吴欣
- 作品数：19 被引量：15H指数：2
- 供职机构：复旦大学附属中山医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 小鼠次级淋巴组织趋化因子成熟肽基因/腺相关病毒重组载体的构建被引量：1
- 2004年
- 目的 构建含小鼠次级淋巴组织趋化因子 (SLC)cDNA的重组腺相关病毒载体。 方法 以C5 7BL 6J小鼠的淋巴组织为材料抽提总RNA ,用RT PCR方法克隆小鼠SLC的成熟肽基因。PCR产物回收后经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切 ,插入pAAV IRES hrGFP质粒 ,用磷酸钙法 ,与pAAV RC和pHelper三者共同转染HEK2 93细胞 ,包装成重组的病毒颗粒 ,并通过绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因荧光检测及抽提病毒DNA ,进行PCR扩增等进一步证实重组病毒的形成。 结果 约 5 0 0bp的小鼠SLC成熟肽基因被成功克隆 ,序列分析表明 ,所克隆的SLC基因与基因库注册的相同 ,重组载体的酶切及测序鉴定表明SLC基因被定向插入。重组载体转染HEK2 93细胞 ,经荧光显微镜和病毒DNA的PCR检测 ,证实已完成对重组病毒的包装 ,并表达GFP。 结论 成功构建了SLC成熟肽基因重组腺相关病毒载体。
- 梁春敏钟翠平郑宁吴欣孙瑞霞刘银坤叶胜龙
- 关键词：小鼠次级淋巴组织趋化因子成熟肽基因腺相关病毒
- 染色体8p肝癌转移相关基因的筛选和HTPAP基因功能初步研究
- 手术切除是治疗肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的主要方法,但术后五年复发率高达50％,转移复发是影响治疗效果的主要因素.染色体8p的改变与多种肿瘤相关.研究结果表明染色体8p缺失和肝...
- 吴欣
- 关键词：肝癌转移复发染色体8PCDNA微阵列侵袭性
- 文献传递
- p53-p21融合基因的克隆及其对肝癌细胞生长的抑制
- 应用野生型 p53及 p21组成融合基因,以期加强两者的抑癌作用,为肝癌的基因治疗提供一种新的候选融合基因。方法:用反转录 pCR 从正常人胚肺细胞中获得 p21基因 cDNA,将其和 p53融合,构建成重组质粒 pcD...
- 吴欣刘银坤汤钊猷
- 文献传递
- 胚泡着床过程相关因子及在生育调节中意义
- 2003年
- 胚胎着床(Blastocyst implantation)是一复杂的生理过程,涉及细胞的生长、分化、识别和粘附等作用,需要不同功能分子参与,其具体机制尚不清楚.由于着床是成功妊娠的第一步,所以着床研究是最终解决不孕的关键,抗着床则使发展抗生育方法的切入点.胚泡着床与肿瘤转移侵袭的生物学性行为相似,可能有原癌基因、粘附分子、细胞因子等多种分子调控,整个过程贯穿不同的信号传导.
- 周剑萍张炜刘银坤朱瑾张俊慧吴欣
- 关键词：胚泡着床生育调节
- SLC基因修饰树突状细胞及不同免疫方式抗肿瘤作用探讨被引量：4
- 2006年
- 目的:应用次级淋巴组织趋化因子(SLC)成熟肽基因/重组腺相关病毒(rAAVSLC)转染树突状细胞(DC),探讨一种基因修饰DC的新方法及其抗肿瘤的生物学活性。方法:体外构建rAAVSLC,按MOI为10、50、100与腺病毒(Ad2)协同转染小鼠骨髓来源成熟和未成熟DC,GFP作为成功转染的示踪蛋白。RTPCR在mRNA水平、ELISA在蛋白水平检测SLC表达,Transwell检测转染DC的培养上清对T细胞的趋化作用。瘤苗的在体效应通过C57BL/6J小鼠肿瘤模型验证。皮下接种Hepal6肿瘤细胞后成瘤小鼠分成3组:①生理盐水对照组,瘤内或足垫注射NS;②单纯DC对照组,瘤内或足垫注射未修饰DC;③SLC基因修饰DC组,瘤内或足垫注射SLC基因修饰的DC。每隔7天注射1次,观察各组小鼠肿瘤的生长情况。4周后分离瘤体,用荧光免疫组化检测瘤体内CD4+T细胞、CD8+T细胞浸润情况。结果:rAAVSLC在MOI为100时能成功转染DC,未成熟DC的转染效率显著高于成熟DC,并产生对T细胞有明显趋化生物学活性的SLC。动物实验表明,瘤内注射SLC修饰后DC,肿瘤大小与对照组有明显差异,免疫组化显示瘤体内有较多的CD4+T细胞、CD8+T细胞浸润。足垫注射SLC修饰的DC与对照组相比,抗肿瘤作用无显著差异。结论:rAAVSLC在Ad2的辅助下能有效转染未成熟DC并能表达具有趋化生物学活性的SLC。SLC基因修饰的树突状细胞瘤内注射以其对CD4+T细胞、CD8+T细胞的吸引作用而发挥了明显的抗肿瘤作用,同时也进一步证实用树突状细胞进行肿瘤生物免疫治疗时,不同免疫方式对疗效有明显影响。
- 梁春敏钟翠平郑宁刘彬彬孙瑞霞吴欣刘银坤叶胜龙
- 关键词：重组腺相关病毒骨髓来源树突状细胞次级淋巴组织趋化因子
