黄晓刚
- 作品数：10 被引量：37H指数：3
- 供职机构：武汉市医学科学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金武汉市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- APPβ分泌酶切割位点特异性单链抗体的制备和鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的制备针对人淀粉样蛋白前体(APP)β分泌酶切割位点的特异性单链抗体(ScFv),并进行鉴定。方法设计扩增单克隆抗体细胞株重链和轻链可变区基因片段VH和VL的引物,利用RT-PCR技术,从本室制备的抗人APPβ分泌酶切割位点单克隆抗体细胞株中扩增出VH和VL基因片段,然后通过重叠引物延伸法(SOE)将VH和VL基因拼接成ScFv基因片段,再将其亚克隆入原核表达载体pET-28a中,转化E.coli BL21(DE3)诱导表达,目的蛋白经镍柱纯化和复性后,用SDS-PAGE、ELISA和Western blot等方法对其检测分析。结果成功从一株抗人APPβ位点单克隆抗体细胞株2H10中扩增出VH和VL并拼接成ScFv片段,片段长744 bp,编码248个氨基酸。PCR、酶切和测序表明表达载体构建成功,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导可以表达出约29 ku的目的蛋白,主要为包涵体形式,经镍柱纯化和复性后,获得纯度达90%以上的ScFv蛋白,ELISA和Western blot检测表明可溶性ScFv可以与人APPβ分泌酶切割位点序列短肽和全长APP结合。结论成功构建并表达人APPβ分泌酶切割位点的特异性单链抗体,为进一步研究其生物学活性奠定基础。
- 黄巍周丽荣周婷孙红霞黄晓刚刘桥
- 关键词：Β分泌酶单链抗体阿尔采末病Β淀粉样蛋白
- 失眠病中医证候、病机与中医证候诊断标准探讨被引量：20
- 2017年
- 目的:研究失眠病中医证型分布规律和证候诊断标准。方法:采用中医"四诊"和统计学方法,对失眠病证候规律和证候诊断标准进行了验证研究。结果:共纳入506例失眠病例,根据证候诊断标准,证型按照出现频次分别为阴虚火旺型、心脾两虚型、肝郁化火型、痰热内扰型、心胆气虚型,同时出现了大量混合型证候。结论:失眠病以阴虚火旺、心脾两虚证型最为常见;失眠病基本病机为心肾不交;证候诊断标准,尚有完善之处,混合型证候在诊断标准中不可忽视。
- 韩铁军黄桦熊玮刘欣何向军黄晓刚
- 关键词：失眠证候病机
- 针刺结合中药外敷治疗寻常痤疮的临床研究
- 韩铁军王晓霞胡家瑞王夏青夏烽高琼卫静项红赵岩胡汉平熊瑛柴小玲孙莉刘桥黄晓刚
- 成果简介：寻常痤疮是一种青春期常见的毛囊皮脂腺的慢性炎症性疾病，表现为粉刺、丘疹、脓疱、结节、囊肿和瘢痕，好发于面、背、胸等富含皮脂腺的部位。有研究显示中国44.5%的青少年患有寻常痤疮，近65%的(16-17岁)学生既...
- 关键词：
- 关键词：针刺治疗中药外敷治疗中药制剂
- 乳健宁胶囊制备工艺的研究被引量：1
- 2014年
- 目的对乳健宁的制备工艺进行研究。方法观察挥发油不同时间的提取量,以浸膏得率和芍药苷为评价指标进行水煮正交试验。结果第1次加水10倍量,煎煮1.5 h,第2次和第3次加水8倍量,煎煮1 h,为最佳水煎煮工艺。结论以上研究结果可作为乳健宁的制备工艺。
- 周国运韩铁军张义生周少林刘桥黄晓刚刘欣万芳
- 武汉市新农合重性精神病按床日付费效果评价被引量：1
- 2016年
- 目的:评价武汉市新农合实施重性精神病患者按床日付费的支付方式改革所取得的效果,为政府健全和完善相关政策提供参考。方法:收集武汉市2010年-2015年新农合重性精神病患者住院费用的相关数据资料,应用SPSS 22.0软件进行分析。结果:实施支付方式改革后,重性精神病人例均医疗费用得到有效控制(t=6.34,P<0.01)、住院床日明显缩短(t=6.15,P<0.01),新农合实际补偿比明显提高(t=-13.81,P<0.01),新农合人均报销费用明显下降(t=2.54,P<0.05)。结论:武汉市新农合实行按床日付费的支付方式改革取得了良好效果,提高了医疗机构控费的主动性,完善了新农合政策。
- 黄晓刚刘星媛王晓刚杨璇周永康牛晓辉曾蕾
- 关键词：新农合按床日付费
- ADAM10真核表达载体的构建及其对MCF-7增殖迁移的影响被引量：1
- 2012年
- 目的构建ADAM10真核表达载体,观察稳定转染乳腺癌细胞MCF-7后对其增殖和迁移的影响。方法利用PCR技术扩增人ADAM10的基因片段,克隆入pcDNA3.1真核表达载体,阳性克隆通过PCR、酶切和测序鉴定。脂质体法将重组质粒转染MCF-7细胞,通过G418筛选出稳定转染ADAM10的细胞株,通过Western blot检测细胞ADAM10的表达,通过MTT法和Transwell法分别检测细胞的增殖和迁移变化。结果经PCR、酶切和测序鉴定证明ADAM10真核表达载体构建成功,Western blot结果显示稳定转染细胞的ADAM10蛋白高表达,MTT实验显示转染细胞增殖速度稍快于对照(P<0.05),Transwell结果显示转染细胞迁移能力比对照强(P<0.01)。结论成功构建ADAM10真核表达载体,稳定转染MCF-7细胞后可增强细胞的增殖和迁移,为进一步研究ADAM10生物学作用奠定基础。
