善王秀荣陈化兰
- 禽流感病毒NS1蛋白抗原表位不同筛选方法的差异分析
- 禽流感(avian influenza，AI)是由A型禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)引起的一种传染病，主要感染鸡、鸭等家禽，某些情况下也可以感染哺乳动物，对公共卫生有重要影响。禽流感病毒...
- 孙佳善
- 关键词：禽流感病毒NS1蛋白噬菌体肽库
- 文献传递
- H5亚型禽流感病毒NS1基因在293T细胞中的瞬时表达与检测被引量：1
- 2013年
- 为了实现H5亚型禽流感病毒NS1基因的瞬时表达,试验利用PCR技术从NS1-T载体质粒上体外扩增NS1基因,将其克隆至pCAGGS载体,构建成重组质粒NS1-pCAGGS;提取NS1-pCAGGS质粒并与脂质体按照一定比例混合后转染293T细胞,用间接免疫荧光方法对瞬时表达细胞进行荧光信号反应。结果表明:禽流感NS1基因可以很好地在293T细胞中瞬时表达。
- 孙佳善文雪霞包红梅赵玉辉王云鹤熊永忠陈化兰王秀荣
- 关键词：禽流感NS1蛋白
- 禽流感病毒M2蛋白对细胞自噬过程的影晌
- 谷琳琳马勇包红梅徐海峰孙佳善王秀荣陈化兰
- 禽流感、新城疫和犬瘟热病毒单克隆抗体筛选策略比较及应用研究
- 抗体是免疫球蛋白大蛋白家族成员，抗体蛋白结合特定表位，由淋巴细胞合成或由攻击性（或非自体）有机体生成。单克隆抗体技术的发展和成熟为抗体应用奠定了基础。单克隆抗体具有针对单一抗原表位、能够无限传代、稳定分泌表达等特点，在疾...
- 孙佳善
- 关键词：禽流感病毒新城疫病毒犬瘟热病毒抗原表位
- 禽流感病毒NS1蛋白与ANXA2蛋白相互作用的研究被引量：1
- 2015年
- 为鉴定与禽流感病毒(AIV)NS1蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究以AIV GD1322株感染人肺泡上皮细胞(A549),利用NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)进行免疫沉淀反应(IP)筛选与其结合的宿细胞蛋白,并经质谱鉴定确认膜联蛋白A2(ANXA2)与NS1蛋白之间可能存在相互作用关系。免疫共沉淀(Co-IP)试验结果显示ANXA2与NS1蛋白之间具有稳定的相互作用关系;而且,Pull-down试验证明ANXA2与NS1蛋白之间为直接的相互作用。此外,激光共聚焦试验表明NS1和ANXA2共定位于胞浆中。本研究首次鉴定AIV NS1蛋白与宿主蛋白ANXA2间存在相互作用,为进一步研究AIV NS1蛋白的功能奠定了基础。
- 马勇包红梅王文超孙佳善赵玉辉王秀荣陈化兰
- 关键词：禽流感病毒NS1蛋白
- 禽流感病毒神经氨酸酶基因在重组杆状病毒中的表达
- 2012年
- 根据已知H5N1亚型禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)基因序列设计并合成引物。从H5N1亚型病毒感染的鸡胚尿囊液中提取总RNA,反转录后采用高保真DNA聚合酶扩增NA基因,构建转移载体pFastBacHTA-NA,并与大肠杆菌DH10Bac的Bacmid质粒重组,构建重组转座质粒rBacmid-NA。在脂质体介导下将rBacmid-NA转染sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。在sf9昆虫细胞中表达NA蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot和激光共聚焦检测蛋白。结果表明:表达的NA蛋白分子量约为53 ku,该蛋白能与H5N1亚型AIV血清发生特异性反应,证明NA蛋白表达正确,具有良好的免疫反应性。
- 孙晓东包红梅赵玉辉路冰孙佳善文雪霞熊永忠陈化兰王秀荣
- 关键词：禽流感病毒神经氨酸酶重组杆状病毒
- H7N9亚型禽流感病毒RT-PCR检测方法建立被引量：17
- 2015年
