吴亚琼
- 作品数：8 被引量：24H指数：3
- 供职机构：北京出入境检验检疫局更多>>
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- 禽流感免疫噬菌体抗体库构建及ELISA检测方法的建立
- 2012年
- 本研究应用噬菌体抗体库技术筛选禽流感亚型病毒Fab抗体,并建立相应ELISA检测方法。用禽流感亚型混合疫苗免疫小鼠,取其脾脏提取总RNA用于扩增免疫球蛋白轻链和重链基因,克隆至噬菌粒pComb3,然后转化入感受态细胞XL1-Blue中,以1012 CFU辅助噬菌体VCSM13进行感染后,获得Fab抗体库容量为8×107 CFU。以H5N1病毒为抗原进行4轮亲和筛选,获得特异性结合的克隆,利用获得的特异性克隆进行ELISA检测方法的建立。
- 邢佑尚汪琳张灿赵胤泽栢亚铎吴亚琼李玉欣
- 关键词：禽流感病毒噬菌体抗体库
- 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒核酸检测标准物质的制备研究被引量：8
- 2012年
- 针对目前口蹄疫病毒核酸扩增检测缺乏标准物质的现状,以口蹄疫病毒亚洲Ⅰ型核酸为模板,分别设计引物扩增具有检测意义的5′端1nt～2208nt的片段(含完整的5′NCR)和3012nt～5155nt片段(含完整1D～2B区域),并克隆于pMD20-T。测序后采用体外转录方法制备2种RNA纯品,进行初步定量稀释后等量混合分装。采用荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验后,委托外部实验室对RNA片段进行拷贝数定值。结果显示,制备的标准品均匀性和稳定性良好。
- 吴亚琼高志强吴延功张鹤晓乔彩霞张利峰单虎尹燕博朱淑芬王慧珊
- 关键词：口蹄疫病毒核酸扩增标准物质
- 猪链球菌2型SLY基因在毕赤酵母中的表达及抗血清的制备
- 猪链球菌（Streptococcus，S.suis）是一种重要的人畜共患病病原，猪感染链球菌病的症状表现不一，高致病性菌株感染猪会导致猪的脑膜炎、关节炎、心内膜炎、肺炎、败血症、流产和突然死亡等疾病。根据荚膜多糖抗原将猪...
- 吴亚琼
- 关键词：猪链球菌2型溶血素分子克隆酵母表达抗血清制备
- 检测伪狂犬病毒gB基因荧光定量PCR方法的建立被引量：8
- 2012年
- 利用DNAMAN软件对GenBank登录的伪狂犬病病毒(PRV)各毒株gB基因序列进行比对分析,选择其保守区域设计合成特异性的引物和TaqMan探针,同时利用普通PCR技术扩增获得全长的伪狂犬病毒gB基因,并克隆到pMD20-T载体上作为阳性标准品。通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了一种快速检测伪狂犬病病毒的荧光定量PCR技术。该检测技术具有较高的灵敏性、特异性和可靠性。对制备的pMD-gB阳性标准品的检测结果表明,所建立的伪狂犬病毒TaqMan荧光定量PCR最低检测极限可达1.50×102拷贝/反应;同时相比于普通PCR方法其灵敏度高100～1 000倍以上,并且重复性好。在对60份临床样品的检测中,荧光定量PCR不仅检出了普通PCR检测为阳性的样品,且检出了2份普通PCR未检出的样品,进一步证实了该方法快速、灵敏性好,可用于PRV感染的早期快速定量检测和肉类食品进出口检疫。
- 朱淑芬朱瑞良乔彩霞高志强张利峰张鹤晓吴亚琼王慧珊
- 关键词：伪狂犬病毒GB基因荧光定量PCR
- 东部马脑脊髓炎病毒荧光RT-PCR检测技术及标准质控品制备研究
- 2014年
