刘春杰
- 作品数：18 被引量：43H指数：3
- 供职机构：天津大学化工学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项军队医药卫生科研基金天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学石油与天然气工程化学工程更多>>
- 大引物PCR进行定点突变的方法
- 本发明提供一种大引物PCR进行定点突变的方法。首先由突变引物和相应的外侧引物进行第一步PCR，其产物即大引物不需纯化，与加入另一外侧引物引发第二轮PCR扩增出目标片段。本发明克服了常规大引物和外侧引物退火温度(Tm)相差...
- 赵广荣祝琳琪元英进刘春杰黄超
- 文献传递
- 醋酸铅对原代培养大鼠皮层神经元的毒性效应被引量：1
- 2010年
- 目的探讨醋酸铅对体外培养大鼠皮层神经元的毒性效应。方法用不同浓度的醋酸铅(50、100和200μg/ml)染毒后,原代培养乳大鼠皮层神经元,通过中性红染色和PI-Hoechst 33342双染色法观察醋酸铅作用6、12、24和48h对细胞存活的影响;结果PI-Hoechst 33342双染色结果表明,各组醋酸铅染毒12h后,部分细胞出现核固缩,随着醋酸铅浓度的增加和培养时间的延长,出现核固缩细胞增多,呈红色荧光细胞比例增加,凋亡细胞增加。对照组细胞凋亡比例明显低与中浓度和高浓度醋酸铅组P<0.05)。中性红染色结果表明,不同浓度醋酸铅作用皮层神经元不同时间后各染铅组细胞活性随时间的延长而降低,但除高醋酸铅染毒组在24和48h较6h差异有统计学意义(P<0.05)外,其余差异均无统计学意义(P>0.05)。各染铅组细胞活性随染铅剂量的增加而降低,尤其是高铅组与对照组及低铅组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低、中、高浓度醋酸铅(50、100、200μg/ml)作用皮层神经元12h后细胞存活都明显低于正常对照组,并呈剂量和时间依赖关系。
- 哈小琴陆润兰蒋军军刘春杰董芳
- 关键词：醋酸铅皮层神经元毒性
- 原油渐次蒸馏节能设备和工艺方法
- 本发明属于原油渐次蒸馏节能设备和工艺方法，是依原油渐次蒸馏连接万式次为：闪蒸塔、初馏塔、初减压塔、浅减压塔和深减压塔；在闪蒸塔与初馏塔之间设置有电脱盐装置和换热网络，初馏塔和初减压塔之间设置有换热网络或初减压炉，初减压塔...
- 李鑫钢王子君李洪朱天榆罗铭芳姜斌刘春杰覃向荣陈宁许力强
- 文献传递
- 携带KGF基因的减毒沙门氏菌（SPK）的构建及其治疗作用
- 角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor, KGF)可调节多种上皮细胞的增殖、迁移和分化过程,目前已用于治疗多种疾病。但是,KGF蛋白在体内的半衰期较短,而大剂量多次给药又会引起严重的不良反...
- 刘春杰
- 关键词：KGF减毒沙门氏菌皮肤损伤肺损伤溃疡性结肠炎
- 文献传递
- 重组低出血抗凝蛋白在毕赤酵母中的中试发酵工艺研究及其纯化与鉴定被引量：5
- 2013年
- 目的：通过对毕赤酵母中试发酵工艺的改进，建立一种简便可行的重组低出血抗凝蛋白（EH）的中试发酵工艺，为EH蛋白的放大生产研究奠定基础。方法：首先通过摇瓶培养绘测毕赤酵母工程菌的生长曲线，然后根据生长曲线，将对数生长期的菌种经过两级摇瓶培养放大后，直接接种到500L的发酵罐中放大培养，通过发酵液的D_600nm值、溶氧值（D02）及菌体湿重动态监测细菌的生长状态，并用流加甲醇的方法诱导表达目的蛋白；表达上清经超滤、两步离子交换层析纯化获得目的蛋白；用非还原型SDS-PAGE和HPLC检测目的蛋白的纯度；用SDS-PAGE和质谱方法分析目的蛋白的相对分子质量；用Western印迹验证目的蛋白；用凝块法检测目的蛋白的抗凝活性。结果：发酵结束时，上清中蛋白含量达1．41g／L，经后期分离纯化，得到约21gEH蛋白，SDS-PAGE分析可见EH蛋白在还原状态下表观相对分子质量约为13．2×10^3±0．2×10^3，质谱分析相对分子质量约为7.3×10^3±0．73×10^3；Western印迹表明检测条带为目的蛋白，能被抗水蛭素抗体特异性结合；非还原型SDS-PAGE和HPLC测得EH蛋白的纯度均高于95％；凝块法检测EH蛋白的抗凝比活性为512～1024ATU／mg。结论：建立了一条简便可行的EH蛋白的中试放大发酵生产工艺。
- 郝木强李彦英刘春杰王秀冬刘晶晶李艳琪刘洋刘洋吴祖泽
- 关键词：水蛭素重组蛋白毕赤酵母中试放大
- 原油渐次蒸馏节能设备和工艺方法
- 本发明属于原油渐次蒸馏节能设备和工艺方法，是依原油渐次蒸馏连接方式次为：闪蒸塔、初馏塔、初减压塔、浅减压塔和深减压塔；在闪蒸塔与初馏塔之间设置有电脱盐装置和换热网络，初馏塔和初减压塔之间设置有换热网络或初减压炉，初减压塔...
