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鉴别猪伪狂犬病病毒强毒与疫苗毒双重PCR检测方法的建立被引量：13: 2014年; 根据猪伪狂犬病病毒(PRV)gE、gH基因序列,设计合成了2对特异性引物,分别建立gE和gH基因的单项PCR扩增方法。通过对PCR扩增条件的优化,建立了鉴别PRV强毒和疫苗毒的双重PCR检测方法,即利用一次PCR反应,从强毒株基因组中可同时扩增出2条大小分别为429 bp(gE基因)、355 bp(gH基因)的特异性片段,从弱毒株DNA中仅扩增出1条大小为355 bp的片段,而猪圆环病毒2型和猪细小病毒DNA扩增结果均为阴性。敏感性试验表明,所建立的双重PCR检测方法最低有效检测量为1×102TCID50/0.1 mL。该方法适合对PRV强毒和疫苗毒的快速鉴别诊断。; 顾阳高晓云程琨潘鑫龙崔保安陈红英; 关键词：伪狂犬病毒双重PCR 强毒株疫苗株

猪伪狂犬病病毒河南株的分离及鉴定被引量：7: 2017年; 采用PCR方法对河南不同地市采集的疑似猪伪狂犬病病毒(PRV)感染病料进行PCR检测,PCR阳性的病料经处理后,接种ST细胞,分离到15株PRV。分离PRV传至第3代后,在ST细胞上均能出现较稳定的细胞病变,传代至第7代时病毒滴度在10^(5.6) TCID_(50)/0.1 mL^10~9 TCID_(50)/0.1 mL,且均能扩增出特异性gE基因片段(429bp)。将分离PRV接种6周龄雌性昆明小鼠,引起皮炎及小鼠先后死亡。以NY株为例进行理化特性试验,结果表明,对分析纯氯仿、胰酶敏感;对酸、碱及热有较强抵抗力,pH3.0盐酸处理1h、pH11.0 NaOH处理1h、56℃水浴处理1h,才能使其失活;对紫外线处理30min,仍具有感染性。经电镜观察,可看到大小均一、近似圆形的病毒粒子,大小为110~150nm,囊膜表面有呈放射状排列的纤突,表明所分离病毒均为PRV野毒株。; 潘鑫龙高晓云张宇杨兴武杨明凡崔保安陈红英; 关键词：猪伪狂犬病毒

猪伪狂犬病毒原阳株gE全基因的克隆与序列分析被引量：2: 2014年; 根据GenBank已经公布的猪伪狂犬病病毒(PRV)gE全基因序列,设计合成了1对引物,利用PCR技术对猪伪狂犬病河南原阳病毒株相关的毒力基因gE进行了扩增,将特异性DNA条带进行回收,回收的PCR产物克隆到pMD?18-T载体中,并转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞。运用蓝白斑筛选,挑取阳性菌落,提取重组质粒进行PCR、酶切和测序鉴定。测序结果表明,该序列全长为1 862 bp,将该基因核苷酸序列与从GenBank下载读取的马来西亚株(FJ176390)、爱尔兰Nia-1株(FJ605136)、湖北Ea株、韩国株(AY249861)、美国Becker株(AY368490)、广东SH株(EF55242 7)、西班牙株(EU502923)、河南焦作株(EU561349)等的gE基因进行同源性分析比较,得出的核苷酸同源性分别为99.4%、97.9%、99.7%、99.6%、98.0%、99.7%、97.8%、99.0%。通过对其序列进行的测定,有利于进一步从分子水平研究PRV在某些地区的流行、变异规律,也为PRV的诊断和预防奠定了基础。; 郭小参高晓云陈红英杜根成方剑玉虞德屏徐祥臣张立昌; 关键词：伪狂犬病毒 GE基因

猪细小病毒河南分离株全基因组克隆及序列分析: 引言猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一,主要表现为胎儿和胚胎的感染和死亡。PPV又常同猪伪狂犬病毒(PRV)、乙型脑炎病毒(JEV)、猪圆环病毒(PCV)、猪瘟(...; 陈龙彪高晓云冯亚琼陈红英崔保安郭官鹏马世杰吴宇阳; 关键词：PPV 全基因克隆

猪α干扰素基因在干酪乳酸杆菌中的表达: 粒pMD 18-IFN-cα扩增出猪α干扰素(IFN-α)基因成熟蛋白序列,克隆到含有信号肽的质粒pUCK-SP中,获得重组质粒pUCK-SP-IFN-α.再将NdeⅠ和EcoRⅠ双酶切获取的SP-IFN-α片段插入到同...; 马世杰李坤高晓云付朋飞郭晓庆崔保安陈红英; 关键词：基因表达

