兰志刚
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- HBD-3基因的乳腺特异性表达载体的构建及真核表达被引量：3
- 2009年
- 为了制备高效表达人β-防御素-3基因的转基因奶牛提供可靠的核移植供体细胞,本试验采用RT-PCR从人胎盘组织获得人β-防御素3cDNA,通过双酶切法将目的基因片段hBD插入到质粒pBCP之间,最后再通过双酶切法将目的片段BCD插入到真核表达载体pEGFP-C1中,最终构建乳腺特异性表达载体pEBCD。脂质体介导法转染奶牛胎儿成纤维细胞G418,抗性筛选3-4周后,经PCR、RT-PCR扩增检测和报告基因EGFP表达检测,得到稳定整合外源基因的转基因供体细胞;同时检测稳定转染的奶牛乳腺上皮细胞系的上清液,检测到重组人β-防御素-3蛋白可以在奶牛乳腺上皮细胞组织特异性表达。
- 彭巍兰志刚马晶晶王保垒张涌
- 关键词：EGFP报告基因供体细胞核移植
- 逆转录病毒载体介导的人溶菌酶基因在乳腺细胞的表达
- 目前大多数转染实验使用的是脂质体瞬时转染,外源基因随着细胞的传代可能丢失。近来,由于逆转录病毒载体显示出外源基因能高效、稳定地转入宿主基因组,被广泛应用于人和动物的基因治疗及转基因动物制作。本研究利用目前应用较多也更为安...
- 兰志刚
- 关键词：溶菌酶基因乳腺上皮细胞逆转录病毒载体
- 文献传递
- 猪胎儿神经干细胞的分离培养和分化被引量：2
- 2009年
- 本研究旨在从猪胎儿脑组织中分离培养神经干细胞,观察神经干细胞生长特性和体外增殖、分化特点。利用神经干细胞培养体系,从胎龄30 d的猪胎儿脑组织中分离培养神经干细胞并诱导神经干细胞贴壁分化,采用RT-PCR技术检测干细胞和分化细胞表面标志或相关基因。结果成功分离培养出神经干细胞,神经干细胞具有分化潜能。神经干细胞中Nestin表达强阳性,β-actin、DCX、Hes1、Oct4、Desmin、CD-90、Nanog和Sox2表达阳性;体外诱导的神经干细胞可以分化为星形胶质细胞(表达GFAP)、少突胶质细胞(表达GalC)和神经元细胞(表达NF、NSE和MAP2)。结果提示,从猪胎儿脑组织分离神经干细胞具有可行性和有效性,神经干细胞具有自我更新、增殖和分化潜能。
- 郑月茂兰志刚赵晓娥刘军牛雅静
- 关键词：神经干细胞细胞标记细胞分化
- pEGFP-hTERT真核表达载体的构建及转染牛乳腺细胞方法的优化被引量：7
- 2009年
- 针对牛乳腺细胞体外培养存活周期短、转染效率低等特点,分别采用Ⅰ型、Ⅱ型胶原酶消化培养法及组织贴壁培养法,比较了牛乳腺细胞的生长、迁移、分化和凋亡等一系列特征。同时构建了携带绿色荧光蛋白报告基因的端粒酶融合表达载体pEGFP-hTERT,采用脂质体分别转染两种真核表达载体pEGFP-hTERT、pEGFP-C1,通过比较载体不同浓度、传代细胞转染适合密度及生长活力、转染后的荧光强度等检测转染效率。结果表明,第3代细胞接种密度大约70%,浓度为350 ng/μL的载体适合于牛乳腺细胞的转染,转染效率大约为25%。试验结果为牛乳腺细胞体外转基因研究奠定了技术基础。
- 闫晶贺小英潘春留兰志刚张涌
- 关键词：牛乳腺上皮细胞胶原酶转染
