韩捷
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中国医科大学附属第一医院更多>>
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- 腹透液相关浓度葡萄糖对体外腹膜间皮细胞的影响(英文)被引量：6
- 2007年
- 目的研究腹透液相关的三种浓度葡萄糖(1.5%、2.5%、4.25%)对体外培养的腹膜间皮细胞凋亡及其形态的影响。方法胰蛋白酶消化法从腹膜组织中分离间皮细胞,建立体外培养模型。采用Hoechst33258荧光染色法及流式细胞仪技术测定体外培养的腹膜间皮细胞在腹膜透析液相关浓度葡萄糖作用下的凋亡率;采用透射电子显微镜技术观察高浓度葡萄糖对体外培养的腹膜间皮细胞形态学的影响。结果Hoechst33258荧光染色法和流式细胞仪结果显示:与对照组比较,1.5%、2.5%、4.25%葡萄糖均能引起明显的腹膜间皮细胞的凋亡(P<0.05),三种浓度葡萄糖组间也有显著的差异(P<0.05),4.25%甘露醇能引起明显的凋亡(P<0.01),4.25%葡萄糖与4.25%甘露醇比较,前者能引起明显的凋亡(P<0.05);与正常对照组比较,1.5%葡萄糖分别作用于腹膜间皮细胞24h、72h、120h,各时间组均出现明显的凋亡(P<0.05)。腹膜间皮细胞的凋亡率与葡萄糖浓度和作用时间呈正相关(r>0.7,P<0.05)。透射电子显微镜观察4.25%葡萄糖作用72h后大鼠腹膜间皮细胞的形态变化:细胞表面的微绒毛倒伏、脱失;细胞质内出现线粒体空泡样变;细胞核内的染色质浓缩、边集;出现凋亡小体。结论腹膜透析液相关的三种浓度葡萄糖和4.25%的甘露醇均能引起腹膜间皮细胞的凋亡;葡萄糖诱导的腹膜间皮细胞凋亡具有浓度和时间依赖性;葡萄糖引起的细胞凋亡不仅与其渗透压有关,还与葡萄糖代谢有关;葡萄糖引起的细胞形态改变有:腹膜间皮细胞表面的微绒毛倒伏、缺失;细胞质内的线粒体出现空泡样变;细胞核内出现染色质浓缩、边集的改变。
- 李志明马健飞赵钢马黎樊怡贾海燕韩捷
- 关键词：腹膜透析葡萄糖腹膜间皮细胞凋亡
- 脂多糖、高糖对人腹膜间皮细胞葡萄糖转运蛋白1表达的影响
- 目的观察脂多糖(LPS)对高糖环境下培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的影响, 探讨腹透失超滤的发生机理。方法1．采用胰蛋白酶消化法原代培养HPMCs;2．间接免疫荧光法进行HPMCs的...
- 韩捷马健飞樊怡贾海燕马黎张玉侠冯江敏王力宁
- 文献传递
- d-α-生育酚对高糖诱导的人腹膜间皮细胞己糖激酶表达的调节作用被引量：3
- 2006年
- 目的探讨d-α-生育酚对高糖诱导的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelium cell,HPMC)己糖激酶(hexokinase,HK)及其同工酶表达的调节作用。方法胰蛋白酶消化法分离培养HPMC,免疫细胞化学染色及扫描电镜对培养细胞进行鉴定。第3代HPMC分为正常对照组(0．1％葡萄糖,相当于5．5 mmol／L)、高糖组(0．5％、1．0％、1．5％、2．5％、4．25％的葡萄糖)及d-α-生育酚干预组。培养24 h后,利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶耦联比色法和温度敏感实验检测HK及其同工酶的活性;免疫细胞化学染色检测HK蛋白的细胞内定位;Western印迹及逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)法分别检测HK蛋白及mRNA的表达。己糖激酶法检测培养液内葡萄糖的消耗量作为细胞对葡萄糖净利用指标。结果角蛋白和波形蛋白在HPMC的胞质呈阳性表达,扫描电镜可见细胞表面有丰富的微绒毛。1．5％、2．5％及4．25％葡萄糖组,HK总活性上调,与正常对照组(20．6±2．5)U／g蛋白比较,相对活性分别为115．4％、129．1％及155．2％,并以HKⅡ增加为主(P<0．05)。50 mmol／L d-α-生育酚干预组,HK总活性下调,是2．5％葡萄糖组的82．1％(P=0．001),其中HKⅡ受抑为主;d-α-生育酚干预后HPMC对葡萄糖的净利用由(25．3±3．9)mmol／L降至(17．3±2．1)mmol／L(P= 0．018)。正常状态下,HKⅡ蛋白在胞质呈棕色淡染;随葡萄糖浓度的增加(葡萄糖≥1．5％),HKⅡ在核周积聚、浓染,呈珠链样;d-α-生育酚预处理后,HKⅡ在核周的积聚变淡。HKⅡ蛋白及mRNA的表达与HKⅡ活性同步。结论d-α-生育酚抑制了高糖对HKⅡ活性、蛋白及mRNA表达上调的作用,并减少HPMC对葡萄糖的净利用;可能成为增加腹膜透析超滤的手段之一。
- 樊怡马健飞丁红张靖华韩捷贾海燕王力宁
- 关键词：己糖激酶腹膜
- 高糖对腹膜间皮细胞p38MAPK和ERK1／2表达的影响
- 目的腹透液中葡萄糖及其代谢产物(氧化剂、糖基化终末产物)是导致腹膜结构功能进行性损害的主要因素,其致病机制与细胞内最主要的信号转导通路一丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase...
- 樊怡马健飞丁红张靖华韩捷贾海燕王力宁
- 文献传递
- 脂多糖对人腹膜间皮细胞葡萄糖转运蛋白-1表达的影响
- 2007年
- 目的:研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人腹膜间皮细胞(HPMC)葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)表达的影响。方法:胰蛋白酶消化法进行HPMC的原代培养及传代;免疫组化法(ABC)用于GLUT-1的鉴定和半定量分析;采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测GLUT-1的mRNA表达;己糖激酶法用于葡萄糖浓度的测定,计算出培养液内葡萄糖的减少量作为细胞对糖的净利用。结果:(1)体外培养的HPMC细胞角蛋白用间接免疫荧光染色为绿色荧光,此为HPMC的特征;(2)LPS可以使正常糖浓度下(0.1%)HPMCGLUT-1的蛋白和mRNA的表达增加(P<0.05),呈时间和浓度依赖,并伴有细胞对葡萄糖净利用增加,其中作用24h后,浓度为100μg/ml的LPS使GLUT-1的蛋白和mRNA表达最大(P<0.01),而100μg/ml组LPS作用24h后,GLUT-1的蛋白和mRNA的表达最大(P<0.01),作用36h有所下降;(3)高糖条件下(4.25%),LPS可以使GLUT-1的蛋白和mRNA表达增加,与高糖组和正常对照相比有统计学差异(P<0.05)。结论:LPS可以使HPMCGLUT-1表达和葡萄糖摄取增加,这种作用在高糖条件下更为显著。这为研究和防治腹膜炎时腹透失超滤提供了线索。
- 韩捷马健飞樊怡贾海燕
- 关键词：脂多糖葡萄糖转运蛋白1葡萄糖腹膜间皮细胞
