吴洪
- 作品数：8 被引量：59H指数：5
- 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡精原细胞分离纯化与体外培养初探被引量：5
- 2006年
- 本研究以组合酶分步消化法并利用Percoll梯度分离、贴壁纯化的方法,从不同时期的鸡睾丸组织中分离精原细胞。结果发现:①Percoll分离后,出壳6d雏鸡获得的细胞总数、精原细胞总数、精原细胞纯度分别为282.1、174.6、61.9%,其中精原细胞纯度比孵化15d、19d鸡胚和出壳后13d雏鸡分别高10.2%、5.7%和2.5%;②贴壁纯化后精原细胞纯度达到82%,比未经贴壁纯化的精原细胞纯度高出15.6%;③在无饲养层培养条件下,比较Percoll梯度分离前、后鸡精原细胞体外培养的情况,Percoll梯度分离前精原细胞贴壁在时间上比分离后较快,且分离前精原细胞体外存活时间亦比分离后长。
- 吴洪李碧春周冠月孙思宇秦洁陈国宏
- 关键词：精原细胞体外培养
- 鸡睾丸细胞体外分离培养初探被引量：8
- 2007年
- 取孵化15d鸡胚及出壳7d内和7d后雏鸡的睾丸，分别采用二酶二步消化法（胶原蛋白酶＋胰蛋白酶）和三酶二步消化法（胶原蛋白酶＋透明质酸酶／胰蛋白酶）分离睾丸细胞。结果表明：同一时期睾丸细胞的分离效果，二酶二步消化法与三酶二步消化法差异显著；不同时期采用二酶二步消化法分离睾丸细胞，孵化15d的分离效果显著优于出壳7d内，极显著优于出壳7d后，出壳7d内极显著优于出壳7d后。Percoll离心法提纯结果表明：密度梯度为27％～35％的条带中睾丸细胞纯度较高。在体外无饲养层的条件下分别培养经提纯与未经提纯的睾丸细胞，结果表明未经提纯的细胞具有较高的存活力。
- 李碧春周冠月吴洪孙思宇
- 关键词：精原干细胞分离提纯
- 鸡精原干细胞的体外培养被引量：5
- 2008年
- 本试验旨在探索不同基础培养基对鸡精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外培养的影响,以期选出最佳的培养体系,并用其进行传代培养,以观察精原干细胞继代培养的特性。结果表明:在高糖DMEM培养体系和TCM199培养体系中,SSCs均能正常生长和增殖,在以DMEM和TC199为基础培养基的培养体系中,在SSCs的活率、克隆形成率上显著不差异,但SSCs在以DMEM为基础培养基的培养体系中生长情况较好,为最佳培养体系。在RPMI1640培养体系中,SSCs克隆形成率、活率较低,比前2种培养体系的效果差异显著。在添加细胞因子的培养基中精原干细胞在体外传至第3代。
- 孙思宇李碧春魏彩霞秦洁吴洪周冠月陈国宏
- 关键词：体外培养继代培养
- 鸡睾丸细胞分离方法与培养的研究被引量：4
- 2007年
- 吴洪李碧春周冠月孙思宇秦洁
- 关键词：睾丸细胞体外培养哺乳类动物啮齿类动物支持细胞精原细胞
- 鸡精原细胞分离与纯化初探被引量：1
- 2006年
- 采用二酶三步消化法处理鸡睾丸组织，获得的细胞悬液以Percoll作为介质并结合细胞选择性贴壁培养纯化精原细胞。结果发现：1mg／mL胶原酶＋0．25％胰蛋白酶＋0．25％胰蛋白酶处理鸡睾丸组织，获得的细胞总数多达5．8×10^6个；Percoll离心后精原细胞主要位于19％～35％梯度层中，纯度平均达到66．4％；贴壁纯化后精原细胞纯度则达到82％，比未经贴壁纯化的精原细胞纯度高15．6％。
- 吴洪李碧春周冠月孙思宇秦洁陈国宏
- 关键词：精原细胞
- 鸡胚胎原始生殖细胞的培养和传代被引量：28
- 2005年
