韦祖樟 作品数:175 被引量:334 H指数:9 供职机构: 广西大学动物科学技术学院 更多>> 发文基金: 广西壮族自治区自然科学基金 国家自然科学基金 广西大学科研基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 文化科学 更多>>
广西地区腹泻仔猪呼肠孤病毒的感染及序列分析 2024年 为了解广西地区腹泻仔猪中哺乳动物呼肠孤病毒(MRV)的感染情况及主要流行毒株,应用套式RT-PCR对广西部分地区2020-2022年173份腹泻猪样品进行检测,并选取部分阳性样品进行S 1基因扩增与分析,进一步了解广西地区MRV主要流行毒株的基因特征。结果显示,2020-2022年173份样品MR总阳性率为18%(32/173),各年阳性率分别为29.6%、9.9%和33%。获得1株S 1基因全长序列,序列比对结果发现该序列与其他MRV S 1基因序列的核苷酸同源性为43.4%~97.9%,氨基酸同源性为26.1%~97.8%;遗传进化分析显示,获得的毒株序列为MRV3型,与其他猪源MRV3型毒株ZJ2013、IND/MZ/3013789/reo在同一分支上,同属于谱系Ⅳ。结果表明广西地区猪群存在一定程度的MRV感染,为进一步防控广西腹泻猪群中MRV的流行提供科学依据。 隆美金 陆颖 李茂宁 易春华 廖梦娟 余科辰 覃一峰 陈樱 陈樱 黄伟坚 韦祖樟猪肠病毒G型实时定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:2 2020年 为建立一种能够准确、快速地鉴别猪肠病毒G型的诊断方法,本研究参考猪肠病毒G型的3D基因序列设计1对特异性引物,扩增片段预计大小约为104 bp,将3D基因片段克隆到pMD18-T载体上的阳性重组质粒作为标准品,建立猪肠病毒G型的实时定量PCR检测方法,并应用到临床样品的检测。研究结果显示,该方法设计的引物具有高度的特异性;标准曲线的Cq值与质粒标准品模板在2.92×10^8copies/μL^2.92×10^2copies/μL范围内,呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-4.023;组内与组间重复性试验显示变异系数很小,在0.26%~1.57%之间。该方法的最低检测限量可达2.92×10 copies/μL。使用本方法对2017-2019年广西部分地区的猪场临床腹泻粪便样品进行检测,猪肠病毒G型阳性检出率为18.42%,说明广西部分地区的猪场存在猪肠病毒G型的感染。本研究成功建立了猪肠病毒G型实时定量PCR检测方法,可用于猪肠病毒G型感染的临床检测。 杨春杰 米雪 刘雪婷 蹇慧 刘芳 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康关键词:实时定量PCR 塞内卡病毒广西分离株的初步分离与鉴定 被引量:2 2022年 为了确诊一例疑似SVA感染的临床病例,本试验将从广西地区某猪场母猪和肥育猪鼻及蹄部采集的出现典型水泡性病变的猪水泡液进行无菌处理后接种PK-15细胞,连续传代培养,通过细胞病变、RT-PCR扩增、基因序列测定、TCID_(50)和间接免疫荧光等方法对分离得到的病毒进行鉴定。结果显示:该病毒株在PK-15细胞上生长良好,可见明显细胞病变;接种PK-15细胞进行TCID_(50)测定,病毒滴度达到10^(-6.75)/mL;间接免疫荧光试验结果显示,接种第4代细胞培养物的BHK-21细胞出现特异的绿色荧光;扩增和测定了VP1基因序列后进行同源性及遗传进化分析,发现该毒株与Senecavirus病毒属中的病毒成员同源性最高,与之前2017年报道的广东分离株SVA-CH-GDYS02-2017和SVA-CH-GDLZ01-2017位于较近的进化分支内。以上结果表明,已成功从样品中分离到了SVA,且该毒株可以在PK-15和BHK-21细胞上进行增殖。本研究成功分离到一株SVA,为后续塞内卡病毒的诊断和疫苗研制提供试验材料。 牛晨霞 王豪 农作荣 全东群 曾悦 任同伟 王玉旭 王景隆 刘畅 陈樱 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟一规模养猪场PRV诊断与预防措施 为对北海某规模化猪场的送检猪只进行疫病诊断,我们对送检小猪通过临床观察、病理解剖分析、分子生物学和血清学等方法进行诊断.通过临床和病理解剖初步诊断该猪场发生猪伪狂犬病.PCR方法进一步鉴定出病料组织中的伪狂犬病毒,并通过... 李清清 谢欣 王豪 韦祖樟关键词:伪狂犬病 病理诊断 疫病防治 广西猫杯状病毒全基因组序列测定及其遗传进化分析 被引量:2 2022年 为了掌握广西猫杯状病毒(FCV)的流行情况及其变异规律。本研究于2018年3月至2019年9月采集疑似FCV鼻拭子59份,其中阳性检出率49.2%(29/59)。将阳性病料接种CRFK细胞,成功分离获得一株FCV毒株,命名为NN01-19。为深入了解其遗传进化规律和分子特征,本研究通过RT-PCR方法扩增获得该毒株的全基因组序列,并对其ORF2基因进行了遗传进化和序列分析。结果表明,NN01-19毒株基因组全长7709 bp,其中ORF2基因全长2010 bp。