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家蝇几丁质酶基因MDCII重组表达质粒的构建及表达模式研究被引量：4: 2017年; 从家蝇EST测序数据库中筛选获得家蝇几丁质酶基因MDCII,对该基因进行克隆及分子特性分析,探讨其在家蝇不同组织、不同发育时期及经不同微生物诱导后的时空表达模式。利用EST测序技术从已构建的家蝇幼虫c DNA质粒文库筛选出MDCII基因,运用生物信息学方法分析该基因序列及其编码蛋白的理化特性,采用邻接法构建系统进化树;PCR技术扩增目的基因,构建p EASY-E1-MDCII重组质粒,转化到Trans1-T1克隆感受态细胞中;采用实时荧光定量PCR(Real Time PCR)技术,检测MDCII基因在不同发育时期和不同组织部位的表达差异;采用注射法将不同微生物导入到家蝇3龄幼虫体内,Real Time PCR检测诱导后不同时间点MDCII基因表达水平的变化。结果显示,MDCII基因的ORF框全长1 374 bp,编码457个氨基酸,理论分子量51.6 k D,进化树分析比对与果蝇成虫盘生长因子的遗传距离较近。构建了具有正确基因序列的p EASY-E1-MDCII重组质粒。MDCII基因在家蝇不同发育阶段中均有不同程度的表达,在3龄幼虫中,以唾液腺和脂肪体中的表达水平较高;在白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌诱导后3 h,MDCII基因均出现明显的表达上调。MDCII基因属于几丁质酶中成虫盘生长因子,参与了家蝇的生长发育,在免疫防御过程中也发挥了一定作用。; 杨尉锦国果吴沁怡李妍付萍张勇; 关键词：家蝇几丁质酶克隆

家蝇2个几丁质酶基因的cDNA克隆及其功能初探: 目的：从家蝇的EST测序数据库中筛选获得家蝇的2个几丁质酶基因MDCⅠ、MDCⅡ，对这2个基因进行cDNA克隆及分子特性分析;探讨MDCⅠ、MDCⅡ基因在家蝇不同组织和发育时期的时空表达模式;初步研究这2个几丁质酶基因在...; 吴沁怡; 关键词：几丁质酶分子特性免疫防御

家蝇(Musca domestica)羧肽酶基因克隆及原核表达被引量：2: 2014年; 从构建的家蝇幼虫cDNA质粒文库中筛选到羧肽酶(Carboxypeptidase,CP)基因,以该基因的cDNA文库质粒为模板,通过PCR扩增,获得CP基因完整编码序列(登录号:KF939629.1)。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽和亚细胞定位等进行预测和分析。构建PEASY-E1-CP重组质粒,转化到大肠杆菌OrigamiB(DE3)中进行诱导表达。研究结果表明,CP基因ORF全长1 284 bp,编码428个氨基酸,理论分子量47.8ku,等电点为6.10,具有CP家族的蛋白保守结构域;重组原核质粒pEASY-E1-CP经IPTG诱导,蛋白在大肠杆菌中获得表达。; 修江帆魏川川尚小丽国果吴沁怡吴建伟; 关键词：家蝇羧肽酶克隆原核表达

家蝇变应原Tropomyosin基因的克隆、序列分析及诱导表达被引量：1: 2014年; 对家蝇变应原原肌球蛋白(Tropomyosin)基因进行同源克隆,序列分析;构建原核表达载体并在大肠杆菌中表达。从家蝇幼虫cDNA文库中筛选获得Tropomyosin基因。以该基因的cDNA文库质粒为模板,进行PCR扩增,获得家蝇Tropomyosin完整编码序列。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽、二级结构、三级结构、抗原表位和亚细胞定位等方面进行预测和分析。构建pEASY-E1-Tropomyosin重组质粒,转化到大肠杆菌OrigamiB(DE3)中进行诱导表达。Tropomyosin基因ORF全长828 bp,编码275个氨基酸,理论分子量31.6 kD;等电点为4.65,具有Tropomyosin家族的蛋白保守结构域。成功构建重组原核表达pEASY-E1-Tropomyosin并诱导表达重组蛋白。; 魏川川修江帆王宇国果彭传林吴沁怡吴建伟; 关键词：家蝇 TROPOMYOSIN 克隆生物信息学变应原

家蝇几丁质酶基因的序列分析、克隆和诱导表达被引量：4: 2012年; 目的对EST筛选得到的家蝇几丁质酶Ⅰ(MDCⅠ)基因进行序列分析,克隆其cDNA序列并在大肠杆菌中表达。方法采用EST测序技术从已构建的家蝇幼虫cDNA质粒文库中筛选到MDCⅠ基因,对其进行序列测定和分析。以该基因的cDNA文库质粒为模板,通过PCR方法对MDCⅠ基因进行扩增,以pET 28a(+)为载体构建重组质粒,再转化到表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定。结果 MDCⅠ基因全长751bp,编码251个氨基酸,理论分子量28.62家kDa;等电点5.78,有1个chitinase 18家族的活性位点。构建了具有正确基因序列的MDCⅠ重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。结论 MDCⅠ基因可在原核表达系统中表达,为进一步研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定了基础。; 国果吴建伟吴沁怡付萍张勇; 关键词：家蝇几丁质酶基因克隆

