黄鹂
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省教育部产学研结合项目“重大新药创制”科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 高通量生物反应器Tubespin培养CHO细胞条件的优化被引量：4
- 2011年
- 目的优化高通量生物反应器Tubespin培养CHO细胞的条件,提高蛋白表达量。方法采用Tubespin生物反应器在不同转速(160、180和200 r/min)和培养体积(5、10、20和35 ml)条件下振荡悬浮培养CHO细胞,测定不同条件下的气体交换速率、细胞密度、细胞活力及蛋白相对表达量,优化细胞培养条件。在最佳培养条件下,向培养基中分别添加30、60和90 mmol/L氯化钠,观察不同浓度氯化钠对细胞密度、细胞活力、摄氧率、溶氧及重组蛋白表达的影响。结果 Tubespin具有良好的气体交换速率,可满足高密度细胞培养的需要;经优化,细胞培养最佳条件为:摇床转速180 r/min,培养体积10 ml,此时细胞生长密度高,较快进入稳定期进行重组蛋白的表达。细胞培养72 h时向培养基中添加60 mmol/L氯化钠,能使重组蛋白的表达量提高1倍。结论优化了Tubespin培养CHO细胞的条件和氯化钠诱导浓度,提高了重组蛋白的产量,为大规模发酵生产奠定了基础。
- 谢奎雷云黄鹂王一婷熊盛
- 关键词：CHO细胞细胞培养技术氯化钠细胞密度蛋白表达
- 表达TNFR-Fc的重组CHO细胞旋转振荡培养工艺的放大及其活性检测被引量：2
- 2012年
- 目的观察在旋转振荡培养工艺放大条件下,表达肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(TNFR-Fc)的重组CHO细胞稳定性及其表达产物活性。方法采用旋转振荡悬浮培养CHO细胞,至对数生长期时,接种不同培养体积(10 ml、250 ml、1.5 L),于31℃继续培养,每日取样检测不同培养体积下的细胞密度、细胞活力、融合蛋白浓度;经MabSelect Sure亲和层析柱纯化融合蛋白,采用SDS-PAGE、ELISA、MTT法进行纯化产物的相对分子质量和纯度及结合活性、中和活性的检测。结果重组CHO细胞在旋转振荡培养条件下,由10 ml放大到1.5 L培养体积时,细胞的生长密度、活力及蛋白表达量均相对稳定;纯化的融合蛋白纯度在94%以上,相对分子质量约75 000,可与重组人TNFα特异性结合,其相对亲和力与标准品十分接近,且可中和重组人TNFα的细胞毒效应。结论明确了表达TNFR-Fc融合蛋白的重组CHO细胞旋转振荡培养工艺放大的可行性,为更大规模发酵生产奠定了基础。
- 王一婷雷云黄鹂谢奎杨依丽陈宝琼谢秋玲洪岸熊盛
- 关键词：生物反应器CHO细胞
- 抗人表皮生长因子受体2人源化单克隆抗体在中国仓鼠卵巢细胞中的表达、纯化及活性测定
- 2012年
- 目的筛选得到稳定表达重组人源化抗HER2单克隆抗体(rhHER2-mAb)的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)最优表达株,采用旋转振荡式培养及小规模放大,测定纯化后抗体蛋白的活性和亲和力。方法使用一次性旋转振荡生物反应器——Tube-spin对细胞株进行高通量筛选,然后使用摇瓶进行规模放大培养,利用Protein A亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE、HPLC检测产物的纯度,夹心ELISA检测产物的表达量,MTT检测产物的活性。结果通过比较,确定产量最高的#38细胞克隆株,经过规模放大培养得到足量细胞上清液,摇瓶表达量达到(152±20)mg.L-1。纯化后经检测目的蛋白的相对分子质量约为150×103,纯度在96%以上,与商品化的赫赛汀一致;活性检测和亲和力检测也显示其活性和亲和力与赫赛汀相当。结论通过细胞株筛选得到高表达细胞株,经旋转振荡式放大培养,成功纯化获得抗体蛋白,与商品化药物性质一致,为大规模旋转振荡培养发酵奠定基础。
- 黄鹂黎美香雷云王一婷谢奎杨依丽陈宝琼谢秋玲洪岸熊盛
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞活性检测
