商艳芬
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 重组人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶蛋白的研制
- 目的:建立一种制备重组人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(recombinant human betaine-homocysteine S-methyltransferase,rhBHMT)药用蛋白的生物工程技术,获得高纯度并...
- 商艳芬
- 关键词：纯化HCY高同型半胱氨酸血症
- 文献传递
- 重组人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶的表达纯化和鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的对重组人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(recombinant human betaine-homocysteine S-methyltrans-ferase,rhBHMT)进行表达纯化和鉴定。方法采用基因重组技术在原核系统表达BHMT蛋白,镍螯合亲和层析和Sephacryl S200层析进行纯化。产物经SDS-PAGE、HPLC、N端氨基酸序列检测与活性验证。结果终产物rhBHMT纯度达97.9%。相对分子质量为45 000,N端氨基酸序列与理论序列一致。结论从工程菌中获得具有活性的高纯度rhBHMT,产物均一,工艺稳定,为中试放大提供可靠依据。
- 商艳芬杨仲璠赵云杲修杰吴彦卓徐明波钱令嘉
- 关键词：基因表达纯化
- 酵母双杂交筛选心脏cDNA文库中与人热激蛋白70相互作用的蛋白质
- 2011年
- 目的:利用酵母双杂交系统从人心肌cDNA文库中筛选与热激蛋白70(HSP70)相互作用的蛋白质。方法:从人心脏cDNA文库扩增Hsp70基因,克隆于pGBKT7载体上,酶切鉴定及序列分析,并检测pGBKT7-Hsp70酵母细胞AH109中的自激活活性;将构建的酵母表达诱饵质粒载体pGBKT7-Hsp70转化AH109酵母细胞,与转化有人心脏cDNA文库的酵母Yl87进行交配实验,筛选与HSP70相互作用的蛋白质,通过一对一的回复杂交实验排除假阳性,对阳性克隆进行序列测定和生物信息学分析。结果:构建了"诱饵"质粒栽体pGBKT7-Hsp70,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活活性,筛选得到多个与Hsp70相互作用的阳性转化子,并最终得到HSP70的1个相互作用蛋白质HIP。结论:应用酵母双杂交系统筛选出与HSP70相互作用的1个蛋白质,它们的相互作用可能与HSP70发挥细胞分子伴侣作用有关。
- 张志清刘晓华段梦商艳芬王立群冷雪钱令嘉
- 关键词：热激蛋白70酵母双杂交系统相互作用蛋白质
