黄桂雪
- 作品数：2 被引量：7H指数：1
- 供职机构：北京林业大学林学院森林培育与保护教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 拟南芥转录因子NF-YC的原核表达及多克隆抗体制备被引量：7
- 2012年
- 采用PCR方法扩增NF-YC基因得到其全长cDNA序列,并将其克隆至原核表达载体pET-48b中,在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导出分子量约为45 kD的融合蛋白,SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定表达产物。利用亲和层析技术对融合蛋白进行纯化,纯化后的目的蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。间接ELISA检测抗体效价大于1 62 500,Western blotting结果显示,该抗体可特异性识别NF-YC蛋白。
- 卫静李长江刘亚静黄桂雪张凌云
- 关键词：拟南芥转录因子原核表达多克隆抗体
- 青杄FKBP12基因原核表达和多克隆抗体的制备
- 2012年
- 目的:制备青杄FKBP12基因的多克隆抗体,为进一步分析FKBP12的蛋白定位、表达等提供基础。方法:采用PCR方法扩增FKBP12基因得到其全长cDNA序列,并将其克隆至原核表达载体pET-48b中,转化入BL21菌株。经IPTG诱导,表达了分子量约为33kD的重组蛋白,SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定表达产物。此蛋白经亲和纯化后,作为抗原注射新西兰兔,进行抗体制备。结果:成功获取了多克隆抗体,制备的FKBP12兔抗血清效价在1∶729 000以上,ELISA结果表明融合蛋白具良好的免疫原性。间接ELISA法检测纯化后抗体效价,表明纯化后抗FKBP蛋白兔多克隆抗体效价高,检测灵敏度为16ng/mL。结论:所制备的抗体能满足后续试验要求的效价值,为进一步研究提供基础。
- 黄桂雪王雨涵张凌云
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