表达猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因的重组猪伪狂犬病病毒的免疫原性被引量：13: 2014年; 【目的】为研制预防猪圆环病毒II型(PCV2)感染的重组伪狂犬病病毒(PRV)活载体疫苗。【方法】将PCV2 ORF2基因插入到PRV通用载体pG中,利用脂质体LipofectamineTM2000试剂盒将重组转移质粒pGO与猪PRV弱毒HB98株DNA共转染猪睾丸(ST)细胞,通过3轮蚀斑纯化重组病毒。将重组病毒、商品化PCV2灭活苗及DMEM培养液分别免疫6周龄雌性昆明小鼠,4周后加强免疫1次,首免后第8周用PCV2强毒NY株对小鼠进行攻毒。【结果】成功获得表达ORF2基因的重组病毒PGO,首免重组病毒后小鼠体内抗PCV2的ELISA抗体水平很低,二免后小鼠PCV2特异的ELISA抗体水平明显升高,并且重组病毒组能够激发PCV2特异的淋巴细胞增殖效应。攻毒试验表明重组病毒组和PCV2灭活疫苗组均能有效抵抗PCV2强毒攻击。【结论】表明表达ORF2基因的重组病毒PGO具有良好免疫原性。; 钞安军付朋飞郭晓庆高晓云崔保安陈红英; 关键词：猪圆环病毒II型 ORF2基因伪狂犬病病毒重组病毒免疫效力

一种猪伪狂犬病毒株: 本发明公开了一种猪伪狂犬病毒株，其特征在于：猪伪狂犬病毒（Herpesviridae）毒株，CCTCC？NO：V201314。本发明将PRV/HN2012株传至第7代，并对第7代病毒进行了病毒滴度TCID<Sub>50<...; 陈红英杨明凡高晓云崔保安杨兴武张宇徐朋丽

表达猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因的重组猪伪狂犬病病毒的免疫原性: 将PCV2 ORF2基因插入到PRV通用载体pG中,利用脂质体LipofectamineTM 2000试剂盒将重组转移质粒pGO与猪PRV弱毒HB98株DNA共转染猪睾丸(ST)细胞,通过3轮蚀斑纯化重组病毒。将重组病毒...; 陈红英崔保安钞安军付朋飞郭晓庆高晓云; 关键词：ORF2基因伪狂犬病病毒重组病毒免疫效力

猪IFN-α基因在干酪乳酸杆菌中的表达及反应活性鉴定: 2015年; 【目的】构建能够稳定表达猪α-干扰素(IFN-α)成熟蛋白的重组干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei CECT5276),为将其作为口服疫苗来提高动物机体免疫力奠定基础。【方法】从质粒pMD18-IFN-α扩增出猪IFN-α成熟蛋白基因,再将其定向克隆到干酪乳酸杆菌整合型表达载体pMJ67的lac启动子下游,得到重组质粒pMJ67-IFN-α,电穿孔转化干酪乳酸杆菌。抽提干酪乳酸杆菌基因组DNA,进行PCR扩增及测序鉴定。采用半定量RTPCR检测猪IFN-αmRNA在干酪乳酸杆菌中的转录水平;采用Western blot对重组干酪乳酸杆菌菌体进行分析,检测其表达产物的活性;用双抗体夹心ELISA法确定最适的乳糖诱导质量浓度。【结果】PCR扩增获得了501bp的IFN-α,成功构建了重组质粒pMJ67-IFN-α,转化干酪乳酸杆菌后获得了重组乳酸杆菌。半定量RT-PCR结果显示,IFN-αmRNA在诱导16h时表达水平最高;Western blot分析表明,构建的重组干酪乳酸杆菌成功表达出了相对分子质量约19ku的重组蛋白,其可与鼠抗猪IFN-α抗体发生特异性反应。ELISA结果表明,当乳糖诱导质量浓度达到8g/L时,猪IFN-α成熟蛋白的表达量达到最大,为1.3μg/L。【结论】将猪IFN-α成熟蛋白基因整合到干酪乳酸杆菌基因组中,构建的重组乳酸杆菌能够稳定表达猪IFN-α成熟蛋白。; 马世杰李坤付朋飞郭晓庆高晓云崔保安陈红英; 关键词：电力系统

表达猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因的重组猪伪狂犬病病毒的免疫原性: 将PCV2 ORF2基因插入到PRV通用载体pG中,利用脂质体LipofectamineTM2000试剂盒将重组转移质粒pGO与猪PRV弱毒HB98株DNA共转染猪睾丸(ST)细胞,通过3轮蚀斑纯化重组病毒。将重组病毒、...; 陈红英崔保安钞安军付朋飞郭晓庆高晓云; 关键词：灭活疫苗基因重组猪伪狂犬病病毒免疫效力; 文献传递

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高晓云

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