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Tec酪氨酸蛋白激酶参与肝癌的多药耐药: 目的:Tec是TEC(Tyrosine kinase expressed in hepatocelluar carcinoma,TEC)非受体型酪氨酸蛋白家族中的一个成员,具有PH、TH、SH3、SH2和Kinase d...; 余科科李菲菲郑红倪芳储著朗瞿成奎汪思应; 关键词：TEC HGF; 文献传递

SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突变的肥大细胞对IL3呈高增殖敏感性被引量：8: 2010年; 目的研究SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突变的肥大细胞对白细胞素3(IL3)呈高增殖敏感性的机制。方法从野生型(WT组)、SHP-2杂合突变型(SHP-2D61G/+)小鼠骨髓中获取髓系细胞,运用细胞集落形成实验观察髓系细胞集落形成能力,用不同剂量的IL30、0.2、2.0、10.0ng/ml)诱导比较两组髓系细胞形成集落数的差异。从髓系细胞中分离培养出肥大细胞,MTS法观察肥大细胞在IL3诱导下的细胞增殖性,Westernblot比较肥大细胞中Erk、Akt的表达及磷酸化水平,免疫共沉淀和Westernblot检测肥大细胞中SHP-2与Gab2结合能力。结果 SHP-2D61G/+组比WT组的髓系细胞集落形成能力增强;IL3诱导下的肥大细胞在SHP-2D61G/+组显示了更高的增殖活性;SHP-2D61G/+组肥大细胞中Erk和Akt的磷酸化水平较WT组明显升高;SHP-2D61G/+杂合突变后与Gab2结合能力增高。结论 SHP-2D61G/+的肥大细胞对IL3呈高增殖敏感性,其分子机制可能与SHP-2D61G/+与Gab2的结合能力增强,从而进一步参与对IL3介导的Ras-Erk、PI3K-Akt信号通路的正调控作用有关。; 霍寅萍储著朗余科科郑红瞿成奎汪思应; 关键词：蛋白质酪氨酸磷酸酶肥大细胞细胞增殖

SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突变促进组织白细胞浸润和器官损伤被引量：3: 2011年; 目的观察SHP-2D61G/+酪氨酸磷酸酶激活突变对组织白细胞浸润、细胞因子分泌及多器官损伤的影响。方法分别以SHP-2D61G/+激活突变敲入的模型小鼠和野生型C57BL/6小鼠为研究对象,ELISA法检测小鼠血清和白细胞培养上清液中IL-2及TNF-α浓度;采用常规组织切片和HE染色观察心、肺、脾等组织病理学改变;放射免疫法检测血清中丙氨酸转氨酶和心肌肌钙蛋白I的水平。结果 SHP-2D61G/+激活突变小鼠脾、肺组织中白细胞浸润较野生型对照小鼠明显增加,心肌肥大,出现明显炎症损伤型组织学变化;与野生型对照相比,突变小鼠血清及白细胞培养上清液中IL-2和TNF-α浓度均显著增加(P<0.01),血清丙氨酸转氨酶及心肌肌钙蛋白I水平亦显著增高(P<0.01)。结论 SHP-2D61G/+激活突变增强白细胞分泌炎症因子的能力,促进组织白细胞严重浸润和脾、肺、心等多器官损伤,进而导致多器官功能障碍。; 胡中倩汪心怡储著朗郑贤芳陈吉余科科李菲菲瞿成奎汪思应; 关键词：细胞因子分泌白细胞浸润多器官损伤

蛋白激酶CK2B的相互作用蛋白筛选被引量：1: 2007年; 目的研究与蛋白激酶CK2B发生相互作用的蛋白。方法应用酵母双杂交系统,以人蛋白激酶CK2B为诱饵,筛选成人肝cDNA文库,利用生物信息学分析,一对一酵母回复性杂交等提供的信息,筛除假阳性。结果经过酵母双杂交共获得211个克隆,经过验证分析,最终确定12个相互作用蛋白,其中3个是已知的,9个是新发现的相互作用。结论获得的9个新的相互作用蛋白可能揭示CK2新的作用机制。; 陈慧储著朗金超智王建杨晓明汪思应; 关键词：蛋白激酶类

肝细胞生成素205与细胞色素C的相互作用被引量：2: 2008年; 目的:应用酵母双杂交(yeast two hybrid,Y2H)和GST-Pull down技术鉴定肝细胞生成素205(hepatopoietin205,HPO205)与细胞色素C(cytochrome c,Cytc)间的相互作用.方法:采用PCR技术扩增HPO205和Cytc编码基因,分别将其构建Y2H质粒pDBLeu和pPC86的重组载体.应用Y2H技术将二者的重组质粒共转染酵母MaV203进行鉴定,同时用GST-Pulldown方法对其验证.结果:成功克隆HPO205和Cytc编码基因至Y2H载体和相应表达载体,包括pDBLeu-GRER、pDBLeu-CYCS、pPC86-GRER、pPC86-CYCS.经过Y2H鉴定发现,pDBLeu-GRER+pPC86-CYCS共转后能激活Ura和His两个报告基因,而pDBLeu-CYCS+pPC86-GRER共转则不能激活任何一个报告基因.GST-Pulldown实验显示,GST-CYCS能将HPO205沉淀下来,而GST空蛋白不能沉淀HPO205,证实HPO205与Cytc存在相互作用.结论:HPO205可能通过Cytc参与电子传递或/和细胞凋亡过程.; 储著朗王建杨永升唐刘君陈慧杨晓明汪思应; 关键词：细胞色素C 蛋白质相互作用酵母双杂交

SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突变导致小鼠髓系异常增殖被引量：5: 2011年; 目的:观察激活突变SHP-2酪氨酸磷酸酶是否参与髓系异常增殖的发生。方法:以野生型(WT)和SHP-2^(D61G/+)突变型C57BL/6小鼠为研究对象,计数外周血白细胞,比较脾大小,流式细胞术检测外周血及骨髓髓系来源细胞表面标志分子(Mac-1、Gr-1),并统计外周血Mac-1和Gr-1阳性细胞率及骨髓细胞中红系(Ter119)、髓系(Mac-1、Gr-1)、T(CD3)、B(B220)淋巴细胞系的阳性细胞率,观察骨髓造血干/祖细胞的集落形成(CFU)能力,Western blotting检测外周血白细胞经白细胞介素3(IL-3)和5μg/L,刺激后磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达水平。结果:SHP-2^(D61G/+)突变16周龄组小鼠较WT组外周血白细胞数增多(P<0.05),脾明显增大,同时外周血白细胞的Mac-1和Gr-1阳性细胞率增加(P<0.05),骨髓细胞中Mac-1和Gr-1的阳性细胞率也增多,但红系、淋巴细胞系的变化不明显。同时骨髓中粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)较正常对照组明显增加,白细胞经IL-3刺激后Akt和ERK蛋白磷酸化水平升高。结论:SHP-2D61G突变可能通过MAPK及PI3K的活化而导致小鼠髓系异常增殖。; 张薇杨金莲胡中倩卢艳敏储著朗余科科瞿成奎汪思应; 关键词：小鼠

EDAG-1基因真核表达载体的构建及其对细胞恶性生物学行为的影响: 2011年; 目的构建胚胎发育相关基因-1(EDAG-1)基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-EDAG-1,并检测其对细胞的恶性生物学行为的影响。方法应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法从白血病细胞株YAC-1中扩增到EDAG-1基因片段,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-EDAG-1。利用克隆PCR、限制性内切酶消化进行验证。将重组pcD-NA3.1(+)-EDAG-1真核表达载体和阴性对照的空载体pcDNA3.1分别转染到NIH3T3细胞和Ba/F3细胞中,应用软琼脂集落实验检测NIH3T3细胞转染前后的集落形成能力,流式细胞术检测Ba/F3细胞不依赖白介素-3(IL-3)抗凋亡能力以及其发生的机制。结果①扩增片段与预期片段大小相符,测序结果与GenBank公布一致,克隆成功,且鉴定证实pcDNA3.1(+)-EDAG-1真核表达载体构建成功。②转染真核表达载体pcDNA3.1(+)-EDAG-1后的NIH3T3细胞集落形成能力明显增高,而对照组不能形成集落。转染后Ba/F3细胞的不依赖IL-3抗凋亡能力明显提高。③在Ba/F3-EDAG细胞中,核因子κB的DNA结合活性明显高于对照细胞,而Stat3与Stat5的磷酸化未发生明显的变化。结论成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-EDAG-1,为进一步研究EDAG-1基因在白血病和甲状腺癌细胞中的功能奠定了基础。; 郑贤芳杨帆储著朗汪思应; 关键词：EDAG-1 克隆基因转染 NF-ΚB

“科研案例式”教学模式在病理生理学教学中的实践被引量：6: 2011年; 探讨病理学教学法。随着生命科学研究的不断进步,要求现代医学人才必须具有很强的自我学习、自我发展及很强的分析问题、解决问题和科学研究能力。因此,探讨在病理生理学教学中采用科研案例式教学法,该教学方法以疾病研究为出发点,以优秀科研论文案例为载体,由教师讲授学科原理形成过程与学生互动为主要方式。教学过程中培养了学生较强的科研意识、严谨的科学态度,较强的科研创造精神。; 李菲菲刘雷储著朗汪思应; 关键词：病理生理学科研论文

HPO205与COX6B1蛋白之间的相互作用被引量：2: 2012年; 目的以酵母双杂交(Y2H)和GST融合蛋白沉降技术(GST-Pull down)来探讨肝细胞生成素205(HPO205)与细胞色素C氧化酶(COX)6B1间存在的相互作用,为研究HPO205的功能提供依据。方法聚合酶链式反应(PCR)扩增HPO205和COX6B1的编码基因,分别构建至pDBLeu和pPC86的重组Y2H质粒载体。然后将二者的重组质粒共转染酵母MaV203进行Y2H鉴定,并用GST-Pull down技术对其验证。结果成功克隆HPO205和COX6B1编码基因至Y2H载体和相应表达载体。经过Y2H鉴定发现,pDBLeu-GRER和pPC86-COX6B1共转后能激活Ura、LacZ、His 3个报告基因;GST-Pull down实验显示,GST-COX6B1能沉淀HPO205。结论 HPO205可能通过与COX6B1相互作用影响线粒体氧化磷酸化过程。; 储著朗崔笑杨晓明汪思应; 关键词：蛋白质相互作用

应用酵母双杂交系统筛选MRP2胞内区相互作用蛋白被引量：1: 2007年; 目的应用酵母双杂交技术研究与多药耐药蛋白MRP2发生相互作用的蛋白。方法应用酵母双杂交系统,以人MRP2胞内区C末端220个氨基酸为诱饵,筛选成人肝cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白。利用生物信息学分析,一对一酵母回复性杂交等提供的信息,筛除假阳性。结果经过酵母双杂交共获得162个克隆,经过验证分析,最终确定3个无重复阳性克隆。结论获得的3个基因编码的蛋白可能揭示MRP2新的作用机制。; 刘涛金超智张翠莉陈慧储著朗王英杰杨晓明; 关键词：MRP2 酵母双杂交蛋白质相互作用

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