鲁伟
- 作品数：21 被引量：239H指数：9
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- NO对新生大鼠心肌细胞PKC活性的影响
- 2002年
- 利用培养新生大鼠心肌细胞 ,检测NO前体L -精氨酸 (L -arginine ,L -Arg)和NO供体硝普钠 (sodiumnitroprus side ,SNP)对PKC活性的影响 ,并探讨内、外源性NO在PKC激动剂佛波指 (phorbol 12 -myristate 13-acetate ,PMA)激活PKC中的作用 .实验结果表明 :培养基中加入L -Arg ,PKC活性呈剂量依赖性降低 ;用L -Arg进行预处理 ,30min后加入PMA ,PKC活性明显降低 ,与单纯PMA组相比有显著差异 ;NOS抑制剂L -NAME本身对基础状态PKC活性无明显影响 ,但可阻断L -Arg对上述 2个效应的影响 ;培养液中加入NO供体SNP ,PKC活性呈剂量依赖性降低 ;用SNP预处理心肌细胞 ,5min后加入PMA ,PKC活性与单纯PMA组相比有显著性差异 .以上结果表明 ,内、外源性NO均具有剂量依赖性抑制PKC活性的作用 ,PKC可能是NO对心肌细胞作用的胞内信号传导通路的关键部位或重要信号分子之一 ;L -Arg通过NOS先生成NO ,NO再对PKC起抑制作用 .
- 符史干吉丽敏谢协驹刘培庆潘敬运鲁伟
- 关键词：心肌细胞培养一氧化氮蛋白激酶C佛波酯
- 甘氨酸与多粘菌素B联用拮抗内毒素致热性及降多粘菌素B毒性的研究被引量：6
- 2000年
- 目的 :研究甘氨酸 (Gly)和多粘菌素B(PMB)联合应用对内毒素 (ET)的拮抗作用以及两者联用的毒性。方法 :(1)利用封闭群新西兰家兔发热模型 ,观察Gly和PMB联用对ET致热性的影响及其最佳组合比例 ,观察指标包括平均体温反应曲线、最大体温反应幅度、体温反应指数 ;(2 )利用LD50 观察Gly、PMB及两者联用对小鼠的毒性。结果 :(1)PMB、Gly对ET致热性有明显协同拮抗作用 (P <0 0 5 ) ;(2 )两者联合拮抗内毒素 (0 0 1μg)的最佳组合为PMB(30 0 0 0U) +Gly(15mg) ;(3)小鼠静脉给药PMB的LD50 为 6 0 6× 10 4 U/kg·w ,合剂 (组成为PMB30 0 0 0U∶Gly 15mg)中PMB的LD50 为 8 38× 10 4 U/kg·w ,剂量显著增大 (P <0 0 5 ) ,毒性明显下降。结论 :甘氨酸和多粘菌素B联合应用是增效降毒的。
- 鲁伟陆大祥王彦平李楚杰
- 关键词：甘氨酸多粘菌素B内毒素性发热毒性
- ERKs及细胞内游离钙在内皮素-1诱导心肌细胞肥大反应中的作用被引量：13
- 2001年
- 目的 :研究细胞外信号调节激酶 (ERKs)及细胞内游离钙 ([Ca2 + ]i)在内皮素 - 1 (ET - 1 )介导心肌细胞肥大反应中的作用及机制。方法 :利用培养的新生大鼠心肌细胞 ,①以蛋白合成速率、蛋白含量及细胞表面积为心肌肥大反应的指标 ;②用滤纸法测定ERKs活性 ;③用Fura - 2 /AM作为钙荧光指示剂测定心肌 [Ca2 + ]i浓度。