- 【目的】2013年3月,中国国家卫生和计划生育委员会宣布在上海、安徽地区发现了人感染H7N9亚型流感病毒事件,由于这种新型重组H7N9流感病毒未曾有过感染人或者动物的报道,因此出现了一系列亟待解决的问题,引起了全世界范围的广泛关注。根据H7N9亚型禽流感病毒HA和NA核苷酸序列,设计并合成靶基因为HA和NA的2对引物,建立快速检测H7N9亚型禽流感病毒的一步法RT-PCR检测方法。【方法】根据测序结果,用DNAStar生物软件进行同源性分析比较,选出H7和N9基因中高度保守且特异的核苷酸区域,用oligo6.0软件设计针对H7和N9基因的引物。用Trizol LS提取RNA,采用一步法Access RT-PCR扩增反应液,建立了一步法检测H7N9亚型禽流感病毒RT-PCR方法。以H7N9亚型流感病毒为阳性对照,其他亚型流感病毒以及新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊等其他禽病病原作为阴性对照,按所建立的反应体系和反应程序进行RT-PCR反应,验证所建立方法的特异性。对病毒含量为106.5 EID50·m L-1的H7N9亚型禽流感病毒尿囊液依次进行10倍倍比稀释,提取RNA用RT-PCR方法检测,评价其敏感性。另外,采取双盲试验用荧光定量RT-PCR对该方法进行了比对验证。【结果】用H7亚型特异性引物检测H1—H15亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他禽病病原,除H7亚型流感病毒外,其他样品均为阴性;用N9亚型特异性引物检测N1—N9亚型禽流感病毒和其他禽病病原,仅当前流行的H7N9亚型AIV样品有特异性目的条带,与其他N1—N9亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他禽病病原均无交叉反应。通过对H7N9亚型禽流感病毒尿囊液进行10倍倍比稀释检测,证实该方法最低检出量为1.4×102.5 EID50·m L-1,并可以从阳性棉拭子浸出液中扩增出目的基因片段。【结论】该RT-PCR方法具有特异性强和准确率高的特点,可以作为H7N9亚型AIV核酸检测的一种有
- 王云鹤包红梅孙佳善李雁冰徐晓龙王子龙施建忠曾显营王秀荣陈化兰
- 关键词：禽流感病毒RT-PCR
- 抗禽白血病病毒p27蛋白线性抗原表位的鉴定被引量：2
- 2015年
- 为鉴定禽白血病病毒(ALV)p27蛋白中的线性抗原表位,本研究以原核表达的重组p27蛋白免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,将免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接ELISA方法筛选纯化获得一株能够稳定分泌特异性单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株。Western blot试验结果显示,该MAb可以识别ALV的群特异性抗原p27蛋白。间接免疫荧光试验结果显示,MAb与A、B和J亚群ALV均呈阳性反应。对p27蛋白进行截短表达,利用western blot和间接ELISA进行表位鉴定,确定了MAb所识别的抗原表位位于129LVAITASALQAFRE142。氨基酸序列比对结果显示,本研究所鉴定出的p27表位在A、B和J亚群ALV之间高度保守。本研究为ALV检测方法的建立及其免疫学功能的研究提供了有利的工具。
- 李晓菲朱海波高奇王琦孙佳善高玉龙祁小乐王永强高宏雷王笑梅
- 关键词：禽白血病病毒P27蛋白单克隆抗体抗原表位
- 抗禽流感病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的初步分析被引量：4
- 2013年
- 为制备抗禽流感病毒(AIV)NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位鉴定,本研究以原核表达并纯化的NS1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,制备的D7和D9 2株能够稳定分泌抗NS1蛋白MAb的杂交瘤细胞,亚型鉴定均为IgG1型,轻链均为κ链。Western blot鉴定表明,这2株MAbs均能够识别NS1重组蛋白。间接免疫荧光鉴定表明,这2株MAbs均能够识别真核表达的NS1蛋白。利用噬菌体展示技术得到D9对应的短肽WNLNTV,与NS1蛋白aa 182～aa 187基本匹配,提示182WNDNTV187为NS1蛋白的一个线性表位。该结果为进一步研究NS1蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。
- 文雪霞包红梅孙佳善赵玉辉王云鹤姜永萍陈化兰王秀荣
- 关键词：禽流感NS1蛋白单克隆抗体抗原表位