遗传进化分析发现该毒株与广西早期分离株GX01-13同属基因I群,但核苷酸和氨基酸同源性仅为77.9%和86.5%。其中,超变区(E区)抗原线性表位新增T448A、T450G、G451Q和T454S四个突变位点。重要的是,该区域还发生了V430T的突变,符合VS-FCV致病性氨基酸突变特点。本研究为深入了解FCV的流行特点及其变异规律提供了参考依据,同时也为今后防控FCV提供了重要的理论基础。 丁仰保 何剑桥 刘林林 余良政 崔柏杨 周华波 韦祖樟 欧阳康 黄伟坚 陈樱关键词:全基因组 ORF2基因 遗传进化分析 我国猪场PCV2a和PCV2b共感染情况的调查与分析 近年来我国猪场中猪圆环病毒2型的阳性率有所增加,给我国的养猪业带来了巨大的挑战.本研究主要是为了调查和分析我国猪2型圆环病毒两型间的共感染情况.我们采用差异PCR方法对2008年到2009年间采集的经普通PCR鉴定为PC... 翟少伦 龙进学 韦祖樟 张建武 岳城 禤雄标 袁世山关键词:共感染 同源重组 文献传递 牛星状病毒神经型与肠道型ORF2蛋白原核表达及间接ELISA的建立与初步应用 2022年 通过GenBank中登录号(神经型BufAstV-GX-NN-ORF2-14、肠道型BufAstV-GX-NN-ORF2-12)合成神经型ORF2-14-1与肠道型ORF2-12-1基因序列,运用PCR技术扩增神经型ORF2-14与肠道型ORF2-12目的片段的基因并克隆到pET-32a(+)载体,成功构建了重组质粒神经型pET-32a-ORF2-14与肠道型pET-32a-ORF2-12,经鉴定正确后转化BL21(DE3)感受态细胞中成功诱导表达,纯化后的重组蛋白利用SDS-PAGE、Western blot进行鉴定。以纯化的神经型pET-32a-ORF2-14与肠道型pET-32a-ORF2-12重组蛋白为诊断抗原,成功建立牛星状病毒(bovine astrovirus,BoAstV)神经型与肠道型的间接ELISA抗体检测方法。运用建立的间接ELISA对2019-2020年广西部分地区采集的712份牛血清进行BoAstV抗体的检测,结果显示肠道型共检出170份抗体阳性血清,BoAstV抗体阳性率为23%;神经型共检出124份抗体阳性血清,BoAstV抗体阳性率为17%;其中,2种型共同感染阳性率占总份数10%。结果表明,本试验成功建立了对BoAstV的神经型与肠道型分型检测方法,为临床上对BoAstV分型检测提供良好的检测方法打下基础。 刘海峰 罗宇航 李明洋 刘腾 董覃婷 吴翠兰 彭昊 钟舒红 韦祖樟 李军 黄伟坚 苏接瑜关键词:重组蛋白 间接ELISA 原核表达 水牛匈爱病毒结构蛋白VP1的截短表达及多克隆抗体的制备 2023年 为了制备水牛匈爱病毒(BufHuV)结构蛋白VP1截短基因的多克隆抗体,将病毒的VP1截短基因克隆至原核表达载体pET-32a(+)获得重组质粒pET-32a-BufHuV-VP1,重组质粒转化至BL21感受态细胞(DE3)后诱导表达,VP1截短蛋白的分子质量约为31.5 ku,主要以包涵体的形式表达。以纯化好的重组蛋白免疫昆明小鼠以制备多克隆抗体,通过Western-blot与IFA鉴定其特异性。结果显示,制备的小鼠多克隆抗体能与纯化的VP1重组截短蛋白和感染BufHuV的细胞表达的VP1特异性结合,表明多克隆抗体具有良好的反应原性和特异性。水牛匈爱病毒VP1截短重组蛋白及其多克隆抗体的成功制备为研究BufHuV致病机制、VP1蛋白功能以及血清学检测方法的建立提供了材料基础。 邹延林 张广欣 罗宇航 朱鑫玥 刘黄豪 莫筱可 谢江 王小玲 陈樱 欧阳康 韦祖樟 覃一峰 潘艳 黄伟坚关键词:结构蛋白 原核表达 多克隆抗体 一种PRRSV逆转录环介导等温扩增试剂盒及其应用 本发明公开了一种猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(PRRSV)的可视化逆转录环介导等温扩增试剂盒及其应用,该试剂盒包括RT-LAMP引物、2×反应缓冲液、EM、荧光目视检测试剂、超纯水和PRRSV RNA模板,所述的RT-LA... 李军 冯世文 韦祖樟 潘艳 彭昊 陈泽祥 胡帅 杨威 钟舒红 谢宇舟 禤雄标 马春霞 陶立 柳锋 谢永平 许力干 韦志锋 秦若甫 兰美益文献传递 广西巴马小型猪IFN-Y基因的克隆和序列分析 被引量:5 2005年 将猪外周淋巴细胞进行体外培养 ,在刀豆球蛋白A(conA)刺激培养 1 5h后 ,提取培养淋巴细胞总RNA ,应用RT PCR技术扩增广西巴马小型猪Y 干扰素 (IFN Y)基因 ,并克隆到PMD1 8 T载体上 ,进行测序。测序结果表明 ,扩增的cDNA全长 558个碱基 ,包含 50 1个碱基开放阅读框架 ,编码 1 66个氨基酸 ,分子量为 1 9.42ku。此cDNA与人、牛、山羊、马、狗和鼠的IFN Y基因核苷酸比较 ,同源性分别为 74.9% ,86.5% ,86.9% ,81 % ,58.7%和 63 .3 % ,与其它猪种的IFN Y基因核苷酸比较同源性为 1 0 0 %。 韦祖樟 黄伟坚 卢桂娟 孙文博 颜建华 罗廷荣 陆芹章关键词:巴马小型猪 测序