刘海龙
- 作品数：10 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学自动化与计算机技术更多>>
- 一种基于地中海富盐菌和pyrF基因的遗传操作系统及其应用
- 本发明公开了一种基于地中海富盐菌和pyrF基因的遗传操作系统及其应用。该遗传操作系统包括重组嗜盐古菌和重组质粒载体；重组嗜盐古菌按照包括如下步骤的方法制备得到：使含有SEQ ID NO：1所示蛋白的编码基因的出发嗜盐古菌...
- 向华刘海龙
- 文献传递
- 极端嗜盐古菌中CRISPR的进化分析
- CRISPRs是广泛分布于原核生物界的一类特殊的正向重复序列,它通过产生一系列小分子RNA(crRNA)指导Cas蛋白复合体降解同源的外源核酸序列,从而能够抵御病毒侵染,限制基因的横向转移,甚至可能通过降解内源基因的转录...
- 李明韩静刘海龙向华
- 文献传递
- 一种基于西班牙盐盒菌和pyrF基因的遗传操作系统及其应用
- 本发明公开了一种基于西班牙盐盒菌和pyrF基因的遗传操作系统及其应用。该遗传操作系统包括重组嗜盐古菌和重组质粒载体；重组嗜盐古菌按照包括如下步骤的方法制备得到：使含有SEQ ID NO：1所示蛋白的编码基因的出发嗜盐古菌...
- 向华刘海龙
- 文献传递
- 基于PHA颗粒-PhaP标签和内含肽元件的极端嗜盐古菌蛋白的表达纯化系统
- 2014年
- 【目的】建立一个基于PHA颗粒-PhaP标签的简便实用的极端嗜盐古菌蛋白表达纯化系统,并探讨嗜盐古菌内含肽在该系统优化中的应用。【方法】以嗜盐古菌-大肠杆菌穿梭载体pWL502为基本骨架,构建带有嗜盐古菌强启动子和PhaP融合标签的表达载体;在地中海富盐菌phaP缺陷株(ΔphaP)中融合表达目的基因,通过蔗糖密度梯度离心分离纯化结合于PHA颗粒上的PhaP融合蛋白;在phaP基因与多克隆位点之间引入特定的嗜盐古菌内含肽元件,尝试通过定点突变改变该内含肽的剪切活性。【结果】成功构建了以PhaP作为N端融合标签的表达载体pPM以及作为C端融合标签的载体pIP;在phaP基因簇强启动子控制下,二者均实现了目标蛋白的高效表达;通过PHA颗粒介导的蛋白分离纯化策略,实现了以PhaP为融合标签的目标蛋白的分离纯化;发现内含肽序列Hbt21在地中海富盐菌中保持了高效的剪接活性,通过定点突变其C端末位氨基酸天冬酰胺(N182)及邻位的丝氨酸(S183)失活了该内含肽的C端剪接活性。【结论】首次建立了一个基于PHA颗粒-PhaP标签的简便节约的极端嗜盐古菌蛋白表达纯化系统,并确定了嗜盐古菌型内含肽C端剪接的活性位点,为该内含肽将来应用于PhaP融合蛋白的标签去除奠定了基础。
- 伍锦花蔡双凤刘海龙侯靖韩静周坚向华
- 关键词：极端嗜盐古菌内含肽
- 极端嗜盐古菌PHA合成代谢的遗传与功能基因组学研究
- @@极端嗜盐古菌生产生物可降解塑料(聚经基脂肪酸酯，PHA)的研究始于20世纪80年代，但由于受嗜盐古菌遗传操作技术等的制约，国际上嗜盐古菌PHA的研究至本世纪初仍未进入到基因水平。与细菌相比，嗜盐古菌生产PHA具有一些...
- 向华韩静陆秋鹤刘海龙冯博蔡双凤周坚
- 关键词：极端嗜盐古菌可降解塑料功能基因组学合成代谢
- 文献传递
- 极端嗜盐古菌Haloarcula hispanica PHA代谢调控的功能基因组学研究
- 已完成了极端嗜盐古菌Haloarcula hispanica CGMCC 1.2049全基因组测序。其基因组大小为3,890,005bp,由3个环型复制子组成。共编码3871个预测的蛋白基因、48个tRNAs基因和3组r...
- 刘海龙韩静刘晓青向华
- 文献传递
- 西班牙盐盒菌蛋白组参考图及其PHA代谢调控的比较蛋白组和转录组分析
- 西班牙盐盒菌(Haloarcula hispanica)是一株可以在胞内积累PHA的嗜盐古菌,对其PHA生物合成途径及其可能的调控机制进行深入研究,将会极大地促进对极端嗜盐古菌PHA生成菌的性状和代谢途径的改造。首先,建...
- 刘海龙韩静冯德琴罗元明周坚向华
- 文献传递
- 地中海富盐菌中phaB基因的鉴定及PHBV前体供应途径的分析被引量：2
- 2010年
- 【目的】进一步揭示地中海富盐菌(Haloferax mediterranei)中聚羟基丁酸羟基戊酸酯[poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate),PHBV]前体供应的途径并鉴定其中的关键基因。【方法】将细菌及其他古菌中已鉴定的与聚羟基脂肪酸酯前体(3-羟基脂酰-CoA)供应相关的酶与地中海富盐菌预测的全蛋白质组进行同源性比对,得到相似性比较高的5个基因,分别命名为:phaB1,phaB2,phaJ1,phaJ2和phaJ3。首先利用RT-PCR检测了5个基因在产PHBV的条件下的转录情况。然后利用同源重组双交换的方法,将5个基因分别或组合敲除,得到突变株:ΔphaB1,ΔphaB2,ΔphaJ1,ΔphaJ2,ΔphaJ3,ΔphaB1phaB2,ΔphaJ1phaJ2和ΔphaJ1phaJ2phaJ3。并在突变株ΔphaB1phaB2中分别互补phaB1和phaB2基因。【结果】无论是将3个phaJ基因单独敲除,还是组合敲除,对地中海富盐菌PHBV的积累都没有明显影响。单独敲除phaB1基因对PHBV的积累没有明显影响,单独敲除phaB2基因导致突变株PHBV产量明显下降,而且3-HV单体组分所占的摩尔比例也有所下降。将phaB1和phaB2基因同时敲除后,得到的突变株不再产生PHBV。【结论】在地中海富盐菌中可能主要存在由乙酰-CoA和丙酰-CoA提供PHBV前体的途径,其中编码乙酰乙酰-CoA还原酶的两个基因即为phaB1和phaB2。
- 冯博蔡双凤韩静刘海龙周坚向华
- 关键词：聚羟基脂肪酸酯
- 一种基于西班牙盐盒菌和pyrF基因的遗传操作系统及其应用
- 本发明公开了一种基于西班牙盐盒菌和pyrF基因的遗传操作系统及其应用。该遗传操作系统包括重组嗜盐古菌和重组质粒载体；重组嗜盐古菌按照包括如下步骤的方法制备得到：使含有SEQ ID NO：1所示蛋白的编码基因的出发嗜盐古菌...
- 向华刘海龙
- 一种基于地中海富盐菌和pyrF基因的遗传操作系统及其应用
- 本发明公开了一种基于地中海富盐菌和pyrF基因的遗传操作系统及其应用。该遗传操作系统包括重组嗜盐古菌和重组质粒载体；重组嗜盐古菌按照包括如下步骤的方法制备得到：使含有SEQ ID NO：1所示蛋白的编码基因的出发嗜盐古菌...
- 向华刘海龙
- 文献传递