- hTcf-4基因在肝癌细胞系中的表达及其突变的研究被引量：1
- 2002年
- 目的 研究hTcf 4基因在肝癌细胞系中的表达及突变的情况 ,以探讨hTcf 4基因与肝癌发生及侵袭转移的关系。方法 用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测 5种肝癌细胞系和肺癌细胞系、乳腺癌细胞系、胃癌细胞系及正常肝细胞中hTcf 4基因表达 ,并用聚合酶链反应 单链构像多态性分析 (PCR SSCP)方法检测肝癌细胞系中hTcf 4外显子 1、4、9、1 5的突变情况。结果 hTcf 4mRNA在不同细胞系中均有表达。但不同细胞系的表达水平差异有显著性 (P <0 .0 5)。低转移肝癌细胞系HepG2、Hep3B、SMMC 772 1、BEL 740 2的表达水平分别为0 .70 5± 0 .0 50 ,0 .745± 0 .0 65 ,0 .71 0± 0 .0 78,0 .746± 0 .0 84,均高于正常肝细胞 0 .452± 0 .0 38(P <0 .0 0 1 )及肺癌细胞系 0 .531± 0 .0 83、乳腺癌细胞系 0 .578± 0 .0 64、胃癌细胞系 0 .50 3± 0 .0 33等非肝癌细胞系 (P <0 .0 5)。而高转移肝癌细胞系MHCC97表达水平为 0 .92 4± 0 .0 74,又高于低转移肝癌细胞系(P <0 .0 1 )。 5种肝癌细胞系中 ,只有MHCC 97hTcf 4基因第 1 5外显子处存在点突变。结论 hTcf
- 江颖周信达刘银坤吴欣孙瑞霞赵燕陈洁
- 关键词：T淋巴细胞肝细胞癌基因表达基因突变
- 数据管理系统的设计与实现
- 直复营销是一种“度身定做”式的营销模式，在建立强大的和及时更新的数据库的基础上为企业提供定制的消费者群体数据解决方案，帮助企业进入其目标细分市场。
为使中国企业在数据技术方面快速提高核心竞争力，公司立项开发一套...
- 吴欣
- 关键词：直复营销数据管理系统
- 文献传递
- 酵母系统表达重组人亲肝素促轴突生长因子及其活性检测
- 陈峥嵘王毅超陈中伟宋后燕刘银坤关孝群吴欣
- 该课题研究酵母系统表达重组人亲肝素性促轴突生长因子及其活性，并观察对体外培养细胞的促轴突生长作用。结果显示：目的基因序列与基因库资料完全一致，目的基因在该载体中位于a因子分泌信号序列第下游，与a因子开放阅读框相连，产物相...
- 关键词：
- 关键词：酵母系统生物活性
- 小鼠胚泡着床前后子宫内膜细胞间粘附分子-1 mRNA表达水平的变化被引量：1
- 1999年
- 目的 研究小鼠胚泡着床前后子宫内膜细胞间粘附分子1(ICAM1)在转录水平的表达变化。方法 小鼠雌雄合笼后建立小鼠早孕模型,用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR),测定ICAM1mRNA的表达。结果 小鼠正常动情期子宫内膜有一定ICAM1mRNA的表达,着床前后其表达显著升高,并在着床前一天即孕3d达到高峰,着床后逐渐出现下降趋势。结论 ICAM1在胚泡着床前后明显上调,和胚泡着床密切相关。
- 朱瑾周剑萍刘银坤吴欣
- 关键词：胚泡着床ICAM-1MRNA子宫内膜
- 酵母系统表达的重组人亲肝素性促轴突生长因子及其促轴突生长作用(英文)被引量：1
- 2002年
- 目的 亲肝素性促轴突生长因子 (heparin bindingneurite promotingactor,HBNF)最早在脑组织中发现 ,能促进体外培养的神经细胞的轴突生长。本研究利用酵母系统表达人亲肝素性促轴突生长因子 ,并观察其对体外培养细胞的促轴突生长作用。方法 从 18周流产的人胎脑组织提取总RNA ,利用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)获得人亲肝素性促轴突生长因子 (HBNF)的编码基因 ,扩增后与穿梭表达载体pPIC9K重组 ,鉴定筛选得到含HBNFcDNA基因的阳性克隆。用此重组表达载体通过电穿孔法转化酵母菌株GS115 ,在不含组氨酸的MD平板上筛选His+表型 ,利用G4 18抗性筛选多拷贝酵母菌重组子 ,PCR鉴定含有HBNFcDNA基因与酵母染色体基因组整合的菌株。阳性克隆经甲醇诱导后获得重组人亲肝素性促轴突生长因子 (hrHBNF)在培养液中的分泌表达。将层析纯化的表达产物加入体外培养的大鼠嗜铬细胞瘤 (PC12 )细胞观察其促轴突生长作用。结果 对重组表达载体的序列分析表明目的基因序列与基因库资料完全一致 ,目的基因在该载体中位于α因子分泌信号序列的下游 ,与α因子开放阅读框相连。SDS PAGE蛋白电泳证实诱导表达的产物分子量约为 18kDa ,与文献报道一致。该蛋白产物对于培养的大鼠嗜铬细胞瘤 (PC12 )细胞具有促轴突生长作用。
- 王毅超陈峥嵘陈中伟官孝群宋后燕吴欣刘银坤
- 关键词：基因表达重组蛋白质毕赤酵母体外培养