- 本文旨在探索鸡胚胎原始生殖细胞(Primordialgermcells,PGCs)培养、传代以及各种因素对PGCs培养的影响。实验结果表明,在添加10%的胎牛血清、2%的鸡血清、2mmol/LL谷氨酰胺、1mmol/L丙酮酸钠、5.5×10-5mol/Lβ巯基乙醇、10μl/ml非必需氨基酸、以及5ng/ml人干细胞生长因子(Humanstemcellfactor,hSCF)、10U/ml鼠白血病抑制因子(Mouseleukemiainhibitoryfactor,mLIF)、10ng/ml碱性成纤维生长因子(Fibroblastgrowthfactorbasic,bFGF)、0.04ng/ml人白细胞介素11(Humaninterleukin11,hIL11),10ng/ml胰岛素样生长因子(Humaninsulinlikegrowthfactor,hIGF)的高糖DMEM培养体系中,以多次离散法进行传代获得5-6代鸡胚胎PGCs,有效地维持了PGCs的未分化状态和正常二倍体核型,同时能够定向地诱导分化为神经细胞。
- 秦洁李碧春陈国宏蔡琳琳韩威周冠月吴洪孙思宇
- 关键词：鸡胚胎原始生殖细胞碱性成纤维生长因子白血病抑制因子PGCSL-谷氨酰胺
- 不同培养方法对鸡精原干细胞体外培养效果的影响被引量：1
- 2008年
- 本研究从孵化至16 d的鸡胚睾丸中分离获取精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSCs),比较3种培养液、2种处理(有无饲养层)对SSCs生长的影响,并对SSCs保持特性进行鉴定。结果表明:在无饲养层细胞存在的条件下,DMEM、TCM199和RPMI1640培养液中,SSCs的存活时间分别为6.5、6.0和3.5 d,DMEM和TCM199培养液之间差异不显著(P>0.05),但两者与RPMI1640之间均存在极显著差异(P<0.01)。在有饲养层细胞存在的条件下,在DMEM、TCM199和RPMI1640培养液中,SSCs的存活时间分别为45.5、38.0和14.0 d,三者相互之间存在着极显著的差异(P<0.01)。在6种培养体系中,SSCs在培养体系Ⅳ中的存活时间和AKP阳性克隆率分别为(45.5±3.20)d和0.31±0.46,极显著地高于其他5种培养体系(P<0.01)。SSCs在培养体系Ⅳ中传代至1、2和3代时,AKP阳性克隆率分别为31.6%、20%和18%。SSCs形成的克隆,经AKP活性检测和SSEA-1免疫染色,均呈阳性。传代至第3代的SSCs,其染色体组型保持不变,为2n=78。这些结果表明,SSCs在以DMEM为基础培养基的培养体系Ⅳ中培养至第3代时,仍保持干细胞未分化特性。
- 吴信生孙思宇吴洪魏彩霞孙国波余飞赵文明徐琪陈国宏李碧春
- 关键词：体外培养传代
- 鸡早期胚胎精原细胞和睾丸发生发育关系的研究被引量：15
- 2005年
- 采用连续切片技术,研究了15～45期(孵化50h～19d)鸡早期胚胎发育过程中精原细胞与睾丸发生发育的关系。结果显示:孵化第22～28期(第3.5～5天),原始生殖腺内的原始生殖细胞(PGCs)胞质内的糖原颗粒开始分解;第29期(孵化第6天),鸡胚性腺开始分化,PGCs的糖原颗粒进一步分解;第31期(孵化第7天),PGCs内的糖原颗粒完全消失。在雄性,性腺开始显示睾丸特征,PGCs分化为精原细胞;第34期(孵化第8天),睾丸内曲精细管索开始形成,呈实心状,精原细胞位于其中;第35～37期(孵化第9～11天),曲精细管索数量逐渐增加,索内精原细胞体积较大,呈圆形单层排列,且已分化出支持细胞,但数量不多,形态不易分辨,间质内有少量间质细胞;第38～40期(孵化第12～14天),可见到典型的曲精细管,精原细胞数量增加,支持细胞亦增多;曲精细管间的间质细胞成群分布。第40～45期(孵化第16～19天),两侧睾丸大小略有差异,右侧稍大于左侧,精原细胞数量明显增多,呈葡萄串状分布在曲精细管的中央;曲精细管的管腔已经形成,精原细胞已分层排列。
- 李碧春周冠月孙思宇秦洁吴洪
- 关键词：胚胎睾丸精原细胞PGCS