结果 :①ET - 1浓度依赖性增加新生大鼠心肌细胞蛋白质含量和心肌细胞表面积、ERKs活性及 [Ca2 + ]i浓度 ,以上作用可被ETA 受体拮抗剂BQ1 2 3所完全抑制 ,被百日咳毒素 (PTX)部分抑制 ,而ETB 受体拮抗剂BQ788则无效 ;②ERKs激酶特异性抑制剂PD980 5 9可完全抑制ET - 1激活ERKs的作用 ,钙通道拮抗剂硝苯地平可明显抑制ET - 1介导的[Ca2 + ]i浓度增加 ,但二者皆仅部分抑制ET - 1介导的心肌细胞肥大反应 ;③蛋白激酶C(PKC)选择性抑制剂stau rosporine并不能明显抑制ET - 1介导的ERKs激活 ,但可抑制ET - 1介导的的 [Ca2 + ]i浓度增加及心肌细胞肥大反应。结论 :ET - 1主要通过ETA 受体并经PTX敏感的G -蛋白介导心肌细胞肥大反应 ,该作用至少涉及两条途径 :①通过PKC介导的心肌 [Ca2 + ]i浓度增加 ;②不通过PKC介导的ERKs激活。
- 鲁伟刘培庆徐江王庭槐龚素珍潘敬运
- 关键词：内皮缩血管肽类肥大蛋白激酶C
- 一氧化氮在血管紧张素Ⅱ激活蛋白激酶C中的作用被引量：9
- 2003年
- 实验在培养新生大鼠心肌细胞中检测NO前体L 精氨酸 (L Arg)和NO供体硝普钠 (SNP)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )激活蛋白激酶C (PKC)的作用 ,以探讨心肌细胞PKC水平的信号转导途径。实验结果如下 :(1)无血清DMEM培养心肌细胞 2 4h后加入AngⅡ ,PKC活性呈剂量依赖性增高 ;(2 )培养基中加入L Arg ,PKC活性呈剂量依赖性降低 ;(3 )用L Arg 10 0 μmol/L进行预处理 ,3 0min后分别加入AngⅡ 0 1μmol/L或PMA 10μmol/L ,PKC活性均明显降低 ,与单纯AngⅡ组和单纯PMA组相比均有显著性差异 ;用NOS抑制剂L NAME预处理后 ,再加入L Arg ,可明显阻断L Arg对上述两个效应的影响 ;(4)培养液中加入NO供体SNP ,PKC活性呈剂量依赖性地降低 ;(5 )用SNP 10 μmol/L预处理心肌细胞 ,5min后分别加入AngⅡ或PMA ,PKC活性分别与单纯AngⅡ和单纯PMA组相比均明显降低。以上结果表明 ,AngⅡ能剂量依赖性激活PKC ,而NO可剂量依赖性抑制PKC活性 ;NOS参与L Arg抑制AngⅡ或PMA激活PKC的作用。这些观察提示 ,NO抑制AngⅡ对心肌细胞的作用可能是通过抑制PKC活性实现的 ,PKC可能是NO和AngⅡ在心肌细胞内信号转导的交汇点 (crosstalk)。
- 符史干谢协驹吉丽敏刘培庆潘敬运鲁伟
- 关键词：心肌细胞培养一氧化氮蛋白激酶C
- MKP-1在血管紧张素Ⅱ导致心肌肥大反应中的调控作用被引量：8
- 2000年
- 本研究主要从丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶 1(MKP 1)角度 ,研究丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)信号途径在血管紧张素Ⅱ介导的新生大鼠心肌细胞肥大反应中的作用及调控机制。实验以心肌细胞蛋白合成速率、蛋白含量及细胞表面积作为心肌肥大反应的指标 ,以凝胶内MBP原位磷酸化测定MAPK活性 ,以免疫印迹法 (Westernboltting)分别测定MKP 1及磷酸化p44MAPK、p42MAPK蛋白表达。