- 黄巍李小鸥周丽荣黄晓刚刘桥
- 关键词：MCF-7细胞细胞迁移
- 在DH5α中拼接构建ADAM10全长真核表达载体的基因突变
- 2012年
- 目的:构建ADAM10真核表达载体,为进一步研究其生物学功能打基础。方法:将人ADAM10的上下两部分基因片段(分别为全长基因的1～910bp和911～2 247bp片段),依次与真核表达载体pcDNA3.1相连,以大肠杆菌DH5α或BL21(DE3)作为感受态宿主菌用于转化连接产物,拼接成全长的阳性克隆通过PCR、酶切和测序鉴定。结果:ADAM10下段基因与已正确连入上段的pcDNA3.1重组质粒拼接时,若用DH5α为感受态菌,则下半段出现碱基插入增加512bp,测序结果显示为ADAM10基因第1 531 bp～2 042 bp间的序列有紧邻的双份;若用BL21(DE3)为感受态,则无突变。结论:将ADAM10基因与pcDNA3.1真核表达载体依次拼接构建重组质粒时,以DH5α为宿主菌可出现基因序列增加的罕见突变,而以BL21(DE3)为宿主则无突变,由此成功构建ADAM10全长基因与pcDNA3.1的重组质粒。
- 黄巍李小鸥周丽荣黄晓刚刘桥
- 关键词：ADAM真核表达载体
- 淀粉样前体蛋白β位点单链抗体抑制β淀粉样肽的分泌被引量：1
- 2015年
- 目的观察淀粉样前体蛋白(APP)β位点单链抗体(sc Fv)对APP的α和β代谢的影响,为其作为APPβ分泌酶特异抑制剂奠定基础。方法以APPβ位点sc Fv 2H10基因序列为模板,通过PCR引入Igκ轻链信号序列和myc标签,与真核表达载体pc DNA3.1hyg(^+)相连,转染过表达人瑞典突变型淀粉样前体蛋白695(APP695)的CHO细胞株(APP695sw/CHO),经潮霉素B筛选出稳定转染细胞株,用夹心ELISA检测稳定转染细胞株培养上清中Aβ40和分泌型APPα(s APPα)的含量,并分别比较两者的变化。结果经PCR、酶切和测序鉴定证明,获得引入Igκ分泌信号和myc标签的APPβ位点sc Fv基因片段,且与真核表达载体正确相连。转染APP695sw/CHO细胞后,经潮霉素B筛选得到稳定转染株;Western blot法可检测到目的蛋白表达,ELISA结果显示,与对照相比,稳定转染细胞培养上清Aβ40分泌量约下降30.4%、s APPα水平上升23.1%。结论 APPβ位点sc Fv在抑制Aβ分泌的同时还可能有利于APP的α代谢,可作为β分泌酶高特异性抑制剂。
- 黄巍周丽荣李小鸥孙红霞周婷黄晓刚刘桥
- 关键词：淀粉样前体蛋白单链抗体Β淀粉样肽
- 乳腺增生病证候演变规律及证候诊断标准的探讨被引量：10
- 2011年
- 为探讨乳腺增生病的证候演变规律和证候诊断标准,参照乳腺增生病证候诊断标准和自拟混合型证候标准,采用中医"四诊",对乳腺增生病证候演变规律和证候诊断标准进行了验证研究。结果表明:出现了许多混合型证候类型;证候与病程有密切关系(P<0.05);痰瘀互结型组与肝郁气滞、冲任失调型组及混合型组在舌象、脉象方面有显著差异(P<0.05)。痰瘀互结型与混合型组主要表现为舌紫暗有瘀癍,而肝郁气滞型与冲任失调型组在舌象方面无显著差异,均表现为舌淡为主。4组证型在脉象方面亦均有显著差异。乳腺增生病证候诊断标准,尚有许多亟待完善之处,引入有价值的客观化指标和采取动态观察方法进行证候演变规律的研究,对于揭示乳腺增生病的证候本质,将极具意义。
- 韩铁军郑恩兰汪陆玲王晓刚刘桥黄晓刚叶方王俊丽
- 关键词：乳腺增生病证候
- 野生型和突变型APP695稳定转染CHO分泌Aβ40和Aβ42的比较被引量：1
- 2013年
- 目的:建立野生型和瑞典突变型淀粉样蛋白前体695(APP695)稳定转染CHO细胞株,比较两者分泌Aβ40和Aβ42的能力,为筛选β分泌酶抑制剂奠定基础。方法:以人淀粉样蛋白前体751(APP751)基因序列为模板,通过突变分别获得野生型APP695wt和瑞典突变型APP695sw序列,再连入真核表达载体pcDNA3.1,转染CHO细胞并经G418筛选出稳转细胞株,通过ELISA法检测培养上清中Aβ40和Aβ42的含量,然后检测APPβ位点抗体对Aβ分泌的影响。结果:获得了APP695wt和APP695sw序列,构建载体并稳定转染的CHO细胞株,可检测到两种目的蛋白均有表达,相对分子质量约为98kDa。ELISA法只能检测到APP695sw稳转细胞有高水平Aβ40和Aβ42产生,Aβ40的分泌量约是Aβ42的24.57倍,可达约14000pg/ml。APPβ位点抗体可降低Aβ分泌量,但不影响Aβ40/Aβ42的比值。结论:成功获得APP695wt和APP695sw稳定转染细胞株,其中后者高分泌Aβ40和A42,适用于β分泌酶抑制剂的筛选。
- 黄巍周丽荣李小鸥孙红霞周婷黄晓刚刘桥
- 关键词：稳定转染