- 选取东部马脑脊髓炎病毒代表株进行序列比对分析,选择高度保守的区域,设计合成引物和Taq Man探针。对引物、探针浓度和反应条件进行优化,建立了东部马脑脊髓炎病毒荧光定量RT-PCR检测技术,实现了对东部马脑脊髓炎病毒的快速检测和鉴别。通过体外转录,制备了含有扩增区域核酸片段的东部马脑脊髓炎病毒核酸标准质控品cRNA,经稀释、分装定量、均匀性和稳定性检验后,作为方法的质控品对建立的方法进行评价,结果表明,应用建立的方法对阳性标准品的检测其灵敏度可达10eopies,对197份临床样品检测,表明建立的东部马脑脊髓炎荧光定量RT-PCR检测技术快速、敏感、特异。该方法的建立对该病的快速检测,及时采取相应防治措施、减少疫情散播有重要意义,也为动物及其产品的进出口检疫提供了一种可靠方法。
- 谷强吴亚琼高志强刘环张伟蒲静乔彩霞张鹤晓吴清民
- 西部马脑脊髓炎病毒实时荧光RT-PCR检测方法建立及标准质控品制备被引量：2
- 2013年
- 选取西部马脑炎病毒代表株进行序列比对分析，选择保守区域，设计合成引物和TaqMan探针。经对反应体系和条件进行优化，建立了检测西部马脑炎病毒的实时荧光RT-PCR检测方法，应用建立的方法对西部马脑炎病毒核酸、东部马脑炎病毒核酸、马动脉炎病毒核酸、马疱疹病毒1型核酸、马流感病毒H3N8亚型核酸进行检测，结果表明建立的方法只能检出西部马脑炎病毒核酸，与另外4种病毒核酸无交叉反应。进一步通过体外转录制备了西部马脑炎病毒McMillan株7442-10011的cRNA片段，经拷贝数计算、稀释、分装、均匀性和稳定性检验后，作为质控品对建立的方法进行评价。结果显示，所建立的方法其分析灵敏度可达10拷贝。对197份进口马血样品检测用时仅4小时，表明该检测技术快速、灵敏、特异。因此，本研究建立的方法可作为技术储备用于进口马匹的疫病筛查。
- 谷强吴亚琼高志强刘环张伟蒲静乔彩霞张鹤晓吴清民
- 关键词：实时荧光RT-PCR
- 基于VP1重组蛋白的口蹄疫病毒O型间接ELISA检测技术被引量：2
- 2012年
- 采用RT-PCR方法扩增O型口蹄疫病毒VP1基因片段,将其克隆于pET-32a。将重组质粒转化宿主菌Rosetta,经1.0mmol/L IPTG诱导,外源基因获高效表达。通过Western-blot以及ELISA试验证明,重组VP1蛋白与标准阳性血清发生反应。以纯化的VP1蛋白作为检测抗原包被酶标板建立了检测口蹄疫病毒O型抗体的间接ELISA方法。对355份临床血清样品的检测结果显示,建立的方法与口蹄疫病毒O型液相阻断试剂盒符合率为98.87%。表明建立的方法能够用于口蹄疫病毒O型抗体的快速分型检测。
- 于军超张乐萃高志强张鹤晓马贵平蒲静张利峰吴亚琼王慧珊朱淑芬张伟谷强
- 关键词：VP1基因间接ELISA
- 猪传染性胃肠炎病毒与猪呼吸道冠状病毒荧光RT-PCR鉴别检测方法建立与应用被引量：4
- 2011年
- 本研究根据Genbank登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因和S基因保守区序列设计合成了两对引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测TGEV的方法。该方法能有效地鉴别序列密切相关的猪传染性胃肠炎病毒与呼吸道冠状病毒。与常规RT-PCR试验比较表明,所建立的荧光RT-PCR检测技术快速、敏感,检测时限3个小时以内,具有很好的特异性和重复性。通过对39份临床样品进行检测,结果表明所建立的检测方法直接检测样品中猪传染性胃肠炎病毒。
- 王慧珊高志强王金宝张鹤晓乔彩霞吴亚琼邢佑尚朱淑芬
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒猪呼吸道冠状病毒荧光RT-PCR