结果发现 :(1)AngⅡ (10 -7mol/L)处理 48h ,心肌细胞 3H 亮氨酸掺入率、蛋白含量及细胞表面积明显增加 ,AngⅡ增加 3H 亮氨酸掺入的作用可被血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1受体 )拮抗剂CV11974(10 -6mol/L)明显抑制 (抑制 85 % ) ,被MAPK激酶 (MEK)特异性抑制剂PD0 980 5 9(5× 10 -5mol/L)部分抑制 (抑制 32 5 % ) ;(2 )CV11974或PD0 980 5 9可明显抑制AngⅡ介导的磷酸化MAPK蛋白表达及MAPK酶活性 (以γ 32 P ATP掺入表示 ) ;(3)以磷酸化MAPK蛋白表达反映MAPK活性 ,可见AngⅡ处理心肌细胞5min ,MAPK活性即开始增加 ,30min左右达到高峰 ,2h后基本恢复正常 ;而MKP 1蛋白表达 30min即见增加 ,持续 2h以上 ;(4 )用放线菌素D (actinomycinD)处理心肌细胞 30min可明显抑制MKP 1的表达 ,同时使AngⅡ致磷酸化MAPK蛋白表达时间延长至 2h以上。
- 刘培庆鲁伟王庭槐潘敬运
- 关键词：MKP-1MAPK
- 新生鼠心室成纤维细胞条件培养液增加心肌细胞搏动频率的作用被引量：4
- 2000年
- 目的和方法 :利用细胞培养和RT PCR技术研究新生大鼠心脏成纤维细胞增加心肌细胞搏动频率的作用。结果 :成纤维细胞条件培养液在 48h内能明显增加心肌细胞的搏动频率 ,并具有时间依赖性和剂量依赖性 ,内皮素 1(ET 1)ETA 受体拮抗剂BQ12 3 能部分阻断成纤维细胞条件培养液增加心肌细胞搏动频率作用 ,而血管紧张素ⅡATl 受体拮抗剂CV 11974和α 肾上腺素受体拮抗剂Regitin却无此效果 :RT PCR的结果显示心室成纤维细胞、心肌细胞和皮肤成纤维细胞均有 ppET 1mRNA的表达 ,心室成纤维细胞中表达的丰度大于心肌细胞和皮肤成纤维细胞。百日咳毒素 (PTX)也能部分阻断成纤维细胞条件培养液增加心肌细胞搏动频率的作用。结论 :心室成纤维细胞能分泌ET 1等生物活性物质 ,对心肌细胞具有正性变时作用 ,同时提示分泌ET 1的功能并非心室成纤维细胞所特有 。
- 龚素珍刘培庆杨丹鲁伟潘敬运
- 关键词：成纤维细胞心肌细胞搏动频率ET-1
- 血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞肥大反应中磷酸化MAPK的作用被引量：2
- 2000年
- 【目的】本研究主要是从丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)激活及失活角度研究该信号途径在血管紧张素Ⅱ (an giotensinⅡ ,AngⅡ )介导的心肌细胞肥大反应中作用。【方法】实验分别以 :①心肌细胞蛋白合成速率作为心肌肥大反应指标 ;②磷酸化MAPK蛋白 (p44MAPK、p42MAPK)表达反映MAPK活性状态。【结果】①AngⅡ (0 .1μmol/L)处理心肌细胞 48h ,可使3H 亮氨酸掺入明显增加 ,该作用可被CV11974明显抑制 (抑制 85 % ) ,而PD0 980 5 9可部分抑制该反应 (抑制 32 5 % ) ;②AngⅡ (0 .1μmol/L)处理心肌细胞 5min ,磷酸化MAPK蛋白表达即开始增加 ,30min左右达到高峰 ,2h基本恢复正常 ,血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体 (AT1)拮抗剂CV11974(0 .1mmol/L)或MAPK激酶 (MEK)特异性抑制剂PD0 980 5 9(5 0 μmol/L)可明显抑制AngⅡ介导的磷酸化MAPK蛋白表达 (30min时分别下降 89%及 81% )。【结论】AngⅡ主要通过AT1受体激活MAPK及介导心肌肥大反应 ,抑制MAPK的激活可减轻AngⅡ介导的心肌肥大反应。MAPK通路激活是AngⅡ介导的心肌肥大反应重要机制。
