孔健
- 作品数：123 被引量：898H指数：18
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学化学工程更多>>
- 乳杆菌S-层蛋白质的多样性及其潜在应用
- 2013年
- S层(Surface layer)是存在于细菌及古细菌细胞外由蛋白质或糖蛋白质亚单位组成的单分子层晶格状结构。乳杆菌属中也发现了S-层蛋白质的存在,分子量介于2.5×104至7.1×104之间,是已知最小的一类S-层蛋白质,其蛋白质结构、功能与其他细菌的S-层蛋白质存在较大差异。乳杆菌S-层蛋白质独特的空间结构、自组装功能及细胞壁锚定功能使其在纳米生物技术、活载体疫苗开发、诊断学、新的生物催化剂领域具有很强的应用潜力。本文重点讨论乳杆菌S-层蛋白质的编码基因、蛋白质结构、与宿主菌结合方式及功能的多样性,并论述其潜在的应用前景。
- 孙芝兰胡淑敏孔健
- 关键词：乳杆菌多样性
- 一种适于微生物多样性分析的青贮饲料总DNA的提取方法被引量：2
- 2009年
- 目的:提出一种适于微生物多样性分析的青贮饲料中微生物总DNA的提取方法,并评价其效果。方法:间接法抽提样本的总DNA,通过琼脂糖电泳、紫外吸收及PCR分析DNA质量,DGGE评价提取效果,用PCR扩增目的菌株的特定片段来检测提取方法的灵敏度。结果:两个样本DNA的A260/A280值分别为1.99和1.93,A260/A230值分别为2.19和1.90,提取的DNA不需纯化便可直接用于16S rRNA基因的扩增,提取方法灵敏度为3cfu/g,DGGE结果表明提取方法可以涵盖样品中的所有微生物。结论:提取的DNA纯度较高,可直接用于下游分子操作,提取方法灵敏度较高,能全面反映样品中的微生物原貌,可用于免培养法研究青贮饲料中的微生物菌群组成。
- 马俊孝孔健季明杰
- 关键词：青贮饲料DNA提取DGGE微生物多样性
- 利用PCR-DGGE技术分析微生态制剂在传代过程中的菌群变化被引量：6
- 2008年
- 利用变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)技术,结合传统平板培养法对实验室研制的1种由乳酸菌和芽孢杆菌组成的微生态菌剂WS-401及其在连续转接培养过程中细菌种群组成的动态变化进行分析。WS-401原液的活菌数为2×107cfu/mL,且细胞个体形态多样。将分离自原液的3株细菌进行DGGE分析,出现2种指纹谱带,对照标准的DGGE指纹图谱库和序列分析,分别被鉴定为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)和嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)。将该菌剂分别在LB和MRS两种培养基中30℃或37℃连续转接5次,DGGE分析每次转接后培养物的菌群组成,结果发现,随着转接次数的增加,微生物菌群的种类减少,在LB培养基中转接5次后优势菌群只有蜡状芽胞杆菌,而在MRS培养基中转接后优势菌群为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)和类干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)。由此说明,微生物的营养基质和培养条件对微生态制剂在传代过程中的菌群组成和动态变化有重要影响。
- 马俊孝孔健季明杰
- 关键词：微生态制剂变性梯度凝胶电泳传代培养
- 产广谱细菌素乳酸菌的筛选被引量：15
- 2008年
- 利用牛津杯双层平板法从70株乳酸菌中筛选得到2株具有较高抑菌活性的乳酸菌LAB30、LAB211。研究这2株乳酸菌的抑菌物质发现:排除酸性产物乳酸、乙酸以及过氧化氢的干扰,LAB211和LAB30仍具有较高的抑菌活性;对其发酵液进行蛋白酶处理,LAB30的发酵液经胰蛋白酶和蛋白酶K处理后抑菌活性均有降低;而LAB211的发酵液经蛋白酶K处理后有所降低,胰蛋白酶处理没有变化,因此可以判定这两株乳酸菌产生的抑菌物质为细菌素。利用特异性引物PCR分析可知,LAB211和LAB30产生的细菌素并非nisin。抑菌谱实验表明,LAB30和LAB211的发酵液不仅抑制革兰氏阳性菌,而且对部分革兰氏阴性菌也有抑制作用。因此LAB211和LAB30产生的是一类广谱细菌素。
- 胡淑敏孔健季明杰
- 关键词：乳酸菌细菌素抑菌试验
- Paenibacillus sp.K1 β-半乳糖苷酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2008年
