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重组pcDNA3.1-hBMP-2转染兔ADSCs诱导成骨分化的实验研究: 目的:构建人骨形态发生蛋白—2基因的真核表达载体—重组pcDNA3.1—hBMP—2质粒,利用脂质体2000介导pcDNA3.1—hBMP—2转染兔脂肪干细胞,从而探讨在自身表达的hBMP—2诱导下兔脂肪干细胞成骨分化的...; 安荣泽刘凡凡王兆杰齐新文陈军平; 关键词：骨形态发生蛋白脂肪源性干细胞; 文献传递

Ad5-增强型绿色荧光蛋白和rAAV2-增强型绿色荧光蛋白转染脂肪间充质干细胞的对比: 2010年; 背景:利用基因转染技术诱导脂肪间充质干细胞成软骨细胞已有报道,但腺病毒和腺相关病毒转染脂肪间充质干细胞各有不同,且腺相关病毒载体能否转染脂肪间充质干细胞众说不一。目的:观察Ad5-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)和rAAV2-EGFP转染脂肪间充质干细胞后增强型绿色荧光蛋白的表达及转染后细胞增殖能力的变化。方法:脂肪组织来源于6月龄新西兰大白兔颈背部。机械消化和酶消化法分离提取脂肪间充质干细胞,体外培养扩增。分别采用腺病毒载体(Ad5-EGFP)和腺相关病毒载体(rAAV2-EGFP)转染脂肪间充质干细胞,并观察EGFP的表达。rAAV2-EGFP转染后,需加入2μL丁酸钠(1mol/L)。采用MTT法检测基因转染对脂肪间充质干细胞增殖能力的影响。结果与结论:体外培养的脂肪间充质干细胞呈扁平状和长梭形,细胞形态均一,传代稳定。Ad5-EGFP组和rAAV2-EGFP组均能观察到较多荧光细胞,转染效率分别达到88%和83%。腺病毒和腺相关病毒载体均能转染脂肪间充质干细胞,且转染效率很高。腺相关病毒需要借助丁酸钠来提高其基因表达水平。; 袁小洪安荣泽王兆杰贾婀娜齐新文陈金平杨晋刘凡凡; 关键词：腺相关病毒脂肪间充质干细胞增强型绿色荧光蛋白转染

脂质体介导的hBMP—2基因转染对兔ADSCs的生长增殖的影响: 目的:探讨脂质体介导的人骨形态发生蛋白—2(human bone morphogenetic protein hBMP—2)基因转染对兔脂肪干细胞(adipose—adrived stem cells ADSCs)生长、...; 安荣泽刘凡凡王兆杰齐新文袁小洪赵俊延杨晋赵豪胡小军陈军平温广宇; 关键词：骨形态发生蛋白脂肪干细胞脂质体转染生长增殖; 文献传递

重组pcDNA3.1-hBMP-2转染兔ADSCs体外诱导成骨分化的实验研究: 目的：构建人骨形态发生蛋白-2基因的真核表达载体-重组质粒pcDNA3.1-hBMP-2,利用脂质体LipofectamineTM 2000介导pcDNA3.1-hBMP-2转染兔脂肪干细胞,从而探讨在自身表达的hBMP...; 刘凡凡; 关键词：骨形态发生蛋白-2 脂肪源性干细胞转染骨组织工程; 文献传递

重组腺相关病毒介导转化生长因子-β1基因修饰ADSCs成软骨细胞的研究被引量：3: 2010年; 我们通过应用重组腺相关病毒介导转化生长因子-β1（TGF-β1）基因转染脂肪间充质干细胞，观察转染基因的表达及软骨细胞基质糖胺聚糖和Ⅱ型胶原合成。; 王兆杰安荣泽袁小洪齐新文杨晋刘凡凡; 关键词：转化生长因子-Β1 重组腺相关病毒介导成软骨细胞 ADSCS 基因修饰软骨细胞基质

腺相关病毒介导TGF-β1修饰脂肪间充质干细胞成软骨细胞: 目的:研究腺相关病毒介导TGF—β1修饰脂肪间充质干细胞后,诱导其向软骨细胞转化。方法:选取6月龄新西兰大白兔,分离提取ADSCs并传代培养。选用第三代ADSCs进行转染。转染分三组:分别为TGF—β1载体组(rAAV2...; 安荣泽王兆杰袁小洪齐新文陈军平刘凡凡; 关键词：脂肪间充质干细胞腺相关病毒转染; 文献传递

脂质体介导的hBMP-2基因转染对兔ADSCs的生长增殖的影响: 目的探讨脂质体介导的人骨形态发生蛋白-2 (human bone morphogenetie protein hBMP-2)基因转染对兔脂肪干细胞(adipose-adrived stem cells ADSCs)生长...; 安荣泽王兆杰齐新文刘凡凡袁小洪赵俊延; 关键词：骨形态发生蛋白脂肪干细胞脂质体生长增殖