- 李鑫钢王子君李洪朱天榆罗铭芳姜斌刘春杰覃向荣陈宁许力强
- 文献传递
- 携带KGF基因重组腺病毒载体的构建与鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:构建携带角化细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)的腺病毒载体并观察其在细胞中的表达。方法:通过PCR从pcDNA3-KGFpIRES2-EGFP-KGF质粒中扩增出目的片段KGF,定向克隆至穿梭质粒载体pShuttle-CMV中,构建pShuttle-KGF。经酶切及测序鉴定后,再将KGF定向克隆至重组腺病毒骨架载体pAdxsi,构建携带KGF的重组腺病毒载体(pAdxsi-GFP-KGF)。酶切鉴定正确后,转染人胚肾细胞系HEK293细胞,进行重组腺病毒的包装、生产及纯化,半数组织感染量法(50%tissue culture infective dose,TCID50)测定重组腺病毒滴度。用重组腺病毒及空病毒Ad-null(作为阴性对照)转染人肺腺癌细胞A549,荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白的表达,ELISA鉴定KGF的表达。结果:成功构建了携带KGF的重组腺病毒,纯化后病毒滴度达1.6×1010 pfu/ml。Ad-KGF转染A549细胞后24 h在荧光显微镜下即可观察到绿色荧光蛋白,48 h表达更强,ELISA实验证实细胞表达KGF。结论:成功构建了携带KGF的重组腺病毒,为下一步研究KGF用于肺纤维化治疗研究奠定了实验基础。
- 贾庆华哈小琴吕同德刘春杰
- 关键词：角化细胞生长因子腺病毒
- 醋酸铅对小鼠星形胶质细胞的凋亡作用被引量：3
- 2010年
- 目的探讨醋酸铅对小鼠星形胶质细胞的凋亡作用,为进一步研究铅对血—脑屏障的损伤提供理论基础。方法用不同浓度醋酸铅(0、5、10、20、40μmol/L)染毒对数生长期小鼠星形胶质细胞C8(6、12、24、48 h)后,MTT法检测细胞生长情况;倒置相差显微镜观察细胞形态;分光光度计检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力、丙二醛(MDA)含量,了解细胞损伤程度;免疫组化检测P53、Bax、Bcl-2的表达;PI-Hoechst33342染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果不同浓度醋酸铅染毒不同时间,各染毒组细胞生长活力较对照组明显降低(P<0.01),并存在浓度与时间依赖关系;醋酸铅(5、10μmol/L)染毒24 h组,形态学观察细胞密度较对照组降低,突触缩短变细,细胞间连接减少;培养上清液中染毒组LDH、MDA含量较对照组明显升高(P<0.01),P53、Bax表达上升,Bcl-2表达降低;PI-Hoechst33342双重染色和流式细胞仪检测显示,染毒组细胞凋亡率较对照组明显升高。结论醋酸铅可明显抑制小鼠星形胶质细胞生长,并通过Bax/Bcl-2比值升高促使凋亡,进而影响血—脑屏障。
- 蒋军军贾庆华刘春杰董芳吕同德哈小琴
- 关键词：醋酸铅星形胶质细胞凋亡血-脑屏障
- 利用基因敲除技术缺失毕赤酵母羧肽酶Y基因的初步研究
- 2012年
- 目的通过基因敲除技术缺失毕赤酵母编码的羧肽酶Y(carboxypeptidase Y,CPY)基因cpy,观察其对毕赤酵母生长和外源蛋白表达的影响。方法通过PCR方法扩增出内部含有潮霉素B抗性基因的cpy同源序列;通过电转法将同源序列转入GS115-EH感受态细胞中,并用潮霉素B筛选出阳性克隆。用平板显色法测定阳性克隆菌的羧肽酶活性,同时用PCR法鉴定阳性克隆菌的cpy基因是否缺失。对cpy基因缺失的GS115-EH△cpy菌,分别用YPD和BMGY-BMMY培养研究其生长特性;用BMMY培养基进行甲醇诱导表达外源蛋白,观察其蛋白表达的特性。结果 GS115-EH△cpy的羧肽酶基因cpy被成功敲除,羧肽酶活性丧失。YPD培养条件下,GS115-EH△cpy生长后期的D600明显低于GS115-EH,而用BMMY诱导培养基,GS115-EH△cpy的生长明显改善,但仍然低于对照菌。蛋白电泳结果显示甲醇诱导GS115-EH△cpy的蛋白表达量也低于对照菌。结论 GS115-EH△cpy的cpy基因被成功敲除,在YPD培养条件下,其生长低于对照菌,在BMMY培养条件下,其生长明显改善,但仍然较对照菌差,而且其外源蛋白的表达也低于对照菌。
- 王文文郝木强刘春杰靳继德吴祖泽
- 关键词：毕赤酵母羧肽酶基因敲除
- 壳聚糖无纺布敷料对切割伤伤口止血和促进愈合作用的研究被引量：19
- 1999年
- 制备家兔切割伤模型，分别以壳聚糖敷料和纱布包扎创面，血止后以氰化高铁血红蛋白试剂及光度比色法检测敷料中血红蛋白的含量。借此估计出血量。重新包扎创面，并于分阶段取材后应用常规病理学手段结合图像分析法观察病变。结果表明：壳聚糖包扎组出血量明显少于纱布对照组。伤后９天，壳聚糖治疗组创面肉芽组织层较厚于油纱布对照组，其中胶原纤维含量亦较多，伤口愈合较快。
- 谷庆阳高亚兵陈肖华李永兰刘春杰杨红崔玉芳王德文
- 关键词：壳聚糖伤口愈合切割伤止血