家蝇14-3-3蛋白基因的cDNA克隆与序列分析被引量：2: 2013年; 从家蝇cDNA文库中筛选获得家蝇14-3-3(MD14-3-3)基因DNA序列,以该基因的cDNA文库质粒为模板,PCR方法对MD14-3-3基因进行扩增,以pET 28(a+)为载体构建重组质粒。采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和亚细胞定位等方面进行预测和分析。结果表明,MD14-3-3基因ORF全长771 bp,编码257个氨基酸,理论分子量29.35 kD;等电点5.78,属于亲水性的酸性蛋白,含有多种酶的结合位点,有14-3-3家族结构域和活性位点,定位于细胞核中,二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主。经PCR、双酶切及NDA测序结果均表明pET 28a(+)-MD14-3-3重组质粒构建成功。; 国果吴沁怡吴建伟付萍张勇; 关键词：家蝇基因克隆生物信息学分析

家蝇泛素结合酶基因的生物信息学分析被引量：6: 2014年; 利用EST测序技术从家蝇幼虫cDNA文库中获得家蝇泛素结合酶基因(MD-E2)cDNA序列,采用NCBI、ExPASY中的相关工具,对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和亚细胞定位等方面进行预测和分析,MEGA软件构建了进化树。结果表明,家蝇泛素结合酶基因的cDNA序列具有完整的ORF框,全长480 bp,一共编码159个氨基酸。其编码的蛋白质理论分子量为18.117 9 kD,等电点8.64,无信号肽及跨膜区,属于亲水性蛋白,具有泛素结合酶家族的活性位点(FHPNVYPSGTVCLSLL),主要分布于细胞核;二级结构以无规则卷曲为主,β折叠较少。; 国果吴沁怡吴建伟赵学军付萍张勇; 关键词：家蝇泛素结合酶生物信息学

家蝇黏蛋白mucin-46基因的序列分析: 2014年; 目的:分析和预测家蝇黏蛋白mucin-46基因及其编码蛋白的结构和特性。方法:利用EST测序技术从家蝇幼虫cDNA文库中获得家蝇黏蛋白mucin-46基因cDNA序列,采用美国国家生物技术信息中心(NCBI)、瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(Expasy)中的相关工具,对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和亚细胞定位等方面进行预测和分析。结果:家蝇黏蛋白mucin-46基因的cDNA序列具有完整的开放阅读框(ORF),全长1 383 bp,编码460个氨基酸;其编码的蛋白质理论分子量为46.42 kDa,等电点4.13;无信号肽及跨膜区,属于亲水性蛋白,具有4个几丁质结合功能域,含有4个糖基化位点及多个蛋白磷酸化作用位点;二级结构β折叠(E)和无规则卷曲(L)的比例是14.13∶85.87,没有α螺旋(H)结构类型;主要分布于细胞核。结论:应用生物信息学方法从家蝇cDNA文库中筛选出了家蝇黏蛋白mucin-46基因序列并预测了其结构及功能等生物学信息,为进一步研究家蝇围食膜蛋白的功能奠定了一定的基础。; 裘学丽国果吴沁怡赵学军付萍张勇吴建伟; 关键词：家蝇黏蛋白

家蝇伴侣蛋白TCP-1基因的序列分析、克隆及诱导表达被引量：1: 2014年; 旨在对EST筛选得到的家蝇伴侣蛋白TCP-1(MD-TCPⅠ)基因进行序列分析,克隆其cDNA序列并在大肠杆菌中诱导表达。采用EST测序技术从已构建的家蝇幼虫cDNA质粒文库中筛选到MD-TCPⅠ基因,对其进行序列测定和分析。以该基因的cDNA文库质粒为模板,通过PCR的方法进行扩增,以pET-28a(+)为载体构建重组质粒,再转化到表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物通过SDS-PAGE进行鉴定。结果显示,MD-TCPⅠ基因ORF全长753 bp,编码250个氨基酸,理论分子量27.07 kD;等电点5.92,该序列编码的蛋白属于热休克蛋白60家族的TCP。构建了正确基因序列MD-TCPⅠ重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。; 赵学军国果吴沁怡陶如玉吴建伟; 关键词：基因克隆

家蝇14-3-3蛋白基因的cDNA克隆与序列分析: 研究背景:14-3-3家族蛋白是一类在所有真核生物间高度保守,分子量较小(272kDa)的酸性调控蛋白,现有研究证实,14-3-3蛋白在植物及动物的抵御革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌感染的过程中,起到了非常重要的防御作用。目...; 国果吴沁怡吴建伟付萍张勇; 关键词：家蝇基因克隆生物信息学分析; 文献传递

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吴沁怡

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