脂质体介导人骨形态发生蛋白2基因转染对兔脂肪干细胞生长增殖的影响被引量：2: 2010年; 背景:脂质体对细胞具有毒副作用,而外源性基因的胞内导入亦在细胞的代谢方面有所影响,因此脂质体介导人骨形态发生蛋白2基因转染脂肪干细胞对其在生长、增殖方面有无显著影响值得探讨。目的:观察脂质体介导的人骨形态发生蛋白2基因转染对兔脂肪干细胞生长、增殖的影响。方法:从兔脂肪组织中提取脂肪干细胞,体外培养传代,取第4代细胞分别转染人骨形态发生蛋白2基因和增强型绿色荧光蛋白基因,倒置显微镜下连续观察转染后的细胞形态变化及生长情况。荧光显微镜下计数转染后48h可发绿色荧光细胞的个数估算瞬时转染效率,MTT法绘制染后细胞的生长曲线,并计算群体倍增时间。结果与结论:转染后48h,细胞体积变大,胞浆丰富,部分呈圆形或椭圆形改变。荧光显微镜下计数瞬时转染率为(18.0±0.42)%。MTT法绘制细胞生长曲线发现:转染后细胞较未转染的细胞生长速率略慢,但转染与未转染组细胞的生长曲线大致一样,均呈"S"形,且两者的总体趋势变化不大。转染后人骨形态发生蛋白2组的细胞群体倍增时间为55.51h,EGFP组群体倍增时间约为53.58h,未转染组的群体倍增时间46.10h,差异无显著意义(P>0.05)。提示脂质体可以介导人骨形态发生蛋白2基因和绿色荧光蛋白基因转染兔脂肪干细胞,并对细胞的生长、增殖无明显影响。; 安荣泽刘凡凡王兆杰袁小洪齐新文赵俊延杨晋赵豪胡小军陈军平温广宇; 关键词：骨形态发生蛋白脂肪干细胞脂质体转染生长增殖

兔软骨基质支架与脂肪干细胞的生物相容性被引量：6: 2008年; 背景:软骨基质主要为Ⅱ型胶原和葡萄糖胺聚糖,它是软骨细胞分化和发育的先天环境,能促进干细胞向软骨细胞分化。目的:观察兔软骨基质支架与同种异体脂肪干细胞在体外的生物相容性。设计、时间及地点:观察实验,于2007-12/2008-05在遵义医学院珠海校区中心实验室完成。材料:取兔新鲜耳郭软骨组织在蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟的保护下利用低渗透压和TritonX-100脱去细胞成分制备软骨基质。脂肪干细胞由新西兰大白兔颈部脂肪组织经剪碎、Ⅰ型胶原酶消化并离心后获得。方法:将2×l07L-1的脂肪干细胞悬液0.2mL滴在软骨基质支架表面,置于37℃、体积分数为0.05CO2饱和湿度的培养箱中静置4h后加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM培养液培养。主要观察指标:采用倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞在支架上的黏附、生长及增殖情况,同时计算细胞黏附率,并采用二甲氧唑黄比色法检测细胞增殖趋势。结果:扫描电镜和倒置显微镜观察到脂肪干细胞在软骨基质支架上黏附和变形,其黏附率为93.7%;苏木精-伊红染色见细胞向支架深层生长;二甲氧唑黄比色法测定细胞生长曲线表明细胞在支架上有增殖的趋势。结论:兔软骨脱细胞基质与同种异体脂肪干细胞在体外具有良好的生物相容性。; 张强安荣泽王兆杰刘凡凡袁晓洪杨晋; 关键词：脂肪干细胞细胞外基质软骨软骨组织工程生物相容性

重组pcDNA3.1-hBMP-2转染兔脂肪干细胞体外诱导的成骨分化: 2011年; 背景:骨形态发生蛋白2具有很强的诱导干细胞成骨活性。目的:构建人骨形态发生蛋白2基因真核表达载体,探讨其转染脂肪干细胞后的成骨效果。方法:通过噬菌斑原位杂交筛选人混合细胞cDNA文库获得人骨形态发生蛋白2基因,与真核表达载体pcDNA3.1-连接,构建重组质粒pcDNA3.1-hBMP-2。利用脂质体LipofectamineTM2000分别介导人骨形态发生蛋白2基因、EGFP基因转染第4代脂肪干细胞,并经G418进行筛选。结果与结论:酶切鉴定及DNA测序结果证实重组质粒pcDNA3.1-hBMP-2构建成功。经计算脂质体介导的脂肪干细胞瞬时转染率为(18.0±0.42)%,并经过G418筛选后获得了稳定转染的细胞。细胞生长曲线表明转染后对脂肪干细胞生长、增殖无明显影响。ELISA检测发现人骨形态发生蛋白2组的人骨形态发生蛋白2因子表达量均高于EGFP组及未转染组,且能够稳定表达。经人骨形态发生蛋白2基因转染的脂肪干细胞的Ⅰ型胶原含量、碱性磷酸酶活性以及钙结节数目均比EGFP组及未转染组有明显升高。; 安荣泽王兆杰刘凡凡齐新文袁小洪陈军平赵俊延胡小军杨晋赵豪; 关键词：骨形态发生蛋白2 脂肪源性干细胞转染骨组织工程

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刘凡凡

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