- 刘培庆鲁伟王庭槐潘敬运
- 关键词：丝裂原活化蛋白激酶心肌细胞磷酸化
- 17β-雌二醇下调血管平滑肌内皮素A型受体的表达被引量：9
- 2001年
- 为进一步探讨雌激素对心血管的保护作用 ,实验在双侧卵巢去势大鼠模型和培养的血管平滑肌细胞(VSMCs)上 ,观察 17β 雌二醇 (E2 )对血管反应性及VSMCs增殖的影响 ,以RT PCR和Westernblot检测内皮素受体(ETAR)的表达。结果显示 :去势雌性大鼠血管对内皮素 (ET 1)的反应性明显增高 ,ETAR特异性受体阻断剂BQ12 3能完全阻断ET 1对VSMCs增殖的影响 ,E2 能明显抑制ET 1对VSMCs增殖的作用 ,RT PCR结果显示E2 能抑制ETARmRNA的表达 ,Westernblot进一步证实E2 能抑制ETAR蛋白表达 ;E2 受体阻断剂Tamoxifen能部份抑制ET 1对VSMCs的增殖及ETAR的mRNA和蛋白的表达。以上结果提示 :ET 1促VSMCs增殖的效应主要是由ETAR介导的 ,雌激素能通过下调ETAR来抑制ET 1对VSMCs促增殖的作用和血管对ET 1的反应 。
- 王庭槐谈智刘培庆鲁伟杨丹潘敬运
- 关键词：雌激素雌激素受体血管平滑肌细胞内皮素内皮素受体
- 新生大鼠心室成纤维细胞条件培养液的促心肌细胞肥大作用被引量：14
- 2000年
- 利用新生大鼠心室成纤维细胞条件培养液孵育心肌细胞 ,证实成纤维细胞条件培养液能明显增大心肌细胞的表面积 ,增加心肌细胞的蛋白含量和 [3H] 亮氨酸 ( [3H] Leu)的掺入 ,上述作用以第 3天的条件培养液作用最强 ,具有剂量依赖性。ETA 受体拮抗剂BQ12 3能部分阻断成纤维细胞条件培养液促进心肌细胞肥大的作用 ,而AT1受体拮抗剂CV11974和α 肾上腺素受体拮抗剂regitin却无此效果。结果提示 :成纤维细胞条件培养液中含有促使心肌细胞肥大的物质 ,这些物质可能是内皮素 (ET 1)等。百日咳毒素 (PTX)和staurosporine也能部分阻断成纤维细胞条件培养液促进心肌细胞肥大作用 。
- 龚素珍刘培庆鲁伟符史干潘敬运
- 关键词：成纤维细胞心肌细胞肥大
- 17β-雌二醇抑制内皮素诱导的血管平滑肌细胞增殖作用被引量：13
- 2001年
- 目的和方法 :利用组织块贴壁法进行大鼠VSMC培养 ,胰蛋白酶分散细胞法传代 ,实验采用第 4～ 6代细胞。采用氚 胸腺嘧啶核苷 ([3 H] TdR)掺入和细胞计数来作为VSMC增殖的指标 ,以RT PCR的方法检测ETAR的表达 ,观察 17β 雌二醇 (E2 )对内皮素 1(endothelin l,ET 1)介导的血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖反应以及对内皮素A型受体(ETAR)表达的影响。结果 ::ETAR特异性拮抗剂BQ12 3能完全阻断ET 1介导的VSMC增殖反应 ;E2 可明显抑制ET 1促进VSMC增殖的作用。RT PCR结果显示E2 能抑制ETAR的表达 ,12h时抑制作用最为明显 ;E2 受体阻断剂Tamoxifen亦能部分抑制ET 1对VSMC的增殖及ETAR的mRNA的表达。结论 :ET 1促进VSMC增殖作用主要通过ETAR介导的 ,雌激素可通过抑制ETARmRNA表达来发挥对ET
- 谈智杨丹鲁伟潘敬运王庭槐
- 关键词：血管平滑肌细胞内皮素内皮素受体细胞增殖
