刘振方
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：解放军174医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 利用MALDI-TOF质谱比较水牛卵泡液多肽变化的研究被引量：2
- 2012年
- 为检测卵泡内小肽的表达,采用基质辅助激光解离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)建立了成熟卵泡液的多肽表达模型,比较小卵泡(直径<4mm)、中等卵泡(直径4～8mm)和成熟卵泡(直径>8mm)的多肽表达变化。结果表明,3种形态的卵泡液存在12个显著差异多肽,其中在成熟卵泡内上调6个,下调有5个;在中等卵泡内上调4个,下调5个。其中分子质量约为1746u的多肽在成熟卵泡中特异性表达,可作为卵泡成熟的潜在生物标志物之一。
- 付强刘振方杨丽张明卢克焕
- 关键词：水牛卵泡液MALDI-TOF多肽特异性表达
- 水牛卵母细胞成熟前后的差异蛋白质组的分析
- 2015年
- 本试验以水牛卵母细胞为研究对象,通过基于双向电泳-质谱技术的蛋白质组学研究手段,鉴定卵母细胞成熟前后表达量存在变化的蛋白质并进行验证。通过优化方法建立水牛卵母细胞蛋白质双向电泳分离的技术体系,通过双向电泳(2-DE)获得成熟前后的卵母细胞蛋白质电泳图谱,软件分析得到差异表达蛋白质,对差异蛋白质进行飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)分析,部分差异蛋白质合成抗体进行Western blot验证。结果表明,2组卵母细胞样品均获得约300个蛋白质斑点的双向电泳图谱。经ImageMaster软件比对分析,共发现在水牛卵母细胞成熟前后有27个差异蛋白质,其中表达上调15个,表达下调12个。将差异蛋白质斑点胶内酶解后用于MALDITOF/TOF飞行时间质谱鉴定,成功鉴定了6个蛋白质,包括主要穹窿蛋白(MVP)、热激蛋白60(HSP60)、Ras应答结合原件蛋白1(RREB1)等。Western blot结果表明,HSP60蛋白表达与双向电泳结果一致。本试验发现一批在卵母细胞成熟前后的差异表达蛋白质并进行表达量验证,推测HSP60蛋白可能在体外成熟时起到保护卵母细胞和物质转运的作用。
- 付强刘振方李敏玲黄渝淋梁贤威张明
- 关键词：水牛卵母细胞成熟双向电泳质谱鉴定BLOT
- 水牛精子蛋白质组双向电泳体系的建立和优化被引量：5
- 2012年
- 建立和优化一种适合水牛精子蛋白质组学研究的双向电泳技术。以水牛精子为研究对象,比较两种不同配方的裂解液,以及不同上样量对其2-DE图谱质量的影响。结果显示,以7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4%CHAPS、1%DTT、0.5%Cocktail of protease inhibitors为裂解液,24 cm胶条上样量200μg时,可获得较好的精子总蛋白质2-DE图谱。运用ImageMaster 2-Dplatinum分析软件检测出约500个蛋白质点,蛋白质大部分分布在等电点5-7之间,分子量范围约40-90 kD。
- 薛雯杨丽付强刘振方张明卢克焕
- 关键词：水牛精子双向电泳蛋白质组学
- 水牛卵母细胞成熟前后差异蛋白质组的初步研究
- 本试验利用2DE SDS-PAGE技术结合质谱鉴定技术，分离鉴定水牛卵母细胞成熟前后蛋白质的变化，以阐明卵母细胞的发育规律，为提高卵母细胞体外成熟的研究奠定的理论基础。
- 刘振方付强蒋丽杨丽黄愉淋张明卢克焕
- 关键词：水牛胚胎学卵母细胞双向凝胶电泳体外成熟
- 水牛卵泡液液相色谱分离及差异蛋白质分析被引量：1
- 2012年
- 本研究采用液相色谱-质谱分离鉴定技术,比较不同直径卵泡液(直径<2mm、直径2～4mm、直径>4mm)的蛋白质组分差异,收集显著差异的馏分,还原烷基化处理后酶解成肽段,再经反相色谱二次分离后质谱鉴定。结果表明,在优势卵泡中(直径>4mm)存在显著高表达的蛋白质峰,质谱鉴定结果为转铁蛋白(transferrin,TRF)。转铁蛋白的功能和表达的变化提示,该蛋白质的高表达可作为潜在排卵的标志物之一。同时,本研究采用的LC-MS技术将为卵泡液大规模蛋白质组分离和表达谱构建提供参考。
- 付强杨丽刘振方张明卢克焕
- 关键词：水牛卵泡液蛋白质液相色谱分离转铁蛋白
- 水牛卵母细胞及卵泡液蛋白质组的初步研究
- 本研究以水牛卵母细胞和卵泡液为实验材料，通过双向电泳、液相色谱和质谱技术分析卵母细胞体外成熟过程中以及卵泡在发育过程中蛋白质表达的差异性。论文共包括两部分，第一部分为文献综述部分，第二部分为研究部分。
研究一：本试...
- 刘振方
- 关键词：水牛卵母细胞双向凝胶电泳
