俞海青
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：天津大学化工学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 噬菌体展示短肽亲和配基的筛选及其亲和色谱的研究
- 该文主要针对使用噬菌体展示系统获得目标蛋白质的亲和配基和将该配基应用于目标蛋白质的亲和色谱分离进行了研究.首先以溶菌酶为目标蛋白质筛选七肽噬菌体展示库,在借鉴传统肽库筛选方法的基础上,建立了一种新型筛选方法—交替洗脱法,...
- 俞海青
- 关键词：噬菌体展示肽库胰岛素
- 文献传递
- 多肽亲和配基的固相合成及其亲和作用被引量：1
- 2006年
- 为了促使多肽亲和配基在实际分离研究中得到广泛应用,利用Fmoc固相合成法对从噬菌体展示肽库中筛选得到的与胰岛素具有高特异性亲和的七肽片段(HWWWPAS)进行了合成．在合成中发现,肽段序列中脯氨酸的存在会严重影响合成结果．去除脯氨酸后,目标产物的收率从0％提高到11．6％;同时,七肽序列中丙氨酸的存在也会影响合成效果．若将丙氨酸除去,合成收率会明显提高(达到76％),特别是将丙氨酸更换为谷氨酸产物的收率和纯度均可达到70％以上．利用固定化六肽片段(HWWWES)进行亲和吸附实验的结果表明,改造后的六肽配基与原先的七肽配基具有相似的亲和吸附效果．
- 董晓燕曹俊俞海青
- 关键词：氨基酸序列
- 噬菌体展示肽技术及其应用被引量：4
- 2004年
- 综述了噬菌体展示肽技术的基本原理,肽库构建和筛选的基本方法以及噬菌体展示肽库的应用现状和前景.
- 俞海青顾晓波
- 关键词：肽库生物学原理基因表达
- 交替洗脱法筛选高亲和力噬菌体肽被引量：3
- 2003年
- 以人胰岛素为靶蛋白从七肽展示库中筛选高亲和力噬菌体肽,在洗脱阶段采用酸性洗脱液和高浓度靶蛋白溶液进行4次交替洗脱,选择性回收高亲和力噬菌体肽。测定滴度计算回收率,ELISA法分别测定噬菌体洗脱液整体亲和力和噬菌体单克隆的结合特性并计算亲合率。洗脱步骤采用4次交替洗脱后,第二轮第4次噬菌体的回收率比第一轮增长了1 800倍,高亲和力噬菌体在洗脱液中所占比例也迅速提高,第二轮第4次洗脱液中达75％,在第三轮的各次洗脱液中几乎均达100％。建立了一种快速筛选高亲和力噬菌体肽的方法,改进后的筛选方法能使高亲和力噬菌体肽的筛选工作更为简便且效果显著。
- 俞海青顾晓波
- 从七肽噬菌体展示库中筛选蛋白质配基被引量：1
- 2004年
- 为了研究噬菌体展示技术的应用,以溶菌酶为靶分子从七肽噬菌体展示库中筛选蛋白质的高亲和力噬菌体配体,所筛选的亲和力最高的噬菌体的ELISA检测值A405nm可达0.634.通过比较亲和性噬菌体外源插入肽的DNA序列,认为基元HWWW是肽段与酶分子发生亲和的必需序列.此外,由于靶分子和高亲和性展示肽的等电点分别为11.2和6.74,因此在亲和环境中携带异种电荷,利于亲和吸附的发生,而此时低亲和性展示肽与靶分子携带同种电荷,阻碍了亲和吸附.同时,高亲和性肽段HWWPAS和与其有较高同源性的肽段HWTWWNL都有适中的疏水性,这有利于肽与靶分子表面的疏水位点相互作用从而产生亲和吸附.
- 俞海青董晓燕孙彦
- 关键词：溶菌酶配体