- 从鲜牛奶中分离到1株产-βgalactosidase的细菌,经16S rDNA序列比对鉴定为类芽孢菌Paenibacillussp.K1。提取该菌株的染色体DNA,以pUC18(lac-)为载体,构建其DNA文库;在含有X-gal的LB平板上筛选该文库,得到6个蓝色菌落;对阳性克隆中插入的DNA片段序列测定,鉴定出1个编码全长为2 028 bp并携带有组成型启动子的β-半乳糖苷酶基因。将该基因导入大肠杆菌BL21(DE3)中,实现了β-半乳糖苷酶高效表达,其酶活为25.06 U/mL,高于原始菌株的4.55 U/mL,并进一步用亲和层析将该酶进行了纯化。
- 陆文伟孔文涛孙芝兰孔健季明杰
- 关键词：类芽孢杆菌Β-半乳糖苷酶DNA文库
- 乳酸菌抑霉菌菌株的筛选及应用被引量：3
- 2013年
- 本实验从保存的乳酸菌菌株中筛选出了抑霉菌效果好、抑菌谱较广的三株乳酸菌(2025b、2026b1、6-1-1),研究了三株乳酸菌菌株发酵液的详细性质,包括生长曲线的绘制,发酵过程中pH值的变化情况,发酵液对蛋白酶的稳定性,发酵液对高温的稳定性,测试了发酵液随着储存时间的延长形成的抑菌能力变化情况。利用筛选出的三株乳酸菌(2025b、2026b1、6-1-1)发酵产生的无菌发酵液进行面包防腐实验和葡萄炭疽病和白腐病病菌抑菌试验,发现乳酸菌发酵液对面包保鲜期限的延长效果明显,对葡萄炭疽病和白腐病的病菌抑制效果明显。
- 于向荣汤小宁于清琴孔健钱洋
- 关键词：乳酸菌发酵液抑菌炭疽病白腐病
- Paenibacillus sp.K1乳糖酶基因bga在乳酸乳球菌中的表达被引量：4
- 2008年
- 为了提高乳酸乳球菌利用乳糖的能力,缓解乳糖不耐症,以实验室构建的含有乳糖酶基因的质粒pUC-bga为模板,通过PCR扩增得到乳糖酶基因bga,将其分别与载体pSEC和pMG36e连接,获得重组质粒pSEC-bga和pMG36e-bga,重组质粒分别电转Lactococcus lactisNZ9000和Lactococcus lactisMG1614,并在乳酸乳球菌细胞内实现了活性表达。高压液相色谱(HPLC)分析其对培养基中乳糖的利用能力,结果重组菌L.lactisNZ9000-Bga对乳糖的利用能力比对照菌株高一倍,为生产低乳糖的发酵乳制品奠定了基础。
- 孙芝兰孔文涛孔健
- 关键词：乳糖酶基因乳酸乳球菌
- 乳酸乳球菌nisin抗性基因的克隆及作为筛选标记的研究
- 2008年
- 在添加500 U/mL nisin和溴甲酚紫的GM17选择性培养基上,分离到5株nisin抗性菌株。根据形态观察,生理生化特性和16S rDNA基因序列比对被鉴定为乳酸乳球菌。根据已报道nisin抗性基因设计引物,分别以这5株菌的染色体和质粒DNA为模板进行PCR扩增,结果从1株抗性菌株的染色体上得到目的基因产物。通过序列测定和同源性比对,证明为nisin抗性基因(nsr)。将nsr基因克隆到乳酸菌-大肠杆菌穿梭质粒pTRKH2上,重组质粒命名为pT-nsr。pT-nsr电转化乳酸乳球菌MG1614,获得的重组菌MG1614/pT-nsr在含有500 U/mL nisin的培养基中生长情况良好。这表明nsr基因赋予宿主菌抗nisin特性,并且与红霉素抗性功能相同,因此nsr基因可以作为筛选标记用于食品级载体的构建。
- 郭婷婷孔文涛孔健季明杰
- 关键词：乳酸乳球菌
- 发酵乳杆菌β-半乳糖苷酶转糖基活性研究被引量：7
- 2008年
- 从传统发酵乳制品中筛选到1株转糖基活性较高的乳杆菌，经16SrDNA菌种鉴定为发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum，EU621851）K4。以乳糖为底物，研究β-半乳糖苷酶粗酶液在不同pH、乳糖浓度、反应温度和时间的转糖基活性。结果表明在pH5．5、乳糖20％、温度50℃条件下反应48h，转糖基活性最高，能生成多种低聚半乳糖。研究发现在低乳糖含量（5％）和pH5～7范围内都具有明显的转糖基活性。用牛奶为原料进行转糖基能力测定，结果该酶既能降低牛乳中的乳糖含量，又能生成低聚半乳糖。因此，菌株Lb．fermentum K4在乳制品发酵中具有潜在的应用价值。
- 陆文伟孔文涛孔健季明杰
- 关键词：发酵乳杆菌半乳糖苷酶低聚半乳糖
- 一种基于双路自编码的未知流量识别方法及系统
- 本发明属于网络安全技术领域，提供了一种双路自编码的未知流量识别方法及系统。该方法包括，对获取的网络数据包序列进行预处理，筛选得到未知流量数据；提取所述未知流量数据的协议载荷特征和流量统计特征；采用双路自编码器模型对所述协...
- 王风宇付亚婷李晓帆孔健于光耀
